有意暴露于颊环境的 PTFE-d 屏障在引导骨再生中对牙槽嵴保护的影响

研究设计 这项临床实验室、平行、随机、前瞻性和对照研究将使用微生物学、放射学、以患者为中心的结果、分子生物学、放射学、以患者为中心的结果，确定有意暴露于颊环境的 PTFE-d 屏障在引导骨再生到牙槽嵴保留中的影响骨相关标记物和种植体稳定性的模式。

实验组

局部麻醉后，在要拔除的牙齿周围做一个沟内切口，并分离粘骨膜瓣，以充分暴露邻近牙槽的 3 mm 牙槽嵴。 之后，以微创方式进行脱位和拔牙手术，必要时使用骨膜切开器、杠杆和拔牙器。 随后，用生理盐水冲洗，然后使用特定软件，患者将被随机分配接受以下治疗之一：

GBR 组：提取后，用剪刀定制 PTFE-d 膜（CytoplastTM Ti-250 Ti-250 Ti-250 Titanium-Reinforced, Anterior Narrow 12 mm x 24 mm, Osteogenics, Lubbock, TX, USA）并在承窝上进行调整，距离超过三毫米它的边距。 然后，在 Molt 分离器的帮助下，将膜从骨膜下插入颊瓣和腭瓣下。 执行最小皮瓣反射以稳定膜，该膜有意保持暴露于口腔环境。 在缝合之前，确认膜在肺泡上的被动稳定性，以及膜中没有褶皱或皱纹。 然后在预提取位置接近皮瓣并用交叉缝线缝合，旨在增加膜的稳定性，使用 PTFE 4-0 线（Cytoplast PTFE，CS0618PREM，Osteogenics，Lubbock，TX，USA）。

Non-GBR组：拔牙后不做进一步治疗。 然后将皮瓣重新定位并用 5.0 尼龙线（Ethicon，Jonhson's Jonhson，São José dos Campos）缝合。

安装和维护适用于相邻牙齿的临时粘合修复体，直到植入种植体的那一刻。 在所有实验组中，使用含 0.12% 氯己定的漱口水对龈上生物膜进行为期 4 周的控制。 术前抗炎治疗（地塞米松 4 mg，单次给药，术前 1 小时）和术后镇痛药（安乃近钠 500 mg，每 4 小时一次，持续 3 天）。 指示患者仅在上述期间出现疼痛的情况下服用镇痛药，并指示记录摄入的药物量。 手术前 1 小时用 2 克阿莫西林进行预防性全身抗菌治疗，术后 7 天同样用药，每 8 小时 500 毫克。

15天后拆线。 在 GBR 组中，膜在 28 天后被移除，在麻醉下（Hoffmann 等人 2007 年，Carbonell 等人 2014 年，Cheon 等人 2017 年），借助于牵引运动轻轻移除镊子。

在整个研究期间，每月对所有患者进行监测，以观察牙周维护并加强卫生指导。

植入物和假体植入 拔牙三个月后，无论实验组如何，患者都接受了牙科植入物。 因此，它们被塑造用于康复计划，并且手术指南被制作用于种植体植入手术。 在手术过程中，患者接受局部麻醉，并制作粘骨膜瓣以进入和充分暴露牙槽骨。 之后，进行钻孔以插入植入物。 在两组中，均进行了单阶段种植，即刻将临时修复体置于种植体上。 所有手术均由同一操作员 (EKM) 执行。

在研究的实验阶段之后，安装最终假肢。 外科手术的缝合线采用 5.0 尼龙线（Ethicon，Jonhson's Jonhson，São José dos Campos），7 天后拆除。 术后 7 天，用 0.12% 氯己定漱口水控制龈上生物膜。 术前抗炎治疗（地塞米松 4 mg，单次给药，术前 1 小时）和术后镇痛药（安乃近钠 500 mg，每 4 小时一次，持续 2 天）。

临床检查 同一检查员 (SB) 执行所有临床测量。 为了执行检查者内部校准，选择了 15 名展示牙科植入物的非研究人员。 检查员在 24 小时内两次测量所有个体的种植体周围探诊深度。 类内相关性计算为 95% 的再现性。

使用北卡罗来纳州/Colorvue 探针（Hu-Friedy，芝加哥，伊利诺伊州，美国），在基线（拔牙和 GBR 之前）和 3 个月随访时，在研究中包括的牙种植体的四个部位测量了以下参数 - up：探诊深度（PPD/mm），即牙周沟/袋底部到牙周缘的距离；临床附着水平（CAL/mm），即从牙釉质接合处到牙周袋底部的距离。

微生物群评估 对存在于屏障（GBR 组）和修复区域（非 GBR 组）的生物膜的微生物评估在提取 3 天后和 28 天后（在 GBR 组移除屏障时）进行).

微生物分析将通过 Illumina HiSeq 平台的 16S 基因测序技术完成，该平台可以确定同一样本中微生物种群的多样性和丰度。 该评估将在功能基因组学集中多用户实验室进行。

评估患者报告的参数 在拔牙后 3、7、14、28、35 和 42 天，将使用问卷评估与术后发病率和生活质量相关的症状的以患者为中心的参数，基于 100 毫米的水平线（视觉模拟标尺；VAS）。

与破骨细胞/胚细胞生成相关的标记物的分子评估 在植入牙科植入物的外科手术中，在准备床的铣削过程中，将使用适用于真空泵/手术抽吸器的一次性骨收集器去除骨组织。 部分骨组织样本将用于基因表达分析，另一部分用于与破骨细胞/胚细胞生成相关的不同生物标志物的免疫酶分析。 所有与破骨细胞/胚细胞标记物相关的分子分析都将在总部机构的牙科研究实验室进行。 收集的所有活组织检查将储存在特定溶液中以避免 RNA 降解（RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX）。

基因表达分析 RNA 提取：将取出的组织适当包装在溶液中以避免 RNA 降解（RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX）。 总 RNA 将通过 TRIZOL 试剂方法（Gibco BRL，Life Technologies，Rockville，MD，USA）分离。 首先，将RNAlater溶液吸出，然后将粉碎的样品放入TRIZOL试剂中，震荡30秒，室温孵育5分钟。 这段时间后，加入氯仿（Sigma，St. Louis，MO，USA），搅拌并在 4oC 的温度下以 10,000 rpm 离心 15 分钟。 将含水部分转移到另一个试管中，向其中加入异丙醇、摇动、在-20℃的温度下孵育20分钟并以与上述相同的方式离心。 在这个过程之后，将形成一个颗粒，用冷冻的 75% 乙醇洗涤并在室温下干燥。 将 RNA 样品重悬于约 50 微升用焦碳酸二乙酯 (DEPC) 处理过的水中，并储存在 -70oC 下。 使用分光光度计测定 RNA 的浓度。

将进行 DNAase 处理并进行实时 PCR (RT-PCR)。GAPDH（参考基因）、转化生长因子 (TGF-β)、骨唾液蛋白 (BSP) 和 I 型胶原蛋白 (COL-I) 的引物) 将借助专门为 LightCycler（Roche Diagnostics GmbH，德国曼海姆）设计引物而开发的 pGBRram 进行设计。 通过使用阳性和阴性对照检查熔解曲线来检查所有引物的特异性。 反应曲线将根据设备制造商建议的公式确定。 对于每次“运行”，水将用作阴性对照，反应产物将使用制造商自己的 pGBRram（LightCycler 相对定量软件 - Roche Diagnostics GmbH）进行定量。 GAPDH 将用作值标准化的参考基因（管家）。

免疫酶分析 在植入植入物时收集的部分骨组织样本将被放置在含有 400μL 磷酸盐缓冲盐水 (PBS) 和 0.05% Tween-20 的无菌试管中。 所有样品将储存在-20°C。 然后，将组织称重、匀浆并溶解在 PBS 中至终浓度为 100mg 组织/mL。 Vortex 搅拌 10 分钟后，将每个样品以 370g 离心 5 分钟，收集上清液并储存在-70°C 备用。 为避免蛋白酶活性，整个过程将在 4°C 下进行。Dickkopf (DKK1)、硬化蛋白 (SOST)、肿瘤坏死因子 (TNF-α)、骨保护素 (OPG)、骨钙素 (OC)、骨桥蛋白 (OPN) ( HBNMAG-51K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA），NF-κB 结合激活受体（RANKL）（HRNKLMAG-31K-01, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA），骨连接蛋白（OSN）和抗酒石酸酸性磷酸酶（ TRAP) (HCMBMAG-22K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA)，将使用 Luminex / MAGpix 技术进行测定，该技术允许确定同一样品中不同标记物的存在并以绝对方式量化其浓度。

为此，将按照制造商的说明，在上述高灵敏度面板的帮助下，在 96 孔板中进行分析。样品将一式两份进行评估，所得值的平均值将用于计算每个标记的浓度。

患者的断层扫描分析 CT 扫描将在拔牙后立即和 3 个月后（种植体植入前）进行。 将通过 Dental Slice 软件分析在不同时期进行的断层扫描检查，以了解拔除和保留牙槽窝后的骨丢失率，包括垂直和水平方向。