Impact de la barrière PTFE-d intentionnellement exposée à l'environnement buccal dans la régénération osseuse guidée pour la préservation de la crête

Conception de l'étude Cette étude clinique-laboratoire, parallèle, randomisée, prospective et contrôlée déterminera l'impact de la barrière PTFE-d intentionnellement exposée à l'environnement buccal dans la régénération osseuse guidée jusqu'à la préservation de la crête, en utilisant des résultats microbiologiques, radiographiques, centrés sur le patient, moléculaires modèle de marqueurs osseux et stabilisation de l'implant.

Groupes expérimentaux

Après anesthésie locale, une incision intrasulculaire a été pratiquée autour de la dent à extraire et un lambeau mucopériosté a été détaché pour une exposition adéquate de 3 mm de la crête alvéolaire adjacente à l'alvéole. Ensuite, les procédures de luxation et d'extraction dentaire ont été réalisées de manière peu invasive, en utilisant si nécessaire des périotomes, des leviers et des extracteurs. Par la suite, une irrigation avec une solution saline a été effectuée puis, à l'aide d'un logiciel spécifique, les patients seront répartis au hasard pour recevoir l'un des traitements suivants :

Groupe GBR : Après extraction, la membrane PTFE-d (CytoplastTM Ti-250 Titanium-Reinforced, Anterior Narrow 12 mm x 24 mm, Osteogenics, Lubbock, TX, USA) a été personnalisée avec des ciseaux et ajustée sur l'emboîture, dépassant trois millimètres de ses marges. Ensuite, la membrane a été insérée en sous-périosté sous les lambeaux vestibulaire et palatin à l'aide du détacheur Molt. Une réflexion minimale du lambeau a été réalisée pour stabiliser la membrane, qui a été maintenue intentionnellement exposée à l'environnement buccal. Avant suture, la stabilité passive de la membrane sur l'alvéole a été confirmée, ainsi que l'absence de plis ou de rides dans la membrane. Les lambeaux ont ensuite été approchés en position de pré-extraction et suturés avec des sutures croisées, visant à augmenter la stabilité de la membrane, avec du fil PTFE 4-0 (Cytoplast PTFE, CS0618PREM, Osteogenics, Lubbock, TX, USA).

Groupe non-GBR : Après l'extraction, aucun autre traitement n'a été effectué. Les lambeaux ont ensuite été repositionnés et suturés avec du fil de nylon 5.0 (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos).

Des prothèses temporaires adhésives adaptées aux dents adjacentes ont été installées et maintenues jusqu'au moment de la pose des implants. Le contrôle du biofilm supragingival a été réalisé avec des bains de bouche de 0,12% de chlorhexidine pendant une période de 4 semaines dans tous les groupes expérimentaux. Un traitement anti-inflammatoire préchirurgical (dexaméthasone 4 mg, dose unique, 1 heure avant l'intervention) et des antalgiques postopératoires (dipyrone sodique 500 mg, toutes les 4 heures, pendant 3 jours) étaient indiqués. Les patients ont été invités à prendre des médicaments analgésiques uniquement en cas de douleur pendant la période décrite ci-dessus, en étant chargés d'enregistrer la quantité de médicaments ingérés. Un traitement antimicrobien systémique prophylactique a été effectué 1 heure avant les interventions chirurgicales avec 2 grammes d'amoxicilline et le même médicament sera prescrit pendant 7 jours dans la période postopératoire, 500 mg toutes les 8 heures.

Les sutures ont été enlevées après 15 jours. Dans le groupe GBR, la membrane a été retirée après la période de 28 jours, sous anesthésie (Hoffmann et al. 2007, Carbonell et al. 2014, Cheon et al. 2017), en étant retirée doucement avec le mouvement de traction à l'aide d'un pince à épiler.

Tous les patients ont été suivis mensuellement, tout au long de la période d'étude, pour observer l'entretien parodontal et renforcer les consignes d'hygiène.

Pose d'implants et de prothèses Trois mois après l'extraction, quel que soit le groupe expérimental, les patients ont reçu des implants dentaires. Par conséquent, ils ont été moulés pour la planification de la rééducation et des guides chirurgicaux ont été conçus pour être utilisés dans la chirurgie de pose d'implants. Lors de l'intervention chirurgicale, les patients ont été soumis à une anesthésie locale et des lambeaux mucopériostés ont été réalisés pour l'accès et l'exposition adéquate de l'os alvéolaire. Ensuite, un forage a été effectué pour insérer les implants. Dans les deux groupes, des implants en un temps ont été réalisés, avec mise en place immédiate de prothèses provisoires sur implants. Toutes les chirurgies ont été réalisées par le même opérateur (EKM).

Après la phase expérimentale de l'étude, les prothèses définitives ont été installées. Les sutures des interventions chirurgicales ont été réalisées avec du fil de nylon 5.0 (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos) et il a été retiré après 7 jours. Le contrôle du biofilm supragingival a été réalisé avec des bains de bouche de 0,12% de chlorhexidine pendant une période de 7 jours après la chirurgie. Un traitement anti-inflammatoire préchirurgical (dexaméthasone 4 mg, dose unique, 1 heure avant l'intervention) et des antalgiques postopératoires (dipyrone sodique 500 mg, toutes les 4 heures, pendant 2 jours) étaient indiqués.

Examen clinique Le même examinateur (SB) a effectué toutes les mesures cliniques. Pour effectuer le calibrage intra-examinateur, 15 personnes non participantes présentant des implants dentaires ont été choisies. L'examinateur a mesuré la profondeur de sondage péri-implantaire de tous les individus deux fois sur une période de 24 heures. La corrélation intra-classe a été calculée comme une reproductibilité de 95 %.

À l'aide d'une sonde de Caroline du Nord/Colorvue (Hu-Friedy, Chicago, IL, États-Unis), les paramètres suivants ont été mesurés sur quatre sites d'implants dentaires inclus dans l'étude au départ (avant l'extraction et la ROG) et à 3 mois de suivi. vers le haut : profondeur de sondage (PPD/mm), qui correspond à la distance entre le bas du sulcus/poche parodontal et la marge parodontale ; Niveau d'attache clinique (CAL/mm), qui était la distance entre la jonction ciment-émail et le fond de la poche parodontale.

Évaluation du microbiome Des évaluations microbiologiques du biofilm présent sur les barrières (Groupe GBR) et dans la zone de réparation (Groupe non GBR) ont été faites après 3 jours d'extraction et après 28 jours (au moment du retrait de la barrière dans le groupe GBR ).

L'analyse microbiologique se fera grâce à la technique de séquençage du gène 16S par la plateforme Illumina HiSeq, qui permet de déterminer la diversité et l'abondance de la population microbienne dans un même échantillon. Cette évaluation sera réalisée au Laboratoire Centralisé Multi-Utilisateurs de Génomique Fonctionnelle.

Évaluation des paramètres rapportés par le patient L'évaluation des paramètres centrés sur le patient concernant les symptômes liés à la morbidité et à la qualité de vie dans la période postopératoire sera effectuée après 3, 7, 14, 28, 35 et 42 jours d'extraction, à l'aide de questionnaires , basée sur une ligne horizontale de 100 mm (échelle visuelle analogique ; EVA).

Evaluation moléculaire des marqueurs liés à l'ostéoclaste / blastogénèse Dans la procédure chirurgicale de pose d'implants dentaires, lors du fraisage pour préparer le lit, le tissu osseux sera prélevé à l'aide d'un collecteur d'os jetable adapté à la pompe à vide / aspirateur chirurgical. Une partie de l'échantillon de tissu osseux sera utilisée pour l'analyse de l'expression des gènes et une autre partie pour l'analyse immunoenzymatique de différents biomarqueurs liés à l'ostéoclaste/blastogénèse. Toutes les analyses moléculaires liées aux marqueurs ostéoclastes / blastogenèse seront effectuées au Laboratoire de recherche dentaire de l'Institution siège. Toutes les biopsies collectées seront stockées dans une solution spécifique pour éviter la dégradation de l'ARN (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX).

Analyse de l'expression génique Extraction d'ARN : Les tissus retirés seront correctement emballés dans une solution pour éviter la dégradation de l'ARN (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX). L'ARN total sera isolé par la méthode du réactif TRIZOL (Gibco BRL, Life Technologies, Rockville, MD, USA). Dans un premier temps, la solution de RNAlater sera aspirée et l'échantillon broyé sera ensuite placé dans le réactif TRIZOL, agité pendant 30 secondes et incubé pendant 5 minutes à température ambiante. Après cette période, du chloroforme (Sigma, St. Louis, MO, USA) sera ajouté, agité et centrifugé à 10 000 rpm pendant 15 minutes à une température de 4oC. La portion aqueuse sera transférée dans un autre tube auquel de l'isopropanol sera ajouté, secouée, incubée pendant 20 minutes à une température de -20oC et centrifugée de la même manière que décrit ci-dessus. Après ce processus, une pastille sera formée, qui sera lavée avec de l'éthanol à 75 % réfrigéré et séchée à température ambiante. Les échantillons d'ARN seront remis en suspension dans environ 50 µl d'eau traitée au diéthylpyrocarbonate (DEPC) et stockés à -70 oC. La concentration d'ARN sera déterminée à l'aide d'un spectrophotomètre.

Un traitement avec la DNAase sera effectué et une PCR en temps réel (RT-PCR) sera effectuée. Des amorces pour GAPDH (gène de référence), le facteur de croissance transformant (TGF-β), la sialoprotéine osseuse (BSP) et le collagène de type I (COL-I ) sera conçu à l'aide d'un pGBRram développé spécifiquement pour concevoir des amorces pour LightCycler (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Allemagne). Toutes les amorces seront vérifiées pour leur spécificité en vérifiant la courbe de fusion à l'aide de contrôles positifs et négatifs. Le profil de réaction sera déterminé selon la formule suggérée par le fabricant de l'équipement. Pour chacune des "séries", l'eau sera utilisée comme contrôle négatif, et le produit des réactions sera quantifié à l'aide du propre pGBRram du fabricant (LightCycler Relative Quantification Software - Roche Diagnostics GmbH). GAPDH sera utilisé comme gène de référence (housekeeping) pour la normalisation des valeurs.

Analyse immunoenzymatique Une partie de l'échantillon de tissu osseux prélevé au moment de la pose de l'implant sera placée dans des tubes stériles contenant 400 μl de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) avec 0,05 % de Tween-20. Tous les échantillons seront conservés à -20°C. Ensuite, le tissu sera pesé, homogénéisé et dissous dans du PBS à une concentration finale de 100mg de tissu/mL. Après agitation au Vortex pendant 10 minutes, chaque échantillon sera centrifugé à 370g pendant 5 minutes, le surnageant sera collecté et conservé à -70°C jusqu'à utilisation. Pour éviter l'activité protéasique, toute la procédure sera réalisée à 4 ° C. Dickkopf (DKK1), Sclerostin (SOST), Tumor necrosis factor (TNF-α), Osteoprotegerin (OPG), Osteocalcin (OC), Osteopontin (OPN) ( HBNMAG-51K, Millipore Corporation, Billerica, MA, États-Unis), récepteur activateur de liaison NF-κB (RANKL) (HRNKLMAG-31K-01, Millipore Corporation, Billerica, MA, États-Unis), ostéonectine (OSN) et phosphatase acide résistante au tartrate ( TRAP) (HCMBMAG-22K, Millipore Corporation, Billerica, MA, USA), sera déterminée à l'aide de la technologie Luminex/MAGpix, qui permet de déterminer la présence et de quantifier de manière absolue la concentration de différents marqueurs dans le même échantillon.

A cet effet, les analyses seront réalisées en plaques 96 puits, à l'aide des panels haute sensibilité mentionnés ci-dessus, en suivant les instructions du fabricant. Les échantillons seront évalués en double et la moyenne des valeurs obtenues servira à calculer les concentrations de chaque marqueur.

Analyse tomographique Les tomodensitogrammes des patients seront obtenus immédiatement après l'extraction et 3 mois plus tard (avant la pose de l'implant). Les examens tomographiques effectués aux différentes périodes seront analysés pour le taux de perte osseuse après extraction et préservation de l'alvéole, à la fois verticalement et horizontalement, grâce au logiciel Dental Slice.