Impact van PTFE-d-barrière die opzettelijk is blootgesteld aan de bucale omgeving bij geleide botregeneratie tot behoud van richels

Onderzoeksopzet Dit klinisch-laboratorium, parallelle, gerandomiseerde, prospectieve en gecontroleerde onderzoek zal de impact bepalen van een PTFE-d-barrière die opzettelijk wordt blootgesteld aan de bucale omgeving bij geleide botregeneratie tot behoud van de richel, met behulp van microbiologische, radiografische, patiëntgerichte uitkomsten, moleculaire geklets van botgerelateerde markers en implantaatstabilisatie.

Experimentele groepen

Na lokale anesthesie werd een intrasulculaire incisie gemaakt rond de te trekken tand en werd een mucoperiostale flap losgemaakt om 3 mm van de alveolaire top naast de alveolus voldoende bloot te leggen. Daarna werden procedures voor dislocatie en tandverwijdering uitgevoerd op een minimaal invasieve manier, indien nodig met behulp van periotomen, hefbomen en extractoren. Vervolgens werd irrigatie met een zoutoplossing uitgevoerd en vervolgens, met behulp van specifieke software, worden patiënten willekeurig toegewezen aan een van de volgende behandelingen:

GBR Group: Na extractie werd het PTFE-d-membraan (CytoplastTM Ti-250 Titanium-Reinforced, Anterior Narrow 12 mm x 24 mm, Osteogenics, Lubbock, TX, VS) op maat gemaakt met een schaar en aangepast over de koker, meer dan drie millimeter van zijn marges. Vervolgens werd het membraan subperiostaal onder de buccale en palatinale flappen ingebracht met behulp van de Molt-detacher. Minimale flapreflectie werd uitgevoerd om het membraan te stabiliseren, dat opzettelijk werd blootgesteld aan de orale omgeving. Voor het hechten werd de passieve stabiliteit van het membraan over de alveolus bevestigd, evenals de afwezigheid van plooien of rimpels in het membraan. De flappen werden vervolgens benaderd in de pre-extractiepositie en gehecht met gekruiste hechtingen, met als doel de stabiliteit van het membraan te vergroten, met PTFE 4-0-draad (Cytoplast PTFE, CS0618PREM, Osteogenics, Lubbock, TX, VS).

Niet-GBR-groep: na extractie werd geen verdere behandeling uitgevoerd. De flappen werden vervolgens verplaatst en gehecht met 5.0 nylondraad (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos).

Tijdelijke adhesieve prothesen aangepast aan aangrenzende tanden werden geplaatst en onderhouden tot het moment van plaatsing van het implantaat. De supragingivale biofilmcontrole werd uitgevoerd met mondspoelingen van 0,12% chloorhexidine gedurende een periode van 4 weken in alle experimentele groepen. Preoperatieve anti-inflammatoire therapie (dexamethason 4 mg, enkele dosis, 1 uur voor de procedure) en postoperatieve analgetica (natriumdipyron 500 mg, elke 4 uur, gedurende 3 dagen) waren geïndiceerd. Patiënten werden geïnstrueerd om pijnstillende medicatie alleen in te nemen in geval van pijn tijdens de hierboven beschreven periode, en werden geïnstrueerd om de hoeveelheid ingenomen medicatie te registreren. Profylactische systemische antimicrobiële therapie werd 1 uur vóór chirurgische ingrepen uitgevoerd met 2 gram amoxicilline en dezelfde medicatie zal worden voorgeschreven gedurende 7 dagen in de postoperatieve periode, 500 mg om de 8 uur.

Hechtingen werden na 15 dagen verwijderd. In de GBR-groep werd het membraan na de periode van 28 dagen onder narcose verwijderd (Hoffmann et al. 2007, Carbonell et al. 2014, Cheon et al. 2017), voorzichtig verwijderd met de tractiebeweging met behulp van een pincet.

Alle patiënten werden gedurende de hele studieperiode maandelijks gecontroleerd om parodontaal onderhoud te observeren en hygiëne-instructies te versterken.

Implantaten en prothesen Plaatsing Drie maanden na de extractie kregen de patiënten, ongeacht de experimentele groep, tandheelkundige implantaten. Daarom werden ze gevormd voor revalidatieplanning en werden er chirurgische gidsen gemaakt om te gebruiken bij de implantatie-operatie. Tijdens de chirurgische ingreep werden patiënten onderworpen aan lokale anesthesie en werden mucoperiosteale flappen gemaakt voor toegang tot en adequate blootstelling van het alveolaire bot. Daarna werd er geboord om de implantaten in te brengen. In beide groepen werden implantaten in één fase uitgevoerd, met onmiddellijke plaatsing van voorlopige prothesen op implantaten. Alle operaties werden uitgevoerd door dezelfde operator (EKM).

Na de experimentele fase van het onderzoek werden de definitieve prothesen geplaatst. De hechtingen van de chirurgische procedures werden uitgevoerd met 5.0 nylondraad (Ethicon, Jonhson's Jonhson, São José dos Campos) en werden na 7 dagen verwijderd. De supragingivale biofilmcontrole werd uitgevoerd met mondspoelingen van 0,12% chloorhexidine gedurende een periode van 7 dagen na de operatie. Preoperatieve anti-inflammatoire therapie (dexamethason 4 mg, enkele dosis, 1 uur voor de procedure) en postoperatieve analgetica (natriumdipyron 500 mg, elke 4 uur, gedurende 2 dagen) waren geïndiceerd.

Klinisch onderzoek Dezelfde examinator (SB) voerde alle klinische metingen uit. Om de intra-examinatorkalibratie uit te voeren, werden 15 niet-onderzoekspersonen gekozen die tandheelkundige implantaten presenteerden. De onderzoeker mat de peri-implantaire sondediepte van alle individuen tweemaal binnen een periode van 24 uur. De intra-klasse correlatie werd berekend als 95% reproduceerbaarheid.

Met behulp van een North Carolina/Colorvue-sonde (Hu-Friedy, Chicago, IL, VS) werden de volgende parameters gemeten op vier plaatsen van de tandheelkundige implantaten die in het onderzoek waren opgenomen bij baseline (vóór extractie en GBR) en na 3 maanden follow- omhoog: sondediepte (PPD/mm), de afstand van de onderkant van de parodontale sulcus/pocket tot de parodontale marge; Clinical Attachment Level (CAL/mm), de afstand van de cementglazuurverbinding tot de onderkant van de parodontale pocket.

Microbioomevaluatie Microbiologische beoordelingen van de aanwezige biofilm op de barrières (GBR-groep) en in het reparatiegebied (niet-GBR-groep) werden uitgevoerd na 3 dagen extractie en na 28 dagen (op het moment van verwijdering van de barrière in de GBR-groep ).

De microbiologische analyse zal worden uitgevoerd via de Sequencing-techniek van het 16S-gen door het Illumina HiSeq-platform, waarmee de diversiteit en overvloed van de microbiële populatie in hetzelfde monster kan worden bepaald. Deze evaluatie zal worden uitgevoerd in het Centralized Multi-User Laboratory of Functional Genomics.

Evaluatie van door de patiënt gerapporteerde parameters De beoordeling van patiëntgerichte parameters met betrekking tot symptomen gerelateerd aan morbiditeit en kwaliteit van leven in de postoperatieve periode zal worden uitgevoerd na 3, 7, 14, 28, 35 en 42 dagen na extractie, met behulp van vragenlijsten , gebaseerd op een horizontale lijn van 100 mm (Visual Analog Scale; VAS).

Moleculaire evaluatie van markers gerelateerd aan osteoclast / blastogenese Bij de chirurgische procedure voor het plaatsen van tandheelkundige implantaten, tijdens het frezen om het bed voor te bereiden, wordt botweefsel verwijderd met behulp van een wegwerpbare botcollector die is aangepast aan de vacuümpomp / chirurgische aspirator. Een deel van het botweefsel zal gebruikt worden voor analyse van genexpressie en een ander deel voor immuno-enzymatische analyse van verschillende biomarkers gerelateerd aan osteoclast/blastogenese. Alle moleculaire analyses met betrekking tot osteoclast-/blastogenese-markers zullen worden uitgevoerd in het Dental Research Laboratory van de Headquarters Institution. Alle verzamelde biopten worden in een specifieke oplossing bewaard om afbraak van RNA te voorkomen (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX).

Genexpressie-analyse RNA-extractie: de verwijderde weefsels worden op de juiste manier verpakt in een oplossing om afbraak van het RNA te voorkomen (RNAlater®, Ambion Inc., Austin, TX). Het totale RNA zal worden geïsoleerd met de TRIZOL-reagensmethode (Gibco BRL, Life Technologies, Rockville, MD, VS). Eerst wordt de RNAlater-oplossing opgezogen en het fijngemaakte monster wordt vervolgens in het TRIZOL-reagens geplaatst, gedurende 30 seconden geschud en gedurende 5 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd. Na deze periode wordt chloroform (Sigma, St. Louis, MO, USA) toegevoegd, geroerd en gecentrifugeerd bij 10.000 rpm gedurende 15 minuten bij een temperatuur van 4oC. Het waterige deel wordt overgebracht naar een andere buis waaraan isopropanol wordt toegevoegd, geschud, 20 minuten geïncubeerd bij een temperatuur van -20oC en gecentrifugeerd op dezelfde manier als hierboven beschreven. Na dit proces wordt een pellet gevormd, die wordt gewassen met gekoelde 75% ethanol en gedroogd bij kamertemperatuur. De RNA-monsters worden opnieuw gesuspendeerd in ongeveer 50 µl water behandeld met diethylpyrocarbonaat (DEPC) en bewaard bij -70oC. De concentratie RNA wordt bepaald met behulp van een spectrofotometer.

Er zal een behandeling met DNAase worden uitgevoerd en er zal real-time PCR (RT-PCR) worden uitgevoerd. Primers voor GAPDH (referentiegen), Transforming growth factor (TGF-β), Bone sialoprotein (BSP) en Collageen type I (COL-I ) zal worden ontworpen met behulp van een pGBRram die speciaal is ontwikkeld om primers voor LightCycler (Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Duitsland) te ontwerpen. Alle primers worden gecontroleerd op specificiteit door de smeltkromme te controleren met behulp van positieve en negatieve controles. Het reactieprofiel wordt bepaald volgens de formule voorgesteld door de fabrikant van de apparatuur. Voor elk van de "runs" zal water worden gebruikt als een negatieve controle, en het product van de reacties zal worden gekwantificeerd met behulp van de eigen pGBRram van de fabrikant (LightCycler Relative Quantification Software - Roche Diagnostics GmbH). GAPDH zal worden gebruikt als het referentiegen (huishouden) voor de normalisatie van waarden.

Immuno-enzymatische analyse Een deel van het botweefselmonster dat is verzameld op het moment van plaatsing van het implantaat, wordt in steriele buizen geplaatst die 400 μl fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) met 0,05% Tween-20 bevatten. Alle monsters worden bewaard bij -20°C. Vervolgens wordt het weefsel gewogen, gehomogeniseerd en opgelost in PBS tot een eindconcentratie van 100 mg weefsel/ml. Na 10 minuten roeren in Vortex, wordt elk monster gedurende 5 minuten gecentrifugeerd bij 370 g, het supernatant wordt verzameld en tot gebruik bewaard bij -70°C. Om protease-activiteit te voorkomen, wordt de hele procedure uitgevoerd bij 4 ° C. Dickkopf (DKK1), Sclerostin (SOST), Tumornecrosefactor (TNF-α), Osteoprotegerin (OPG), Osteocalcin (OC), Osteopontin (OPN) ( HBNMAG-51K, Millipore Corporation, Billerica, MA, VS), NF-KB-bindingsactivatorreceptor (RANKL) (HRNKLMAG-31K-01, Millipore Corporation, Billerica, MA, VS), Osteonectin (OSN) en tartraatresistent zuurfosfatase ( TRAP) (HCMBMAG-22K, Millipore Corporation, Billerica, MA, VS), zal worden bepaald met behulp van Luminex / MAGpix-technologie, waarmee de aanwezigheid kan worden bepaald en de concentratie van verschillende markers in hetzelfde monster op een absolute manier kan worden gekwantificeerd.

Hiertoe zullen de analyses worden uitgevoerd in 96-wells platen, met behulp van de hierboven genoemde hooggevoelige panels, volgens de instructies van de fabrikant. De monsters zullen in tweevoud worden geëvalueerd en het gemiddelde van de verkregen waarden zal worden gebruikt om bereken de concentraties van elke marker.

Tomografische analyse CT-scans van de patiënten worden onmiddellijk na extractie en 3 maanden later (vóór plaatsing van het implantaat) verkregen. Tomografische onderzoeken die in de verschillende perioden worden uitgevoerd, zullen worden geanalyseerd op de mate van botverlies na extractie en behoud van de kom, zowel verticaal als horizontaal, via de Dental Slice-software.