前立腺CAのADT後のインスリン抵抗性

研究計画 研究はセントルイス大学で実施されます。 研究者らは、長時間作用型 GnRH アゴニストによる ADT を受ける非転移性前立腺癌の男性 44 人を対象に、前向き無作為化二重盲検プラセボ対照試験を実施する予定です。 患者は、泌尿器科の臨床診療から募集されます。 前立腺がんの標準治療の一環としてADTを受ける予定の患者には、ADTを開始する前に、研究に登録する選択肢が提供されます。

研究対象者は、EHC、皮下脂肪生検を受け、ADTを開始する前に血液サンプルを採取します。 その後、被験者は無作為に 30 mg のピオグリタゾンまたはプラセボ錠剤を 6 か月間毎日投与されます。 血液サンプルは、治験薬の開始から2か月および4か月後に採取されます。 最後の研究訪問は6か月になります。 被験者はEHC、脂肪生検、採血を受け、研究から解放されます。 研究訪問は、サルスセンターの内分泌科の臨床研究センターで実施されます。

ふるい分け：

すべての被験者は、研究に参加する前に次の手順を完了します。

1. 病歴。 糖尿病のためにインスリンまたはスルホニル尿素を服用している被験者は、ピオグリタゾンの使用が低血糖につながる可能性があることを知らされます。 うっ血性心不全の被験者は、浮腫または息切れが悪化する可能性があることを知らされます。
2. 身体検査
3. インフォームドコンセント
4. 臨床検査：過去 3 か月の医療記録が入手できない場合は、CBC および包括的な代謝パネル（CMP）

資格があり、研究に参加することに同意した被験者には、コンピューター化された乱数生成プログラムによって番号が割り当てられ、ピオグリタゾンまたはプラセボのいずれかを受け取るために無作為化 (1:1) されます。 盲検化されていない薬剤師が研究製品を準備します。 治験責任医師、スタッフ、および治験参加者は盲検化されます。

ベースライン調査訪問: この訪問は、ADT の開始前に行われます。 参加者は絶食し、CBC、包括的な代謝パネル（CMP）、総テストステロンおよび遊離テストステロン、SHBG、LHを測定するために採血されます. MNC と血清は研究所で保管されます。 皮下脂肪生検を行います。 生検に続いて、EHC が開始されます (手順は後述)。 被験者には、セルロースを含むピオグリタゾン30 mgまたはプラセボ錠剤を8週間供給します。 ゲムフィブロジルを服用している患者の場合、用量は 1 日 15 mg になります。 被験者は、ADTを開始してから1週間後に治験薬を開始します。 被験者は朝に1日1回治験薬を服用します。 インスリンまたはスルホニル尿素を服用している被験者は、低血糖が発生した場合は医師に連絡し、研究チームに報告するよう求められます。 治験担当医師は、必要に応じて糖尿病治療を変更することがあります。 すべての患者の提供者 (患者の糖尿病を管理している) に、患者の糖尿病レジメンの変更の可能性を通知する手紙が送られます。 心不全のすべての被験者は、息切れまたは浮腫の悪化を医師および研究チームに報告するようにアドバイスされます。

8 週目と 16 週目の研究訪問: 参加者は絶食し、研究室で採血されます。 参加者には、さらに8週間の治験薬が提供されます。 参加者は、身体検査のために治験担当医師の診察を受けます。 インスリンまたはスルホニル尿素を使用している糖尿病患者は、研究担当医師と血糖について話し合います。 治験担当医は、低血糖を避けるために、用量を減らすか、インスリンまたはスルホニル尿素を中止することを選択する場合があります。 治療法が変更された場合、患者の糖尿病提供者に手紙が送られます。

24 週目の研究訪問 (研究の終了): 参加者は絶食し、CBC、CMP、総テストステロンおよび遊離テストステロン、SHBG を測定するために採血されます。 採血します。 MNC と血清は研究所で保管されます。 皮下脂肪生検とEHCが行われます。 その後、被験者は研究から解放され、医師の診察を受けます。 糖尿病患者は、血糖値が上昇する可能性があることを告げられます。

手順 高インスリン正常血糖クランプによる全身グルコース取り込みの測定: 被験者は、一晩 10 時間絶食した後、朝に臨床研究センターに来ます。 血糖値が 180 mg/dl を超える患者は再スケジュールされます。 糖尿病の薬は、EHC の朝に開催されます。 長時間作用型インスリン（服用している場合）は、クランプの前夜に保持されます。 インスリンクランプは、10分間にわたって与えられる短時間作用型ヒトインスリンのプライミング用量で開始され、その後、80mU/m2/分の速度で注入されます。 20% グルコース注入を 5 分で開始し、グルコース注入速度を滴定して、血中グルコース濃度を 90 mg/dl に維持します。 20mEq の KCL を 1 リットルの 20% グルコースに添加します。 インスリンは3時間注入されます。 血液サンプルを採取して、0、60、120、150、および 180 分でインスリン濃度を測定します。 インスリン感受性は、クランプの最後の 30 分間 (定常状態) のグルコース注入速度を、定常状態の血漿インスリン濃度で割って体重で割ることから計算されます。

脂肪吸引手順: へそから 10 cm 離れた腹部の皮下脂肪組織吸引を行います。 皮膚は最初に準備され、適切な領域の周りに滅菌ドレープが配置されます. 局所麻酔下で、500mg～3gの脂肪組織が得られます。 脂肪組織は遠心分離され、血液や体液の汚染物質が除去されます。 上部脂肪組織を別の滅菌チューブに収集し、冷滅菌リン酸緩衝生理食塩水で 2 回洗浄し、遠心分離して生理食塩水を除去します。 全 RNA、核抽出物、および全細胞溶解物は、脂肪組織から調製されます。

臨床検査アッセイ：総テストステロン濃度と遊離テストステロン濃度は、液体クロマトグラフィータンデム質量分析と平衡透析によって測定されます（12）。 SHBG、LH、CBC、CMP は、標準的なアッセイによって測定されます。 すべての測定は、Quest Diagnostics によって実行されます。

単核細胞 (MNC) の分離: 血液サンプルを Na-EDTA で収集し、Lympholyte 培地 (Cedarlane Laboratories、ホーンビー、オンタリオ州) に慎重に重層します。 サンプルは、RBC ペレットの上部で 2 つのバンドが分離するまで遠心分離されます。 MNC バンドを収穫し、ハンクス平衡塩溶液で 2 回洗浄します。 この方法では、95% 以上の MNC 調製が得られます。

RT-PCRによるmRNA発現の定量化: インスリン抵抗性に関与する炎症メディエーターおよびインスリンシグナル伝達を媒介する炎症性メディエーターの発現は、MNCおよび脂肪組織から単離されたmRNAでRT-PCRによってテストされます。 全ＲＮＡは、市販のＲＮＡｑｕｅｏｕｓ（登録商標）－４ＰＣＲキットおよび脂肪組織ＲＮＡ分離キット（Ａｍｂｉｏｎ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）を使用して、ＭＮＣおよび脂肪組織から分離される。 リアルタイム RT-PCR は、Stratagene Mx3000P QPCR システム (カリフォルニア州ラホーヤ)、Sybergreen マスター ミックス (カリフォルニア州キアゲン)、および IKK-β、SOCS-3、PTEN、PTP-IB、JNK-1 の遺伝子特異的プライマーを使用して実行されます。 、TLR-4、IL-1β、IR、IRS-1、AKT-2、GLUT-4 (Life Technologies, MD)。 すべての値は、アクチン、ユビキチン C、およびシクロフィリン A を含むハウスキーピング遺伝子のグループの発現に対して正規化されます。使用される正規化係数は、GeneNorm ソフトウェアによって計算され、使用されるすべてのハウスキーピング遺伝子の値に基づいています。

ウエスタンブロッティング：MNCおよび脂肪組織の全細胞溶解物を調製します。 電気泳動および免疫ブロッティングは、以前に記載されたように実施される(13)。 IR、AKT-2、SOCS-3、IKK-β、およびアクチンに対するポリクローナル抗体を使用し、すべての値をアクチンへのローディング用に補正します。

血漿測定：ELISAを使用して、インスリン、C反応性タンパク質、アディポネクチン、TNF-α、およびIL-1βの血漿濃度を測定します。 FFA濃度は、比色アッセイによって測定されます。 研究室での測定は、ドイジー ホールの内分泌実験室で実施されます。

データ分析: 提案された研究の焦点は、ADT を受けているインスリン感受性の男性に対するピオグリタゾン治療の有効性を評価することです。 統計的仮定を満たすためのデータの変換が考慮される場合があります。 結果は、平均 ± 標準偏差として計算されます。 この試験の主要評価項目は、プラセボと比較した、ピオグリタゾンによる治療後の EHC 中の全身グルコース取り込みによって測定されるインスリン感受性の違いを検出することです。 ADT を受けている男性におけるピオグリタゾンの効果を分析した先行研究はありません。 しかし、2 型糖尿病患者におけるピオグリタゾンの研究では、インスリン感受性が約 30% 増加することが示されています (14-16)。 ピオグリタゾンまたはプラセボを24週間投与した後のインスリン感受性の変化は、対応のないt検定によってグループ間で比較されます。 インスリン感受性の差を 30% と推定すると、治療グループあたり 22 人の患者のサンプル サイズ (ドロップアウト率を 20% と仮定) は、有意差 (アルファ = 0.05) を検出するのに十分な検出力 (ベータ = 0.8) を提供するはずです。ただし、残差の標準偏差が平均差より大きくない場合。 したがって、この研究では 44 人の男性が募集されます。

二次エンドポイント: 研究の二次エンドポイントは、ピオグリタゾンまたはプラセボ後の HOMA-IR、インスリンシグナル伝達、および炎症メディエーターのベースラインからの相対的変化の比較です。