Insulino-resistenza dopo ADT per prostata CA

PIANO DI STUDIO Lo Studio sarà condotto presso la Saint Louis University. I ricercatori hanno in programma di condurre uno studio prospettico, randomizzato, in doppio cieco, controllato con placebo su 44 uomini con carcinoma prostatico non metastatico che riceveranno ADT con agonista del GnRH a lunga durata d'azione. I pazienti saranno reclutati dalla pratica clinica della divisione di Urologia. Ai pazienti che stanno pianificando di sottoporsi ad ADT come parte del trattamento standard per il loro cancro alla prostata verrà offerta la possibilità di iscriversi allo studio prima di iniziare l'ADT.

I soggetti dello studio verranno sottoposti a EHC, biopsia del grasso sottocutaneo e verrà prelevato un campione di sangue prima di iniziare l'ADT. I soggetti verranno quindi randomizzati a 30 mg di pioglitazone o compressa di placebo al giorno per 6 mesi. I campioni di sangue verranno prelevati 2 e 4 mesi dopo l'inizio del farmaco in studio. La visita di studio finale sarà a 6 mesi. I soggetti saranno sottoposti a EHC, biopsia del grasso e prelievo di sangue e saranno dimessi dallo studio. Le visite di studio saranno condotte presso il centro di ricerca clinica della divisione di Endocrinologia presso il Salus Center.

Selezione:

Tutti i soggetti completeranno le seguenti procedure prima di partecipare allo studio:-

1. Storia medica. I soggetti che assumono insulina o sulfoniluree per il diabete saranno informati che l'uso di pioglitazone può portare a bassi livelli di zucchero nel sangue. I soggetti con insufficienza cardiaca congestizia saranno informati della possibilità che il loro edema o mancanza di respiro possano peggiorare.
2. Esame fisico
3. Consenso informato
4. Test di laboratorio: emocromo e pannello metabolico completo (CMP) se non disponibile nelle cartelle cliniche degli ultimi 3 mesi

Ai soggetti che si qualificano e acconsentono a prendere parte allo studio verrà assegnato un numero da un programma computerizzato di generazione di numeri casuali e saranno randomizzati (1:1) per ricevere pioglitazone o placebo. Un farmacista non cieco preparerà il prodotto dello studio. Gli investigatori dello studio, il personale e i partecipanti allo studio saranno accecati.

Visita di studio di riferimento: questa visita avverrà prima dell'inizio dell'ADT. I partecipanti verranno a digiuno e riceveranno un prelievo di sangue per misurare CBC, pannello metabolico completo (CMP), testosterone totale e libero, SHBG e LH. MNC e siero saranno conservati per il laboratorio di ricerca. Verrà eseguita la biopsia del grasso sottocutaneo. Dopo la biopsia, verrà avviato l'EHC (procedure descritte di seguito). Ai soggetti verrà somministrata una fornitura di 8 settimane di pioglitazone 30 mg o pillole placebo contenenti cellulosa. Per i pazienti che assumono gemfibrozil, la dose sarà di 15 mg al giorno. I soggetti inizieranno il farmaco in studio una settimana dopo l'inizio dell'ADT. I soggetti assumeranno il farmaco in studio una volta al giorno al mattino. Ai soggetti che assumono insulina o sulfoniluree verrà chiesto di contattare il proprio medico e riferire al team dello studio se si verifica ipoglicemia. Il medico dello studio può modificare la terapia del diabete se giustificato. Verrà inviata una lettera ai fornitori (che gestiscono il diabete del paziente) di tutti i pazienti per informarli di possibili cambiamenti nel regime del diabete del paziente. A tutti i soggetti con insufficienza cardiaca verrà consigliato di segnalare mancanza di respiro o peggioramento dell'edema ai propri medici e al team dello studio.

Visite di studio delle settimane 8 e 16: i partecipanti verranno a digiuno e riceveranno un prelievo di sangue per il laboratorio di ricerca. Ai partecipanti verrà fornita la fornitura del farmaco in studio per altre 8 settimane. I partecipanti saranno visitati da un medico dello studio per l'esame fisico. I pazienti diabetici che usano insulina o sulfoniluree discuteranno i loro livelli di zucchero nel sangue con il medico dello studio. Il medico dello studio può scegliere di diminuire la dose o interrompere l'insulina o le sulfoniluree per evitare l'ipoglicemia. Se la terapia viene modificata, verrà inviata una lettera al fornitore del diabete del paziente.

Visita di studio della settimana 24 (fine dello studio): i partecipanti verranno a digiuno e si sottoporranno a prelievo di sangue per misurare emocromo, CMP, testosterone totale e libero, SHBG. Verrà prelevato il sangue. MNC e siero saranno conservati per il laboratorio di ricerca. Verranno eseguite la biopsia del grasso sottocutaneo e l'EHC. I soggetti verranno quindi dimessi dallo studio e seguiranno con i loro medici. I pazienti diabetici saranno informati della possibilità che i loro zuccheri nel sangue possano aumentare.

PROCEDURE Misurazione dell'assorbimento di glucosio da parte di tutto il corpo mediante clamp euglicemico iperinsulinemico: i soggetti arriveranno al centro di ricerca clinica al mattino dopo un digiuno notturno di 10 ore. I pazienti con glicemia >180 mg/dl verranno riprogrammati. I farmaci per il diabete si terranno la mattina dell'EHC. L'insulina a lunga durata d'azione (se assunta) verrà trattenuta la notte prima del morsetto. Il clamp per insulina verrà avviato con una dose iniziale di insulina umana a breve durata d'azione somministrata nell'arco di 10 minuti e quindi un'infusione alla velocità di 80 mU/m2/min. L'infusione di glucosio al 20% verrà avviata a 5 minuti e la velocità di infusione del glucosio verrà titolata per mantenere la concentrazione di glucosio nel sangue a 90 mg/dl. Ad un litro di glucosio al 20% verranno aggiunti 20 mEq di KCL. L'insulina sarà infusa per tre ore. Il campione di sangue verrà raccolto per misurare le concentrazioni di insulina a 0, 60, 120, 150 e 180 minuti. La sensibilità all'insulina sarà calcolata dalle velocità di infusione di glucosio durante gli ultimi 30 minuti del clamp (stato stazionario) diviso per la concentrazione plasmatica di insulina allo stato stazionario divisa per il peso corporeo.

Procedura di aspirazione del grasso: l'aspirazione del tessuto adiposo sottocutaneo verrà eseguita sull'addome a una distanza di 10 cm dall'ombelico. La pelle verrà prima preparata e un telo sterile verrà posizionato intorno all'area appropriata. In anestesia locale si otterranno 500 mg-3 g di tessuto adiposo. Il tessuto adiposo sarà centrifugato per rimuovere sangue e fluidi contaminanti. Il tessuto adiposo superiore verrà raccolto in una provetta sterile separata, lavato due volte con tampone fosfato sterile a freddo e centrifugato per rimuovere la soluzione salina. Dal tessuto adiposo verranno preparati RNA totale, estratti nucleari e lisati cellulari totali.

Saggi clinici di laboratorio: Le concentrazioni di testosterone totale e libero saranno misurate mediante cromatografia liquida tandem, spettrometria di massa e dialisi all'equilibrio (12). SHBG, LH, CBC, CMP saranno misurati con saggi standard. Tutte le misurazioni saranno effettuate dalla diagnostica Quest.

Isolamento di cellule mononucleate (MNC): I campioni di sangue saranno raccolti in Na-EDTA e accuratamente stratificati su Lympholyte medium (Cedarlane Laboratories, Hornby, ON). I campioni saranno centrifugati fino a quando due bande si separeranno nella parte superiore del pellet RBC. La banda MNC verrà raccolta e lavata due volte con la soluzione salina bilanciata di Hank. Questo metodo fornisce rese superiori al 95% di preparazione MNC.

Quantificazione dell'espressione dell'mRNA mediante RT-PCR: L'espressione dei mediatori dell'infiammazione coinvolti nell'insulino-resistenza e di quelli che mediano la segnalazione dell'insulina sarà testata mediante RT-PCR nell'mRNA isolato da MNC e tessuto adiposo. L'RNA totale sarà isolato da MNC e tessuto adiposo utilizzando il kit RNAqueous®-4PCR disponibile in commercio e il kit di isolamento dell'RNA del tessuto adiposo (Ambion, Austin, TX). La Real Time RT-PCR sarà eseguita utilizzando il sistema Stratagene Mx3000P QPCR (La Jolla, CA), Sybergreen master mix (Qiagen, CA) e primer gene specifici per IKK-β, SOCS-3, PTEN, PTP-IB, JNK-1 , TLR-4, IL-1β, IR, IRS-1, AKT-2, GLUT-4 (Life Technologies, MD). Tutti i valori saranno normalizzati all'espressione di un gruppo di geni housekeeping tra cui actina, ubiquitina C e ciclofilina A. Il fattore di normalizzazione utilizzato è calcolato dal software GeneNorm e si basa sui valori di tutti i geni housekeeping utilizzati.

Western blotting: saranno preparati lisati cellulari totali di MNC e tessuto adiposo. L'elettroforesi e l'immunoblotting verranno eseguiti come descritto in precedenza (13). Saranno utilizzati anticorpi policlonali contro IR, AKT-2, SOCS-3, IKK-β e actina e tutti i valori saranno corretti per il caricamento in actina.

Misurazioni plasmatiche: ELISA sarà utilizzato per misurare le concentrazioni plasmatiche di insulina, proteina C-reattiva, adiponectina, TNF-α e IL-1β. Le concentrazioni di FFA saranno misurate mediante un saggio colorimetrico. Le misurazioni del laboratorio di ricerca saranno condotte nel laboratorio endocrino di Doisy Hall.

Analisi dei dati: L'obiettivo della ricerca proposta è valutare l'efficacia del trattamento con pioglitazone su uomini con sensibilità all'insulina che ricevono ADT. Possono essere prese in considerazione trasformazioni dei dati al fine di soddisfare le ipotesi statistiche. I risultati saranno calcolati come media ± deviazione standard. L'endpoint primario dello studio è rilevare una differenza nella sensibilità all'insulina misurata dall'assorbimento di glucosio da parte di tutto il corpo durante l'EHC dopo il trattamento con pioglitazone rispetto al placebo. Non ci sono studi precedenti che analizzano l'effetto del pioglitazone negli uomini sottoposti a ADT. Tuttavia, gli studi sul pioglitazone nei pazienti con diabete di tipo 2 hanno mostrato un aumento della sensibilità all'insulina di circa il 30% (14-16). Il cambiamento nella sensibilità all'insulina dopo pioglitazone o placebo per 24 settimane sarà confrontato tra i gruppi mediante t-test non appaiato. Stimando una differenza nella sensibilità all'insulina del 30%, un campione di 22 pazienti per gruppo di trattamento (assumendo un tasso di abbandono del 20%) dovrebbe fornire una potenza adeguata (Beta = 0,8) per rilevare una differenza significativa (alfa = 0,05), a condizione che la deviazione standard dei residui non sia maggiore della differenza media. Così 44 uomini saranno reclutati nello studio.

Endpoint secondari: gli endpoint secondari per lo studio saranno il confronto del cambiamento relativo rispetto al basale in HOMA-IR, segnalazione dell'insulina e mediatori dell'infiammazione dopo pioglitazone o placebo.