Insulinresistens efter ADT for prostata CA

STUDIEPLAN Undersøgelsen vil blive gennemført ved Saint Louis University. Efterforskerne planlægger at udføre et prospektivt, randomiseret, dobbeltblindt, placebokontrolleret forsøg med 44 mænd med ikke-metastatisk prostatacancer, som vil modtage ADT med langtidsvirkende GnRH-agonist. Patienter vil blive rekrutteret fra klinisk praksis i afdelingen for urologi. De patienter, der planlægger at gennemgå ADT som en del af standardbehandling for deres prostatacancer, vil blive tilbudt at vælge at tilmelde sig undersøgelsen, før de påbegynder ADT.

Forsøgspersoner vil gennemgå EHC, subkutan fedtbiopsi og få udtaget en blodprøve før start af ADT. Forsøgspersonerne vil derefter blive randomiseret til 30 mg pioglitazon eller placebotablet dagligt i 6 måneder. Blodprøver vil blive udtaget 2 og 4 måneder efter påbegyndelse af undersøgelseslægemidlet. Det afsluttende studiebesøg vil være på 6 måneder. Forsøgspersonerne vil gennemgå EHC, fedtbiopsi og blodprøvetagning og vil blive udskrevet fra undersøgelsen. Studiebesøg vil blive gennemført på det kliniske forskningscenter i afdelingen for Endokrinologi ved Salus Center.

Screening:

Alle forsøgspersoner vil gennemføre følgende procedurer, inden de deltager i undersøgelsen:

1. Medicinsk historie. Forsøgspersoner, der er på insulin eller sulfonylurinstoffer mod diabetes, vil blive informeret om, at brug af pioglitazon kan føre til lavt blodsukker. Personer med kongestiv hjertesvigt vil blive informeret om muligheden for, at deres ødem eller åndenød kan forværres.
2. Fysisk eksamen
3. Informeret samtykke
4. Laboratorietest: CBC og omfattende metabolisk panel (CMP), hvis de ikke er tilgængelige i lægejournaler fra de sidste 3 måneder

Forsøgspersoner, der kvalificerer sig og giver samtykke til at deltage i undersøgelsen, vil blive tildelt et nummer af et computerstyret program til generering af tilfældige tal og vil blive randomiseret (1:1) til at modtage enten pioglitazon eller placebo. En ublindet farmaceut vil forberede undersøgelsesproduktet. Undersøgelsesforskere, personale og undersøgelsens deltagere vil blive blindet.

Baseline studiebesøg: Dette besøg vil finde sted før start af ADT. Deltagerne kommer fastende og får udtaget blod for at måle CBC, omfattende metabolisk panel (CMP), total og fri testosteron, SHBG og LH. MNC og serum vil blive opbevaret til forskningslaboratoriet. Subkutan fedtbiopsi vil blive udført. Efter biopsien vil EHC blive startet (procedurer beskrevet nedenfor). Forsøgspersonerne vil få en 8 ugers forsyning af pioglitazon 30 mg eller placebo-piller indeholdende cellulose. For patienter, der tager gemfibrozil, vil dosis være 15 mg dagligt. Forsøgspersonerne vil påbegynde undersøgelseslægemidlet en uge efter påbegyndelse af ADT. Forsøgspersonerne vil tage studielægemidlet en gang om dagen om morgenen. Forsøgspersoner, der tager insulin eller sulfonylurinstoffer, vil blive bedt om at kontakte deres læge og rapportere til undersøgelsesteamet, hvis der opleves hypoglykæmi. Undersøgelseslægen kan ændre diabetesbehandlingen, hvis det er berettiget. Der vil blive sendt et brev til udbydere (som administrerer patientens diabetes) for alle patienter med besked om mulige ændringer i patientens diabetesregime. Alle forsøgspersoner med hjertesvigt vil blive rådet til at rapportere åndenød eller forværring af ødemer til deres læger og til undersøgelsesteamet.

Uge 8 og 16 studiebesøg: Deltagerne kommer fastende og får udtaget blod til forskningslaboratorium. Deltagerne vil få levering af studielægemiddel i yderligere 8 uger. Deltagerne vil blive tilset af en undersøgelseslæge til fysisk undersøgelse. Diabetespatienter, der bruger insulin eller sulfonylurinstoffer, vil diskutere deres blodsukker med undersøgelseslægen. Undersøgelseslægen kan vælge at reducere dosis eller stoppe insulin eller sulfonylurinstoffer for at undgå hypoglykæmi. Hvis behandlingen ændres, vil der blive sendt et brev til patientens diabetesudbyder.

Uge 24 studiebesøg (slut af undersøgelsen): Deltagerne kommer fastende og får udtaget blod for at måle CBC, CMP, total og fri testosteron, SHBG. Der vil blive tappet blod. MNC og serum vil blive opbevaret til forskningslaboratoriet. Der vil blive udført subkutan fedtbiopsi og EHC. Forsøgspersonerne vil derefter blive udskrevet fra undersøgelsen og følge med deres læger. Diabetikere vil blive fortalt om muligheden for, at deres blodsukker kan stige.

PROCEDURER Måling af hele kroppens glukoseoptagelse ved hyperinsulinemisk euglykæmisk klemme: Forsøgspersonerne kommer til det kliniske forskningscenter om morgenen efter 10 timers faste natten over. Patienter med blodsukker >180 mg/dl vil blive omlagt. Diabetes medicin vil blive afholdt om morgenen EHC. Langtidsvirkende insulin (hvis det tages) vil blive holdt natten før klemmen. Insulinklemme vil blive startet med en priming dosis af korttidsvirkende human insulin givet over 10 minutter og derefter en infusion med en hastighed på 80mU/m2/min. 20 % glucoseinfusion vil blive startet efter 5 minutter, og glucoseinfusionshastigheden vil blive titreret for at opretholde blodsukkerkoncentrationen på 90 mg/dl. Tyve mEq KCL vil blive tilsat til en liter 20 % glucose. Insulin vil blive infunderet i tre timer. Blodprøver vil blive indsamlet for at måle insulinkoncentrationer ved 0, 60, 120, 150 og 180 minutter. Insulinfølsomhed vil blive beregnet ud fra glukoseinfusionshastighederne i løbet af de sidste 30 minutter af klemmen (steady state) divideret med steady-state plasmainsulinkoncentration divideret med kropsvægt.

Fedtaspirationsprocedure: Subkutan fedtvævsaspiration vil blive udført på abdomen i en afstand på 10 cm fra navlen. Huden vil først blive klargjort, og en steril afdækning vil blive placeret rundt om det relevante område. Under lokalbedøvelse opnås 500mg-3g fedtvæv. Fedtvævet vil blive centrifugeret for at fjerne blod- og væskeforurenende stoffer. Det øvre fedtvæv vil blive opsamlet i et separat sterilt rør, vasket to gange med koldt sterilt fosfatbufret saltvand og centrifugeret for at fjerne saltvandet. Totalt RNA, nukleare ekstrakter og totale cellelysater vil blive fremstillet fra fedtvævet.

Kliniske laboratorieanalyser: Totale og frie testosteronkoncentrationer vil blive målt ved væskekromatografi tandem massespektrometri og ligevægtsdialyse (12). SHBG, LH, CBC, CMP vil blive målt ved standardassays. Alle målinger vil blive udført af Quest diagnostics.

Mononukleære celler (MNC) isolation: Blodprøver vil blive opsamlet i Na-EDTA og omhyggeligt lagt på lymfolytmedium (Cedarlane Laboratories, Hornby, ON). Prøver vil blive centrifugeret, indtil to bånd adskilles i toppen af ​​RBC-pelleten. MNC-båndet vil blive høstet og vasket to gange med Hanks balancerede saltopløsning. Denne metode giver udbytter på mere end 95 % MNC-forberedelse.

Kvantificering af mRNA-ekspression ved RT-PCR: Ekspression af inflammatoriske mediatorer involveret i insulinresistens og dem, der medierer insulinsignalering, vil blive testet ved RT-PCR i mRNA isoleret fra MNC og fedtvæv. Total RNA vil blive isoleret fra MNC og fedtvæv ved hjælp af kommercielt tilgængeligt RNAqueous®-4PCR Kit og fedtvæv RNA Isolation kit (Ambion, Austin, TX). Real Time RT-PCR vil blive udført ved hjælp af Stratagene Mx3000P QPCR System (La Jolla, CA), Sybergreen master mix (Qiagen, CA) og genspecifikke primere for IKK-β, SOCS-3, PTEN, PTP-IB, JNK-1 , TLR-4, IL-1β, IR, IRS-1, AKT-2, GLUT-4 (Life Technologies, MD). Alle værdier vil blive normaliseret til ekspressionen af ​​en gruppe husholdningsgener, herunder actin, ubiquitin C og cyclophilin A. Den anvendte normaliseringsfaktor beregnes af GeneNorm software og er baseret på værdierne af alle anvendte husholdningsgener.

Western blotting: Totalcellelysater i MNC og fedtvæv vil blive fremstillet. Elektroforese og immunblotting vil blive udført som beskrevet før (13). Polyklonale antistoffer mod IR, AKT-2, SOCS-3, IKK-β og actin vil blive brugt, og alle værdier vil blive korrigeret for ladning til actin.

Plasmamålinger: ELISA vil blive brugt til at måle plasmakoncentrationer af insulin, C-reaktivt protein, adiponectin, TNF-α og IL-1β. FFA-koncentrationer vil blive målt ved et kolorimetrisk assay. Forskningslaboratoriemålingerne vil blive udført i det endokrine laboratorium i Doisy Hall.

Dataanalyse: Fokus for den foreslåede forskning er at evaluere effektiviteten af ​​pioglitazonbehandling på insulinfølsomme mænd, der modtager ADT. Transformationer af dataene for at opfylde statistiske antagelser kan overvejes. Resultaterne vil blive beregnet som middel ± standardafvigelse. Studiets primære endepunkt er at påvise en forskel i insulinfølsomhed målt ved hele kroppens glukoseoptagelse under EHC efter behandling med pioglitazon sammenlignet med placebo. Der er ingen tidligere undersøgelser, der analyserer virkningen af ​​pioglitazon hos mænd, der gennemgår ADT. Undersøgelser af pioglitazon hos patienter med type 2-diabetes har dog vist en stigning i insulinfølsomheden på ~30 % (14-16). Ændring i insulinfølsomhed efter pioglitazon eller placebo i 24 uger vil blive sammenlignet blandt grupperne ved uparret t-test. Ved at estimere en forskel i insulinfølsomhed på 30 %, bør en prøvestørrelse på 22 patienter pr. behandlingsgruppe (forudsat en frafaldsrate på 20 %) give tilstrækkelig kraft (Beta = 0,8) til at påvise en signifikant forskel (alfa = 0,05), forudsat at standardafvigelsen af ​​residualerne ikke er større end middelforskellen. Der vil således blive rekrutteret 44 mænd i undersøgelsen.

Sekundære endepunkter: De sekundære endepunkter for undersøgelsen vil være sammenligning af den relative ændring fra baseline i HOMA-IR, insulinsignalering og inflammatoriske mediatorer efter pioglitazon eller placebo.