전립선 CA에 대한 ADT 후 인슐린 저항성

연구 계획 연구는 세인트 루이스 대학에서 실시됩니다. 연구자들은 지속형 GnRH 작용제와 함께 ADT를 투여받을 비전이성 전립선암을 가진 44명의 남성을 대상으로 전향적, 무작위, 이중맹검, 위약 대조 시험을 수행할 계획입니다. 환자는 비뇨기과 분과의 임상 실습에서 모집됩니다. 전립선암에 대한 표준 치료의 일부로 ADT를 받을 계획인 환자는 ADT를 시작하기 전에 연구에 등록할 수 있는 선택권이 제공됩니다.

연구 대상자는 EHC, 피하 지방 생검을 받고 ADT를 시작하기 전에 혈액 샘플을 채취합니다. 피험자는 6개월 동안 매일 30mg의 피오글리타존 또는 위약 정제로 무작위 배정됩니다. 연구 약물 시작 후 2개월 및 4개월 후에 혈액 샘플을 채취할 것입니다. 최종 연구 방문은 6개월이 될 것입니다. 피험자는 EHC, 지방 생검 및 혈액 샘플링을 받고 연구에서 제외됩니다. 연구 방문은 Salus Center의 내분비학부 임상 연구 센터에서 수행됩니다.

상영:

모든 피험자는 연구에 참여하기 전에 다음 절차를 완료해야 합니다.

1. 병력. 당뇨병을 위해 인슐린 또는 설포닐우레아를 사용 중인 피험자는 피오글리타존 사용이 저혈당으로 이어질 수 있음을 알립니다. 울혈성 심부전이 있는 피험자는 부종이나 숨가쁨이 악화될 수 있음을 알립니다.
2. 신체 검사
3. 동의
4. 검사실 테스트: 지난 3개월의 의료 기록에 없는 경우 CBC 및 종합 대사 패널(CMP)

자격이 있고 연구 참여에 동의한 피험자는 전산화된 난수 생성 프로그램에 의해 번호가 할당되고 피오글리타존 또는 위약을 투여받기 위해 무작위 배정(1:1)됩니다. 맹검되지 않은 약사가 연구 제품을 준비할 것입니다. 연구 조사자, 직원 및 연구 참여자는 눈이 멀게 됩니다.

기본 연구 방문: 이 방문은 ADT를 시작하기 전에 이루어집니다. 참가자들은 금식하고 혈액을 채취하여 CBC, 종합 대사 패널(CMP), 전체 및 유리 테스토스테론, SHBG 및 LH를 측정합니다. MNC와 혈청은 연구실을 위해 보관됩니다. 피하 지방 생검을 시행하게 됩니다. 생검 후 EHC가 시작됩니다(절차는 아래에 설명됨). 피험자는 피오글리타존 30mg 또는 셀룰로오스가 함유된 위약 알약을 8주간 공급받습니다. gemfibrozil을 복용하는 환자의 경우 복용량은 매일 15mg입니다. 피험자는 ADT를 시작한 지 1주일 후에 연구 약물을 시작할 것입니다. 피험자는 아침에 하루에 한 번 연구 약물을 복용합니다. 인슐린 또는 설포닐우레아를 복용하는 피험자는 의사에게 연락하고 저혈당증이 발생하면 연구 팀에 보고하도록 요청받을 것입니다. 연구 담당 의사는 정당한 경우 당뇨병 요법을 변경할 수 있습니다. 모든 환자의 제공자(환자의 당뇨병을 관리하는 사람)에게 환자의 당뇨병 요법에 변경 가능성이 있음을 알리는 서한이 발송됩니다. 심부전이 있는 모든 피험자는 숨가쁨 또는 부종 악화를 의사와 연구 팀에 보고하도록 조언받을 것입니다.

8주 및 16주차 연구 방문: 참가자들은 금식하고 연구 실험실을 위해 혈액을 채취할 것입니다. 참가자는 추가 8주 동안 연구 약물을 공급받게 됩니다. 참가자는 신체 검사를 위해 연구 의사가 볼 것입니다. 인슐린 또는 설포닐우레아를 사용하는 당뇨병 환자는 연구 의사와 혈당에 대해 논의할 것입니다. 연구 의사는 저혈당증을 피하기 위해 용량을 줄이거나 인슐린 또는 설포닐우레아를 중단하도록 선택할 수 있습니다. 요법이 변경되면 환자의 당뇨병 제공자에게 서신이 발송됩니다.

24주 연구 방문(연구 종료): 참가자는 금식하고 혈액을 채취하여 CBC, CMP, 전체 및 유리 테스토스테론, SHBG를 측정합니다. 피가 뽑힐 것입니다. MNC와 혈청은 연구실을 위해 보관됩니다. 피하 지방 생검 및 EHC가 수행됩니다. 피험자는 연구에서 퇴원하고 의사를 따를 것입니다. 당뇨병 환자는 혈당이 증가할 가능성이 있음을 알립니다.

절차 고인슐린혈증 정상혈당 클램프에 의한 전신 포도당 흡수 측정: 피험자는 밤새 10시간 금식한 후 아침에 임상 연구 센터에 올 것입니다. 혈당 >180mg/dl인 환자는 일정이 재조정됩니다. 당뇨병 약은 EHC의 아침에 개최됩니다. 지속형 인슐린(투여 중인 경우)은 클램프 전날 밤에 보류됩니다. 인슐린 클램프는 10분에 걸쳐 단기 작용 인간 인슐린의 프라이밍 용량을 제공한 다음 80mU/m2/분의 속도로 주입하는 것으로 시작됩니다. 5분에 20% 포도당 주입을 시작하고 혈당 농도를 90mg/dl로 유지하기 위해 포도당 주입 속도를 적정합니다. 20mEq의 KCL이 20% 포도당 1리터에 추가됩니다. 인슐린은 3시간 동안 주입됩니다. 0분, 60분, 120분, 150분, 180분에 혈액 샘플을 채취하여 인슐린 농도를 측정합니다. 인슐린 민감도는 정상 상태 혈장 인슐린 농도를 체중으로 나눈 클램프(정상 상태)의 마지막 30분 동안의 포도당 주입 속도로부터 계산됩니다.

지방흡인술 : 배꼽에서 10cm 떨어진 복부에서 피하지방조직흡인을 시행합니다. 먼저 피부를 준비하고 멸균 드레이프를 적절한 부위에 배치합니다. 국소마취 하에 500mg-3g의 지방조직을 채취합니다. 지방 조직을 원심분리하여 혈액 및 체액 오염 물질을 제거합니다. 상부 지방 조직을 별도의 멸균 튜브에 수집하고 차가운 멸균 Phosphate Buffered Saline으로 두 번 세척하고 원심 분리하여 식염수를 제거합니다. 총 RNA, 핵 추출물 및 총 세포 용해물은 지방 조직에서 준비됩니다.

임상 실험실 분석: 전체 및 유리 테스토스테론 농도는 액체 크로마토그래피 탠덤 질량 분석법 및 평형 투석으로 측정됩니다(12). SHBG, LH, CBC, CMP는 표준 분석으로 측정됩니다. 모든 측정은 Quest 진단에 의해 수행됩니다.

단핵 세포(MNC) 분리: 혈액 샘플을 Na-EDTA에서 수집하고 림프액 배지(Cedarlane Laboratories, Hornby, ON)에 조심스럽게 층을 이룹니다. 샘플은 RBC 펠릿 상단에서 두 개의 밴드가 분리될 때까지 원심분리됩니다. MNC 밴드를 수확하고 Hank의 균형 잡힌 염 용액으로 두 번 세척합니다. 이 방법은 95% 이상의 MNC 준비 수율을 제공합니다.

RT-PCR에 의한 mRNA 발현의 정량화: 인슐린 저항성과 관련된 염증 매개체 및 인슐린 신호전달을 매개하는 염증 매개체의 발현은 MNC 및 지방 조직으로부터 분리된 mRNA에서 RT-PCR에 의해 시험될 것이다. 총 RNA는 상업적으로 이용 가능한 RNAqueous®-4PCR 키트 및 지방 조직 RNA 분리 키트(Ambion, Austin, TX)를 사용하여 MNC 및 지방 조직으로부터 분리될 것입니다. Real Time RT-PCR은 Stratagene Mx3000P QPCR System(La Jolla, CA), Sybergreen master mix(Qiagen, CA) 및 IKK-β, SOCS-3, PTEN, PTP-IB, JNK-1에 대한 유전자 특이적 프라이머를 사용하여 수행됩니다. , TLR-4, IL-1β, IR, IRS-1, AKT-2, GLUT-4(Life Technologies, MD). 모든 값은 액틴, 유비퀴틴 C 및 시클로필린 A를 포함한 하우스키핑 유전자 그룹의 발현에 대해 정규화됩니다. 사용된 정규화 계수는 GeneNorm 소프트웨어로 계산되며 사용된 모든 하우스키핑 유전자의 값을 기반으로 합니다.

웨스턴 블롯팅: MNC 및 지방 조직 전체 세포 용해물을 준비합니다. 전기영동 및 면역블롯팅은 이전에 기술된 바와 같이 수행될 것이다(13). IR, AKT-2, SOCS-3, IKK-β 및 액틴에 대한 다클론 항체가 사용되며 모든 값은 액틴 로딩에 대해 보정됩니다.

혈장 측정: ELISA는 인슐린, C 반응성 단백질, 아디포넥틴, TNF-α 및 IL-1β의 혈장 농도를 측정하는 데 사용됩니다. FFA 농도는 비색 분석으로 측정됩니다. 연구 실험실 측정은 Doisy Hall의 내분비 실험실에서 수행됩니다.

데이터 분석: 제안된 연구의 초점은 ADT를 받는 인슐린 감수성 남성에 대한 피오글리타존 치료의 효능을 평가하는 것입니다. 통계적 가정을 충족하기 위한 데이터 변환을 고려할 수 있습니다. 결과는 평균 ± 표준 편차로 계산됩니다. 연구의 1차 종점은 위약과 비교하여 pioglitazone으로 치료한 후 EHC 동안 전신 포도당 흡수로 측정된 인슐린 민감성의 차이를 감지하는 것입니다. ADT를 겪고 있는 남성에서 피오글리타존의 효과를 분석한 이전 연구는 없습니다. 그러나 제2형 당뇨병 환자의 피오글리타존에 대한 연구에서 인슐린 감수성이 ~30% 증가한 것으로 나타났습니다(14-16). 24주 동안 피오글리타존 또는 위약에 따른 인슐린 감수성의 변화를 unpaired t-test로 그룹 간에 비교합니다. 30%의 인슐린 감수성 차이를 추정할 때, 치료 그룹당 22명의 환자의 표본 크기(탈퇴율을 20%로 가정)는 유의미한 차이(알파 = 0.05)를 감지하기 위해 적절한 검정력(베타 = 0.8)을 제공해야 합니다. 잔차의 표준 편차가 평균 차이보다 크지 않은 경우. 따라서 44명의 남성이 연구에 모집될 것입니다.

2차 종점: 연구의 2차 종점은 피오글리타존 또는 위약 후 HOMA-IR, 인슐린 신호 및 염증 매개체의 기준선에서 상대적인 변화를 비교하는 것입니다.