Резистентность к инсулину после ADT для простаты CA

ПЛАН ИССЛЕДОВАНИЯ Исследование будет проводиться в Университете Сент-Луиса. Исследователи планируют провести проспективное, рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование с участием 44 мужчин с неметастатическим раком простаты, которые будут получать АДТ с длительно действующим агонистом ГнРГ. Пациенты будут набраны из клинической практики отделения урологии. Пациентам, которые планируют пройти ГТ в рамках стандартного лечения рака предстательной железы, будет предложено выбрать участие в исследовании до начала ГТ.

Субъекты исследования пройдут EHC, биопсию подкожного жира и возьмут образец крови до начала ADT. Затем субъекты будут рандомизированы для приема 30 мг пиоглитазона или плацебо в таблетках ежедневно в течение 6 месяцев. Образцы крови будут взяты через 2 и 4 месяца после начала приема исследуемого препарата. Последний учебный визит будет через 6 месяцев. Субъекты пройдут EHC, биопсию жира и забор крови, после чего будут выписаны из исследования. Учебные визиты будут проводиться в центре клинических исследований отделения эндокринологии Центра Салус.

Скрининг:

Все субъекты должны выполнить следующие процедуры до участия в исследовании:

1. История болезни. Субъектам, принимающим инсулин или препараты сульфонилмочевины для лечения диабета, сообщат, что использование пиоглитазона может привести к снижению уровня сахара в крови. Субъекты с застойной сердечной недостаточностью будут проинформированы о возможности ухудшения их отека или одышки.
2. Физический осмотр
3. Информированное согласие
4. Лабораторный анализ: общий анализ крови и комплексная метаболическая панель (CMP), если они отсутствуют в медицинских записях за последние 3 месяца.

Субъектам, которые соответствуют требованиям и согласны принять участие в исследовании, будет присвоен номер с помощью компьютеризированной программы генерации случайных чисел, и они будут рандомизированы (1: 1) для получения либо пиоглитазона, либо плацебо. Неослепленный фармацевт подготовит исследуемый продукт. Исследователи, персонал и участники исследования будут ослеплены.

Визит для базового исследования: этот визит состоится до начала ADT. Участники придут натощак и возьмут кровь для измерения общего анализа крови, комплексной метаболической панели (CMP), общего и свободного тестостерона, ГСПГ и ЛГ. МНК и сыворотка будут храниться для исследовательской лаборатории. Будет выполнена биопсия подкожно-жировой клетчатки. После биопсии будет начата EHC (процедуры описаны ниже). Субъектам дадут 8-недельный запас пиоглитазона 30 мг или таблетки плацебо, содержащие целлюлозу. Для пациентов, принимающих гемфиброзил, доза составляет 15 мг в день. Субъекты начнут принимать исследуемый препарат через неделю после начала ADT. Субъекты будут принимать исследуемый препарат один раз в день утром. Субъектов, принимающих инсулин или производные сульфонилмочевины, попросят связаться со своим врачом и сообщить исследовательской группе, если возникнет гипогликемия. Врач-исследователь может изменить терапию диабета, если это оправдано. Письмо будет отправлено поставщикам (которые ведут диабет пациента) всех пациентов с уведомлением о возможных изменениях в режиме лечения диабета пациента. Всем субъектам с сердечной недостаточностью будет рекомендовано сообщать об одышке или ухудшении отека своим врачам и исследовательской группе.

Недели 8 и 16 учебные визиты: участники придут натощак и возьмут кровь для исследовательской лаборатории. Участникам будет предоставлен запас исследуемого препарата еще на 8 недель. Участники будут осмотрены врачом-исследователем для физического осмотра. Пациенты с диабетом, использующие инсулин или производные сульфонилмочевины, обсудят уровень сахара в крови с врачом-исследователем. Врач-исследователь может решить уменьшить дозу или прекратить введение инсулина или сульфонилмочевины, чтобы избежать гипогликемии. Если терапия будет изменена, лечащему врачу пациента будет отправлено письмо.

Учебный визит на 24-й неделе (конец исследования): участники придут натощак и у них возьмут кровь для измерения CBC, CMP, общего и свободного тестостерона, SHBG. Будет взята кровь. МНК и сыворотка будут храниться для исследовательской лаборатории. Будет выполнена биопсия подкожной жировой клетчатки и EHC. Затем субъекты будут выписаны из исследования и будут сопровождать своих врачей. Больным диабетом сообщат о возможности повышения уровня сахара в крови.

ПРОЦЕДУРЫ Измерение усвоения глюкозы всем телом с помощью гиперинсулинемического эугликемического зажима: Субъекты приходят в клинический исследовательский центр утром после ночного 10-часового голодания. Пациенты с уровнем сахара в крови >180 мг/дл будут перепланированы. Лекарства от диабета будут выдаваться утром во время ЕКГ. Инсулин длительного действия (если он принимается) будет отложен на ночь перед клэмпом. Инсулиновый клэмп начинают с введения начальной дозы человеческого инсулина короткого действия в течение 10 минут, а затем инфузии со скоростью 80 мЕд/м2/мин. Инфузия 20% глюкозы будет начата через 5 минут, и скорость инфузии глюкозы будет титроваться для поддержания концентрации глюкозы в крови на уровне 90 мг/дл. Двадцать мЭкв KCL добавляют к одному литру 20% глюкозы. Инсулин будет вливаться в течение трех часов. Образец крови будет взят для измерения концентрации инсулина через 0, 60, 120, 150 и 180 минут. Чувствительность к инсулину будет рассчитываться путем деления скорости инфузии глюкозы в течение последних 30 минут клэмпа (стационарное состояние) на равновесную концентрацию инсулина в плазме, деленную на массу тела.

Процедура аспирации жира: аспирация подкожной жировой ткани выполняется на животе на расстоянии 10 см от пупка. Сначала будет подготовлена ​​кожа, и вокруг соответствующей области будет наложена стерильная салфетка. Под местной анестезией будет получено от 500 мг до 3 г жировой ткани. Жировая ткань будет центрифугирована для удаления примесей крови и жидкости. Верхнюю жировую ткань собирают в отдельную стерильную пробирку, дважды промывают холодным стерильным физиологическим раствором с фосфатным буфером и центрифугируют для удаления физиологического раствора. Тотальная РНК, ядерные экстракты и тотальные клеточные лизаты будут приготовлены из жировой ткани.

Клинические лабораторные анализы. Концентрации общего и свободного тестостерона будут измеряться с помощью жидкостной хроматографии в сочетании с масс-спектрометрией и равновесным диализом (12). SHBG, LH, CBC, CMP будут измеряться стандартными анализами. Все замеры будет проводить диагностика Quest.

Выделение мононуклеарных клеток (MNC): Образцы крови будут собираться в Na-EDTA и осторожно наслаиваться на среду Lympholite (Cedarlane Laboratories, Hornby, ON). Образцы центрифугируют до тех пор, пока не отделятся две полосы в верхней части осадка эритроцитов. Группа MNC будет собрана и дважды промыта сбалансированным солевым раствором Хэнка. Этот метод обеспечивает выход более 95% препарата МНК.

Количественная оценка экспрессии мРНК с помощью ОТ-ПЦР. Экспрессию медиаторов воспаления, участвующих в резистентности к инсулину, и тех, которые опосредуют передачу сигналов инсулина, будут тестировать с помощью ОТ-ПЦР в мРНК, выделенной из MNC и жировой ткани. Общая РНК будет выделена из MNC и жировой ткани с использованием имеющегося в продаже набора RNAqueous®-4PCR и набора для выделения РНК из жировой ткани (Ambion, Austin, TX). ОТ-ПЦР в реальном времени будет проводиться с использованием системы QPCR Stratagene Mx3000P (La Jolla, CA), мастер-микса Sybergreen (Qiagen, CA) и геноспецифических праймеров для IKK-β, SOCS-3, PTEN, PTP-IB, JNK-1. , TLR-4, IL-1β, IR, IRS-1, AKT-2, GLUT-4 (Life Technologies, MD). Все значения будут нормированы на экспрессию группы генов домашнего хозяйства, включая актин, убиквитин С и циклофилин А. Используемый коэффициент нормализации рассчитывается с помощью программного обеспечения GeneNorm и основан на значениях всех используемых генов домашнего хозяйства.

Вестерн-блоттинг: будут приготовлены лизаты тотальных клеток MNC и жировой ткани. Электрофорез и иммуноблоттинг будут проводиться, как описано ранее (13). Будут использованы поликлональные антитела против IR, AKT-2, SOCS-3, IKK-β и актина, и все значения будут скорректированы с учетом нагрузки на актин.

Измерения в плазме: ELISA будет использоваться для измерения концентрации в плазме инсулина, С-реактивного белка, адипонектина, TNF-α и IL-1β. Концентрации СЖК будут измеряться колориметрическим анализом. Измерения исследовательской лаборатории будут проводиться в эндокринной лаборатории в Дойзи Холл.

Анализ данных. Целью предлагаемого исследования является оценка эффективности лечения пиоглитазоном у мужчин с чувствительностью к инсулину, получающих антиретровирусную терапию. Можно рассмотреть возможность преобразования данных для удовлетворения статистических допущений. Результаты будут вычислены как среднее значение ± стандартное отклонение. Первичной конечной точкой исследования является обнаружение разницы в чувствительности к инсулину, измеряемой по поглощению глюкозы всем телом во время EHC после лечения пиоглитазоном по сравнению с плацебо. Предыдущих исследований, анализирующих влияние пиоглитазона на мужчин, проходящих ГТ, не проводилось. Однако исследования пиоглитазона у пациентов с диабетом 2 типа показали увеличение чувствительности к инсулину примерно на 30% (14-16). Изменение чувствительности к инсулину после приема пиоглитазона или плацебо в течение 24 недель будет сравниваться между группами с помощью непарного t-критерия. При оценке разницы в чувствительности к инсулину в 30 % размер выборки из 22 пациентов в группе лечения (при условии, что показатель выбывания составляет 20 %) должен обеспечить достаточную мощность (бета = 0,8) для выявления значимой разницы (альфа = 0,05). при условии, что стандартное отклонение остатков не превышает среднюю разницу. Таким образом, для исследования будут набраны 44 человека.

Вторичные конечные точки. Вторичными конечными точками исследования будет сравнение относительного изменения по сравнению с исходным уровнем показателей HOMA-IR, передачи сигналов инсулина и медиаторов воспаления после применения пиоглитазона или плацебо.