Insulinresistenz nach ADT bei Prostata-CA

STUDIENPLAN Die Studie wird an der Saint Louis University durchgeführt. Die Prüfärzte planen die Durchführung einer prospektiven, randomisierten, doppelblinden, placebokontrollierten Studie mit 44 Männern mit nichtmetastasiertem Prostatakrebs, die ADT mit einem langwirksamen GnRH-Agonisten erhalten werden. Die Patienten werden aus der klinischen Praxis der Abteilung für Urologie rekrutiert. Den Patienten, die planen, sich einer ADT als Teil der Standardbehandlung ihres Prostatakrebses zu unterziehen, wird die Möglichkeit geboten, sich vor Beginn der ADT für die Studie anzumelden.

Studiensubjekte werden einer EHC, einer subkutanen Fettbiopsie und einer Blutprobe unterzogen, bevor sie mit der ADT beginnen. Die Probanden werden dann für 6 Monate täglich auf 30 mg Pioglitazon oder Placebo-Tabletten randomisiert. Blutproben werden 2 und 4 Monate nach Beginn des Studienmedikaments entnommen. Der letzte Studienbesuch findet nach 6 Monaten statt. Die Probanden werden einer EHC, Fettbiopsie und Blutentnahme unterzogen und aus der Studie entlassen. Studienbesuche werden im klinischen Forschungszentrum der Abteilung für Endokrinologie im Salus Center durchgeführt.

Vorführung:

Alle Probanden werden die folgenden Verfahren vor der Teilnahme an der Studie absolvieren:-

1. Krankengeschichte. Personen, die wegen Diabetes Insulin oder Sulfonylharnstoffe einnehmen, werden darauf hingewiesen, dass die Anwendung von Pioglitazon zu niedrigen Blutzuckerwerten führen kann. Patienten mit dekompensierter Herzinsuffizienz werden auf die Möglichkeit hingewiesen, dass sich ihre Ödeme oder Atemnot verschlimmern können.
2. Körperliche Untersuchung
3. Einverständniserklärung
4. Labortest: Blutbild und umfassendes metabolisches Panel (CMP), falls nicht in den Krankenakten der letzten 3 Monate verfügbar

Probanden, die sich für die Teilnahme an der Studie qualifizieren und zustimmen, erhalten von einem computergestützten Programm zur Generierung von Zufallszahlen eine Nummer und werden randomisiert (1:1) entweder Pioglitazon oder Placebo erhalten. Ein unverblindeter Apotheker bereitet das Studienprodukt vor. Studienprüfer, Mitarbeiter und die Studienteilnehmer werden verblindet.

Basisstudienbesuch: Dieser Besuch findet vor Beginn der ADT statt. Die Teilnehmer kommen nüchtern und lassen Blut abnehmen, um CBC, umfassendes metabolisches Panel (CMP), Gesamt- und freies Testosteron, SHBG und LH zu messen. MNC und Serum werden für das Forschungslabor gelagert. Es wird eine subkutane Fettbiopsie durchgeführt. Nach der Biopsie wird mit der EHC begonnen (Verfahren unten beschrieben). Die Probanden erhalten eine 8-wöchige Versorgung mit Pioglitazon 30 mg oder Placebo-Pillen, die Cellulose enthalten. Für Patienten, die Gemfibrozil einnehmen, beträgt die Dosis 15 mg täglich. Die Probanden beginnen das Studienmedikament eine Woche nach Beginn der ADT. Die Probanden nehmen das Studienmedikament einmal täglich morgens ein. Patienten, die Insulin oder Sulfonylharnstoffe einnehmen, werden gebeten, sich an ihren Arzt zu wenden und dem Studienteam zu melden, wenn eine Hypoglykämie auftritt. Der Studienarzt kann die Diabetestherapie gegebenenfalls ändern. Ein Schreiben wird an die Anbieter (die den Diabetes des Patienten verwalten) aller Patienten gesendet, in dem sie über mögliche Änderungen des Diabetes-Regimes des Patienten informiert werden. Allen Probanden mit Herzinsuffizienz wird geraten, Kurzatmigkeit oder Ödemverschlimmerung ihren Ärzten und dem Studienteam zu melden.

Wochen 8 und 16 Studienbesuche: Die Teilnehmer kommen nüchtern und lassen sich Blut für das Forschungslabor abnehmen. Die Teilnehmer erhalten für weitere 8 Wochen eine Versorgung mit dem Studienmedikament. Die Teilnehmer werden von einem Studienarzt zur körperlichen Untersuchung gesehen. Diabetische Patienten, die Insulin oder Sulfonylharnstoffe verwenden, werden ihren Blutzucker mit dem Studienarzt besprechen. Der Studienarzt kann entscheiden, die Dosis zu verringern oder Insulin oder Sulfonylharnstoffe abzusetzen, um eine Hypoglykämie zu vermeiden. Wenn die Therapie geändert wird, wird ein Schreiben an den Diabetes-Betreuer des Patienten gesendet.

Studienbesuch in Woche 24 (Ende der Studie): Die Teilnehmer kommen nüchtern und es wird ihnen Blut abgenommen, um CBC, CMP, Gesamt- und freies Testosteron, SHBG zu messen. Es wird Blut abgenommen. MNC und Serum werden für das Forschungslabor gelagert. Eine subkutane Fettbiopsie und EHC werden durchgeführt. Die Probanden werden dann aus der Studie entlassen und folgen ihren Ärzten. Diabetiker werden auf die Möglichkeit hingewiesen, dass ihr Blutzucker ansteigen kann.

VERFAHREN Messung der Ganzkörperglukoseaufnahme durch hyperinsulinämische euglykämische Klemme: Die Subjekte kommen am Morgen nach einer 10-stündigen Fastenzeit über Nacht in das klinische Forschungszentrum. Patienten mit einem Blutzucker >180 mg/dl werden neu geplant. Diabetes-Medikamente werden am Morgen des EHC abgehalten. Lang wirkendes Insulin (falls eingenommen) wird in der Nacht vor der Klemme zurückgehalten. Die Insulinklemme wird mit einer Initialdosis von kurz wirkendem Humaninsulin über 10 Minuten und einer anschließenden Infusion mit einer Geschwindigkeit von 80 mE/m2/min begonnen. Die Infusion mit 20 % Glukose wird nach 5 Minuten gestartet und die Infusionsgeschwindigkeit der Glukose wird titriert, um die Blutglukosekonzentration bei 90 mg/dl zu halten. Zwanzig Milliäquivalente KCL werden zu einem Liter 20 % Glukose hinzugefügt. Drei Stunden lang wird Insulin infundiert. Blutproben werden entnommen, um die Insulinkonzentrationen bei 0, 60, 120, 150 und 180 Minuten zu messen. Die Insulinsensitivität wird aus den Glucose-Infusionsraten während der letzten 30 Minuten der Klemme (Steady-State) dividiert durch die Plasma-Insulinkonzentration im Steady-State dividiert durch das Körpergewicht berechnet.

Fettaspirationsverfahren: Die subkutane Fettgewebeaspiration wird am Bauch in einem Abstand von 10 cm vom Nabel durchgeführt. Die Haut wird zuerst vorbereitet und ein steriles Tuch wird um den entsprechenden Bereich gelegt. Unter örtlicher Betäubung werden 500 mg-3 g Fettgewebe entnommen. Das Fettgewebe wird zentrifugiert, um Blut- und Flüssigkeitsverunreinigungen zu entfernen. Das obere Fettgewebe wird in einem separaten sterilen Röhrchen gesammelt, zweimal mit kalter steriler phosphatgepufferter Kochsalzlösung gewaschen und zentrifugiert, um die Kochsalzlösung zu entfernen. Aus dem Fettgewebe werden Gesamt-RNA, Kernextrakte und Gesamtzelllysate hergestellt.

Klinische Laboruntersuchungen: Gesamt- und freie Testosteronkonzentrationen werden durch Flüssigchromatographie-Tandem-Massenspektrometrie und Gleichgewichtsdialyse gemessen (12). SHBG, LH, CBC, CMP werden mit Standardassays gemessen. Alle Messungen werden von Quest Diagnostics durchgeführt.

Isolierung mononukleärer Zellen (MNC): Blutproben werden in Na-EDTA gesammelt und sorgfältig auf Lympholyte-Medium (Cedarlane Laboratories, Hornby, ON) geschichtet. Die Proben werden zentrifugiert, bis sich zwei Banden oben auf dem RBC-Pellet ablösen. Die MNC-Bande wird geerntet und zweimal mit Hanks ausgewogener Salzlösung gewaschen. Dieses Verfahren liefert Ausbeuten von mehr als 95 % MNC-Präparation.

Quantifizierung der mRNA-Expression durch RT-PCR: Die Expression von Entzündungsmediatoren, die an der Insulinresistenz beteiligt sind, und von solchen, die die Insulinsignalisierung vermitteln, wird durch RT-PCR in mRNA getestet, die aus MNC und Fettgewebe isoliert wurde. Die Gesamt-RNA wird aus MNC und Fettgewebe unter Verwendung des im Handel erhältlichen RNAqueous®-4PCR-Kits und des Fettgewebe-RNA-Isolierungskits (Ambion, Austin, TX) isoliert. Real Time RT-PCR wird mit dem Stratagene Mx3000P QPCR System (La Jolla, CA), Sybergreen Mastermix (Qiagen, CA) und genspezifischen Primern für IKK-β, SOCS-3, PTEN, PTP-IB, JNK-1 durchgeführt B. TLR-4, IL-1β, IR, IRS-1, AKT-2, GLUT-4 (Life Technologies, MD). Alle Werte werden auf die Expression einer Gruppe von Haushaltsgenen normalisiert, darunter Aktin, Ubiquitin C und Cyclophilin A. Der verwendete Normalisierungsfaktor wird von der GeneNorm-Software berechnet und basiert auf den Werten aller verwendeten Haushaltsgene.

Western-Blotting: MNC- und Fettgewebe-Gesamtzelllysate werden hergestellt. Elektrophorese und Immunoblotting werden wie zuvor beschrieben durchgeführt (13). Polyklonale Antikörper gegen IR, AKT-2, SOCS-3, IKK-β und Aktin werden verwendet und alle Werte werden für die Beladung mit Aktin korrigiert.

Plasmamessungen: ELISA wird verwendet, um Plasmakonzentrationen von Insulin, C-reaktivem Protein, Adiponektin, TNF-α und IL-1β zu messen. Die FFA-Konzentrationen werden durch einen kolorimetrischen Assay gemessen. Die Forschungslabormessungen werden im Endokrinlabor in der Doisy Hall durchgeführt.

Datenanalyse: Der Schwerpunkt der vorgeschlagenen Forschung liegt auf der Bewertung der Wirksamkeit der Behandlung mit Pioglitazon bei Männern mit Insulinsensitivität, die ADT erhalten. Transformationen der Daten, um statistische Annahmen zu erfüllen, können in Erwägung gezogen werden. Die Ergebnisse werden als Mittelwert ± Standardabweichung berechnet. Der primäre Endpunkt der Studie ist der Nachweis eines Unterschieds in der Insulinsensitivität, gemessen anhand der Ganzkörper-Glukoseaufnahme während der EHC nach der Behandlung mit Pioglitazon im Vergleich zu Placebo. Es gibt keine früheren Studien, die die Wirkung von Pioglitazon bei Männern untersuchten, die sich einer ADT unterziehen. Studien mit Pioglitazon bei Patienten mit Typ-2-Diabetes haben jedoch eine Erhöhung der Insulinsensitivität um ~30 % gezeigt (14-16). Die Veränderung der Insulinsensitivität nach Pioglitazon oder Placebo über 24 Wochen wird zwischen den Gruppen durch einen ungepaarten t-Test verglichen. Bei einem geschätzten Unterschied in der Insulinsensitivität von 30 % sollte eine Stichprobengröße von 22 Patienten pro Behandlungsgruppe (unter Annahme einer Drop-out-Rate von 20 %) eine ausreichende Aussagekraft (Beta = 0,8) bieten, um einen signifikanten Unterschied (Alpha = 0,05) zu erkennen. vorausgesetzt, die Standardabweichung der Residuen ist nicht größer als die mittlere Differenz. Somit werden 44 Männer in die Studie rekrutiert.

Sekundäre Endpunkte: Die sekundären Endpunkte der Studie werden der Vergleich der relativen Veränderung gegenüber dem Ausgangswert bei HOMA-IR, Insulinsignalisierung und Entzündungsmediatoren nach Pioglitazon oder Placebo sein.