Insulineresistentie na ADT voor prostaat CA

STUDIEPLAN De studie zal worden uitgevoerd aan de Saint Louis University. De onderzoekers zijn van plan een prospectieve, gerandomiseerde, dubbelblinde, placebo-gecontroleerde studie uit te voeren bij 44 mannen met niet-uitgezaaide prostaatkanker die ADT zullen krijgen met een langwerkende GnRH-agonist. Patiënten zullen worden gerekruteerd uit de klinische praktijk van de afdeling Urologie. De patiënten die van plan zijn ADT te ondergaan als onderdeel van de standaardbehandeling voor hun prostaatkanker, krijgen de keuze om zich in te schrijven voor het onderzoek voordat met ADT wordt begonnen.

Studieproefpersonen ondergaan EHC, onderhuidse vetbiopsie en er wordt een bloedmonster afgenomen voordat met ADT wordt begonnen. De proefpersonen worden vervolgens gerandomiseerd naar dagelijks 30 mg pioglitazon of placebotablet gedurende 6 maanden. Bloedmonsters zullen 2 en 4 maanden na de start van het onderzoeksgeneesmiddel worden afgenomen. Het laatste studiebezoek is na 6 maanden. Onderwerpen ondergaan EHC, vetbiopsie en bloedafname en worden uit het onderzoek ontslagen. Studiebezoeken zullen worden uitgevoerd in het klinisch onderzoekscentrum van de afdeling Endocrinologie in Salus Center.

screening:

Alle proefpersonen zullen de volgende procedures doorlopen voorafgaand aan deelname aan het onderzoek:-

1. Medische geschiedenis. Proefpersonen die insuline of sulfonylureumderivaten gebruiken voor diabetes zullen erop worden gewezen dat het gebruik van pioglitazon kan leiden tot lage bloedsuikers. Personen met congestief hartfalen zullen op de hoogte worden gebracht van de mogelijkheid dat hun oedeem of kortademigheid kan verergeren.
2. Fysiek examen
3. Geïnformeerde toestemming
4. Laboratoriumtest: CBC en uitgebreid metabool panel (CMP) indien niet beschikbaar in medische dossiers van de afgelopen 3 maanden

Proefpersonen die in aanmerking komen en ermee instemmen om deel te nemen aan het onderzoek, zullen een nummer toegewezen krijgen door een geautomatiseerd programma voor het genereren van willekeurige getallen en zullen gerandomiseerd worden (1:1) om pioglitazon of placebo te krijgen. Een niet-geblindeerde apotheker bereidt het onderzoeksproduct voor. Studieonderzoekers, personeel en de studiedeelnemers zullen worden geblindeerd.

Baseline studiebezoek: Dit bezoek vindt plaats voorafgaand aan het starten van ADT. De deelnemers komen vasten en laten bloed afnemen om CBC, uitgebreid metabool panel (CMP), totaal en vrij testosteron, SHBG en LH te meten. MNC en serum worden bewaard voor het onderzoekslaboratorium. Er wordt een subcutane vetbiopsie uitgevoerd. Na de biopsie wordt EHC gestart (procedures hieronder beschreven). Proefpersonen krijgen gedurende 8 weken een voorraad pioglitazon 30 mg of placebopillen die cellulose bevatten. Voor patiënten die gemfibrozil gebruiken, is de dosis 15 mg per dag. De proefpersonen beginnen een week na het starten van de ADT met het onderzoeksgeneesmiddel. De proefpersonen nemen het studiegeneesmiddel eenmaal per dag in de ochtend in. Proefpersonen die insuline of sulfonylureumderivaten gebruiken, wordt gevraagd contact op te nemen met hun arts en het onderzoeksteam te melden als hypoglykemie wordt ervaren. De onderzoeksarts kan de diabetestherapie wijzigen als dit gerechtvaardigd is. Er zal een brief worden gestuurd naar de zorgverleners (die de diabetes van de patiënt beheren) van alle patiënten om hen op de hoogte te stellen van mogelijke wijzigingen in het diabetesregime van de patiënt. Alle proefpersonen met hartfalen zullen worden geadviseerd om kortademigheid of verergering van oedeem te melden aan hun arts en aan het onderzoeksteam.

Week 8 en 16 studiebezoeken: De deelnemers komen vasten en laten bloed prikken voor onderzoekslaboratorium. Deelnemers krijgen gedurende nog eens 8 weken een voorraad studiegeneesmiddel. Deelnemers worden gezien door een onderzoeksarts voor lichamelijk onderzoek. Diabetespatiënten die insuline of sulfonylureumderivaten gebruiken, bespreken hun bloedsuikers met de onderzoeksarts. De onderzoeksarts kan ervoor kiezen om de dosis te verlagen of insuline of sulfonylureumderivaten stop te zetten om hypoglykemie te voorkomen. Als de therapie wordt gewijzigd, wordt er een brief gestuurd naar de diabetesverpleegkundige van de patiënt.

Studiebezoek in week 24 (einde van de studie): De deelnemers komen vasten en er wordt bloed afgenomen om CBC, CMP, totaal en vrij testosteron, SHBG te meten. Er zal bloed worden afgenomen. MNC en serum worden bewaard voor het onderzoekslaboratorium. Subcutane vetbiopsie en EHC zullen worden uitgevoerd. De proefpersonen worden dan uit het onderzoek ontslagen en volgen met hun artsen. Diabetespatiënten zullen op de hoogte worden gebracht van de mogelijkheid dat hun bloedsuikers kunnen stijgen.

PROCEDURES Meting van glucoseopname door het hele lichaam door hyperinsulinemische euglycemische klem: De proefpersonen komen 's ochtends naar het klinische onderzoekscentrum na een nacht van 10 uur vasten. Patiënten met een bloedsuikerspiegel >180 mg/dl zullen opnieuw worden ingepland. Diabetesmedicatie wordt op de ochtend van EHC gehouden. Langwerkende insuline (indien gebruikt) wordt de avond voor de klem vastgehouden. Insulineklem wordt gestart met een voorbereidende dosis kortwerkende humane insuline gedurende 10 minuten en vervolgens een infuus met een snelheid van 80 mU/m2/min. 20% glucose-infusie wordt na 5 minuten gestart en de glucose-infusiesnelheid wordt getitreerd om de bloedglucoseconcentratie op 90 mg/dl te houden. Twintig mEq KCL wordt toegevoegd aan één liter 20% glucose. Insuline wordt gedurende drie uur toegediend. Er wordt bloed afgenomen om de insulineconcentraties te meten na 0, 60, 120, 150 en 180 minuten. De insulinegevoeligheid wordt berekend uit de glucose-infusiesnelheden tijdens de laatste 30 minuten van de klem (steady state) gedeeld door de steady state plasma-insulineconcentratie gedeeld door het lichaamsgewicht.

Vetaspiratieprocedure: Subcutane vetweefselaspiratie wordt uitgevoerd op de buik op 10 cm afstand van de navel. De huid wordt eerst geprepareerd en er wordt een steriel laken om het juiste gebied geplaatst. Onder plaatselijke verdoving wordt 500 mg-3 g vetweefsel verkregen. Het vetweefsel wordt gecentrifugeerd om bloed en vloeibare verontreinigingen te verwijderen. Het bovenste vetweefsel wordt verzameld in een aparte steriele buis, tweemaal gewassen met koude steriele fosfaatgebufferde zoutoplossing en gecentrifugeerd om de zoutoplossing te verwijderen. Totaal RNA, nucleaire extracten en totale cellysaten zullen worden bereid uit het vetweefsel.

Klinische laboratoriumassays: Totale en vrije testosteronconcentraties zullen worden gemeten door middel van vloeistofchromatografie, tandemmassaspectrometrie en evenwichtsdialyse (12). SHBG, LH, CBC, CMP zullen worden gemeten met standaardbepalingen. Alle metingen worden uitgevoerd door Quest diagnostics.

Isolatie van mononucleaire cellen (MNC): bloedmonsters worden verzameld in Na-EDTA en zorgvuldig in lagen op Lympholyte-medium aangebracht (Cedarlane Laboratories, Hornby, ON). Monsters worden gecentrifugeerd totdat twee banden zich scheiden aan de bovenkant van de RBC-pellet. De MNC-band wordt geoogst en twee keer gewassen met Hank's uitgebalanceerde zoutoplossing. Deze methode levert opbrengsten op van meer dan 95% MNC-bereiding.

Kwantificering van mRNA-expressie door RT-PCR: Expressie van inflammatoire mediatoren die betrokken zijn bij insulineresistentie en degenen die insulinesignalering bemiddelen, zal worden getest door RT-PCR in mRNA geïsoleerd uit MNC en vetweefsel. Totaal RNA zal worden geïsoleerd uit MNC en vetweefsel met behulp van de in de handel verkrijgbare RNAqueous®-4PCR-kit en de RNA-isolatiekit voor vetweefsel (Ambion, Austin, TX). Realtime RT-PCR zal worden uitgevoerd met behulp van Stratagene Mx3000P QPCR-systeem (La Jolla, CA), Sybergreen master mix (Qiagen, CA) en genspecifieke primers voor IKK-β, SOCS-3, PTEN, PTP-IB, JNK-1 , TLR-4, IL-1β, IR, IRS-1, AKT-2, GLUT-4 (Life Technologies, MD). Alle waarden worden genormaliseerd naar de expressie van een groep huishoudgenen, waaronder actine, ubiquitine C en cyclofiline A. De gebruikte normalisatiefactor wordt berekend door GeneNorm-software en is gebaseerd op de waarden van alle gebruikte huishoudgenen.

Western blotting: MNC en totale cellysaten van vetweefsel zullen worden bereid. Elektroforese en immunoblotting zullen worden uitgevoerd zoals eerder beschreven (13). Polyklonale antilichamen tegen IR, AKT-2, SOCS-3, IKK-β en actine zullen worden gebruikt en alle waarden zullen worden gecorrigeerd voor het laden naar actine.

Plasmametingen: ELISA zal worden gebruikt om de plasmaconcentraties van insuline, C-reactief proteïne, adiponectine, TNF-α en IL-1β te meten. FFA-concentraties zullen worden gemeten met een colorimetrische assay. De metingen van het onderzoekslaboratorium zullen worden uitgevoerd in het endocriene laboratorium in Doisy Hall.

Gegevensanalyse: De focus van het voorgestelde onderzoek is het evalueren van de werkzaamheid van behandeling met pioglitazon bij mannen die gevoelig zijn voor insuline en ADT krijgen. Transformaties van de gegevens om aan statistische aannames te voldoen, kunnen worden overwogen. De resultaten worden berekend als gemiddelde ± standaarddeviatie. Het primaire eindpunt van de studie is het detecteren van een verschil in insulinegevoeligheid, gemeten aan de hand van glucoseopname door het hele lichaam, tijdens EHC na behandeling met pioglitazon in vergelijking met placebo. Er zijn geen eerdere studies die het effect van pioglitazon analyseren bij mannen die ADT ondergaan. Studies met pioglitazon bij patiënten met diabetes type 2 hebben echter een toename van de insulinegevoeligheid van ~30% aangetoond (14-16). Verandering in insulinegevoeligheid na pioglitazon of placebo gedurende 24 weken zal tussen de groepen worden vergeleken door middel van een ongepaarde t-test. Bij een schatting van een verschil in insulinegevoeligheid van 30% zou een steekproef van 22 patiënten per behandelingsgroep (uitgaande van een uitvalpercentage van 20%) voldoende power (bèta = 0,8) moeten bieden om een ​​significant verschil te detecteren (alfa = 0,05). op voorwaarde dat de standaarddeviatie van de residuen niet groter is dan het gemiddelde verschil. Er zullen dus 44 mannen worden gerekruteerd in het onderzoek.

Secundaire eindpunten: De secundaire eindpunten voor de studie zullen een vergelijking zijn van de relatieve verandering ten opzichte van baseline in HOMA-IR, insulinesignalering en ontstekingsmediatoren na pioglitazon of placebo.