Résistance à l'insuline après ADT pour la prostate CA

PLAN D'ÉTUDE L'étude sera menée à l'Université Saint Louis. Les chercheurs prévoient de mener un essai prospectif, randomisé, en double aveugle et contrôlé par placebo chez 44 hommes atteints d'un cancer de la prostate non métastatique qui recevront un ADT avec un agoniste de la GnRH à longue durée d'action. Les patients seront recrutés dans la pratique clinique de la division d'urologie. Les patients qui envisagent de subir l'ADT dans le cadre du traitement standard de leur cancer de la prostate se verront offrir le choix de s'inscrire à l'étude avant de commencer l'ADT.

Les sujets de l'étude subiront une EHC, une biopsie de la graisse sous-cutanée et un échantillon de sang sera prélevé avant de commencer l'ADT. Les sujets seront ensuite randomisés pour recevoir 30 mg de pioglitazone ou un comprimé placebo par jour pendant 6 mois. Des échantillons de sang seront prélevés 2 et 4 mois après l'initiation du médicament à l'étude. La visite d'étude finale aura lieu à 6 mois. Les sujets subiront une EHC, une biopsie de la graisse et un prélèvement sanguin et seront sortis de l'étude. Des visites d'étude seront effectuées au centre de recherche clinique de la division d'endocrinologie du centre Salus.

Dépistage:

Tous les sujets effectueront les procédures suivantes avant de participer à l'étude : -

1. Antécédents médicaux. Les sujets qui prennent de l'insuline ou des sulfonylurées pour le diabète seront informés que l'utilisation de la pioglitazone peut entraîner une hypoglycémie. Les sujets souffrant d'insuffisance cardiaque congestive seront informés de la possibilité que leur œdème ou leur essoufflement puisse s'aggraver.
2. Examen physique
3. Consentement éclairé
4. Test de laboratoire : CBC et panel métabolique complet (CMP) s'ils ne sont pas disponibles dans les dossiers médicaux des 3 derniers mois

Les sujets qui se qualifient et consentent à participer à l'étude se verront attribuer un numéro par un programme informatisé de génération de nombres aléatoires et seront randomisés (1:1) pour recevoir soit la pioglitazone, soit un placebo. Un pharmacien non aveugle préparera le produit à l'étude. Les investigateurs de l'étude, le personnel et les participants à l'étude seront en aveugle.

Visite d'étude de base : cette visite aura lieu avant le début de l'ADT. Les participants viendront à jeun et subiront une prise de sang pour mesurer le CBC, le panel métabolique complet (CMP), la testostérone totale et libre, la SHBG et la LH. Le MNC et le sérum seront stockés pour le laboratoire de recherche. Une biopsie de la graisse sous-cutanée sera réalisée. Suite à la biopsie, EHC sera lancé (procédures décrites ci-dessous). Les sujets recevront un approvisionnement de 8 semaines de pioglitazone 30 mg ou de pilules placebo contenant de la cellulose. Pour les patients prenant du gemfibrozil, la dose sera de 15 mg par jour. Les sujets commenceront le médicament à l'étude une semaine après le début de l'ADT. Les sujets prendront le médicament à l'étude une fois par jour le matin. Les sujets qui prennent de l'insuline ou des sulfonylurées seront invités à contacter leur médecin et à signaler à l'équipe de l'étude en cas d'hypoglycémie. Le médecin de l'étude peut modifier le traitement du diabète si nécessaire. Une lettre sera envoyée aux prestataires (qui gèrent le diabète du patient) de tous les patients les informant des changements possibles dans le traitement du diabète du patient. Il sera conseillé à tous les sujets souffrant d'insuffisance cardiaque de signaler l'essoufflement ou l'aggravation de l'œdème à leur médecin et à l'équipe de l'étude.

Semaines 8 et 16 Visites d'étude : Les participants viendront à jeun et subiront une prise de sang pour le laboratoire de recherche. Les participants recevront un approvisionnement en médicament à l'étude pendant 8 semaines supplémentaires. Les participants seront vus par un médecin de l'étude pour un examen physique. Les patients diabétiques utilisant de l'insuline ou des sulfonylurées discuteront de leur glycémie avec le médecin de l'étude. Le médecin de l'étude peut choisir de diminuer la dose ou d'arrêter l'insuline ou les sulfonylurées pour éviter l'hypoglycémie. Si le traitement est modifié, une lettre sera envoyée au fournisseur de diabète du patient.

Visite d'étude de la semaine 24 (fin de l'étude) : les participants viendront à jeun et subiront une prise de sang pour mesurer le CBC, le CMP, la testostérone totale et libre, la SHBG. Le sang sera prélevé. Le MNC et le sérum seront stockés pour le laboratoire de recherche. Une biopsie de la graisse sous-cutanée et un EHC seront effectués. Les sujets seront alors sortis de l'étude et suivis par leurs médecins. Les patients diabétiques seront informés de la possibilité que leur glycémie puisse augmenter.

PROCÉDURES Mesure de l'absorption de glucose dans tout le corps par un clamp euglycémique hyperinsulinémique : Les sujets viendront au centre de recherche clinique le matin après une nuit de jeûne de 10 heures. Les patients avec une glycémie> 180 mg / dl seront reprogrammés. Les médicaments contre le diabète auront lieu le matin de l'EHC. L'insuline à action prolongée (si elle est prise) aura lieu la veille du clampage. Le clamp à insuline sera démarré avec une dose d'amorçage d'insuline humaine à action courte administrée en 10 minutes, puis une perfusion à un débit de 80 mU/m2/min. La perfusion de glucose à 20 % commencera à 5 minutes et le débit de perfusion de glucose sera titré pour maintenir la concentration de glucose dans le sang à 90 mg/dl. Vingt mEq de KCL seront ajoutés à un litre de glucose à 20 %. L'insuline sera perfusée pendant trois heures. Un échantillon de sang sera prélevé pour mesurer les concentrations d'insuline à 0, 60, 120, 150 et 180 minutes. La sensibilité à l'insuline sera calculée à partir des débits de perfusion de glucose au cours des 30 dernières minutes de la pince (état d'équilibre) divisés par la concentration d'insuline plasmatique à l'état d'équilibre divisée par le poids corporel.

Procédure d'aspiration des graisses : une aspiration sous-cutanée des tissus adipeux sera effectuée sur l'abdomen à une distance de 10 cm de l'ombilic. La peau sera d'abord préparée et un champ stérile sera placé autour de la zone appropriée. Sous anesthésie locale, 500mg-3g de tissu adipeux seront obtenus. Le tissu adipeux sera centrifugé pour éliminer les contaminants sanguins et liquides. Le tissu adipeux supérieur sera collecté dans un tube stérile séparé, lavé deux fois avec une solution saline tamponnée au phosphate stérile froide et centrifugé pour éliminer la solution saline. L'ARN total, les extraits nucléaires et les lysats cellulaires totaux seront préparés à partir du tissu adipeux.

Tests de laboratoire clinique : les concentrations de testostérone totale et libre seront mesurées par chromatographie liquide, spectrométrie de masse en tandem et dialyse à l'équilibre (12). SHBG, LH, CBC, CMP seront mesurés par des tests standards. Toutes les mesures seront effectuées par les diagnostics Quest.

Isolement des cellules mononucléaires (MNC) : Des échantillons de sang seront prélevés dans du Na-EDTA et soigneusement déposés sur du milieu Lympholyte (Cedarlane Laboratories, Hornby, ON). Les échantillons seront centrifugés jusqu'à ce que deux bandes se séparent en haut du culot RBC. La bande MNC sera récoltée et lavée deux fois avec la solution saline équilibrée de Hank. Cette méthode fournit des rendements supérieurs à 95 % de préparation de MNC.

Quantification de l'expression de l'ARNm par RT-PCR : L'expression des médiateurs inflammatoires impliqués dans la résistance à l'insuline et ceux qui interviennent dans la signalisation de l'insuline sera testée par RT-PCR dans l'ARNm isolé des MNC et du tissu adipeux. L'ARN total sera isolé à partir de MNC et de tissu adipeux à l'aide du kit RNAqueous®-4PCR et du kit d'isolement d'ARN de tissu adipeux disponibles dans le commerce (Ambion, Austin, TX). La RT-PCR en temps réel sera réalisée à l'aide du système Stratagene Mx3000P QPCR (La Jolla, CA), du mélange maître Sybergreen (Qiagen, CA) et des amorces spécifiques aux gènes pour IKK-β, SOCS-3, PTEN, PTP-IB, JNK-1 , TLR-4, IL-1β, IR, IRS-1, AKT-2, GLUT-4 (Life Technologies, MD). Toutes les valeurs seront normalisées à l'expression d'un groupe de gènes domestiques comprenant l'actine, l'ubiquitine C et la cyclophiline A. Le facteur de normalisation utilisé est calculé par le logiciel GeneNorm et est basé sur les valeurs de tous les gènes domestiques utilisés.

Western blot : des lysats cellulaires totaux de MNC et de tissu adipeux seront préparés. L'électrophorèse et l'immunotransfert seront effectués comme décrit précédemment (13). Des anticorps polyclonaux contre IR, AKT-2, SOCS-3, IKK-β et l'actine seront utilisés et toutes les valeurs seront corrigées pour le chargement en actine.

Mesures plasmatiques : ELISA sera utilisé pour mesurer les concentrations plasmatiques d'insuline, de protéine C-réactive, d'adiponectine, de TNF-α et d'IL-1β. Les concentrations de FFA seront mesurées par un dosage colorimétrique. Les mesures du laboratoire de recherche seront réalisées dans le laboratoire endocrinien de Doisy Hall.

Analyse des données : L'objectif de la recherche proposée est d'évaluer l'efficacité du traitement par la pioglitazone sur les hommes sensibles à l'insuline recevant la TPA. Des transformations des données afin de répondre à des hypothèses statistiques peuvent être envisagées. Les résultats seront calculés sous forme de moyenne ± écart type. Le critère d'évaluation principal de l'étude est de détecter une différence de sensibilité à l'insuline mesurée par l'absorption de glucose dans l'ensemble du corps pendant l'EHC après le traitement par la pioglitazone par rapport au placebo. Il n'y a pas d'études antérieures analysant l'effet de la pioglitazone chez les hommes subissant une ADT. Cependant, des études sur la pioglitazone chez des patients atteints de diabète de type 2 ont montré une augmentation de la sensibilité à l'insuline d'environ 30 % (14-16). La modification de la sensibilité à l'insuline après pioglitazone ou placebo pendant 24 semaines sera comparée entre les groupes par un test t non apparié. En estimant une différence de sensibilité à l'insuline de 30 %, un échantillon de 22 patients par groupe de traitement (en supposant un taux d'abandon de 20 %) devrait fournir une puissance suffisante (Bêta = 0,8) pour détecter une différence significative (alpha = 0,05), à condition que l'écart type des résidus ne soit pas supérieur à la différence moyenne. Ainsi 44 hommes seront recrutés dans l'étude.

Critères d'évaluation secondaires : les critères d'évaluation secondaires de l'étude seront la comparaison du changement relatif par rapport à l'inclusion dans HOMA-IR, la signalisation de l'insuline et les médiateurs inflammatoires après pioglitazone ou placebo.