Resistência à insulina após ADT para próstata CA

PLANO DE ESTUDO O estudo será realizado na Saint Louis University. Os investigadores planejam conduzir um estudo prospectivo, randomizado, duplo-cego, controlado por placebo em 44 homens com câncer de próstata não metastático que receberão ADT com agonista GnRH de ação prolongada. Os pacientes serão recrutados da prática clínica da divisão de Urologia. Os pacientes que planejam se submeter à ADT como parte do tratamento padrão para o câncer de próstata terão a opção de se inscrever no estudo antes de iniciar a ADT.

Os sujeitos do estudo serão submetidos a EHC, biópsia de gordura subcutânea e uma amostra de sangue coletada antes de iniciar a ADT. Os indivíduos serão então randomizados para 30 mg de pioglitazona ou placebo diariamente por 6 meses. Amostras de sangue serão coletadas 2 e 4 meses após o início do medicamento do estudo. A visita de estudo final será aos 6 meses. Os indivíduos serão submetidos a EHC, biópsia de gordura e coleta de sangue e serão liberados do estudo. As visitas de estudo serão realizadas no centro de pesquisa clínica da divisão de Endocrinologia do Salus Center.

Triagem:

Todos os sujeitos completarão os seguintes procedimentos antes de participar do estudo:-

1. Histórico médico. Indivíduos que estão tomando insulina ou sulfoniluréias para diabetes serão avisados ​​de que o uso de pioglitazona pode levar a níveis baixos de açúcar no sangue. Indivíduos com insuficiência cardíaca congestiva serão avisados ​​sobre a possibilidade de agravamento do edema ou falta de ar.
2. Exame físico
3. Consentimento informado
4. Teste de laboratório: CBC e painel metabólico abrangente (CMP) se não estiver disponível nos registros médicos dos últimos 3 meses

Os indivíduos que se qualificarem e consentirem em participar do estudo receberão um número por um programa computadorizado de geração de números aleatórios e serão randomizados (1:1) para receber pioglitazona ou placebo. Um farmacêutico não cego preparará o produto do estudo. Os investigadores do estudo, a equipe e os participantes do estudo serão cegos.

Visita de estudo de linha de base: Esta visita acontecerá antes de iniciar a ADT. Os participantes virão em jejum e terão sangue coletado para medir hemograma, painel metabólico abrangente (CMP), testosterona total e livre, SHBG e LH. MNC e soro serão armazenados para o laboratório de pesquisa. A biópsia de gordura subcutânea será realizada. Após a biópsia, o EHC será iniciado (procedimentos descritos abaixo). Os indivíduos receberão um suprimento de 8 semanas de pioglitazona 30 mg ou comprimidos de placebo contendo celulose. Para pacientes que tomam gemfibrozil, a dose será de 15 mg por dia. Os indivíduos iniciarão o medicamento do estudo uma semana após o início do ADT. Os sujeitos tomarão o medicamento do estudo uma vez ao dia pela manhã. Indivíduos que tomam insulina ou sulfoniluréias serão solicitados a entrar em contato com seu médico e relatar à equipe do estudo se ocorrer hipoglicemia. O médico do estudo pode alterar a terapia do diabetes, se necessário. Uma carta será enviada aos provedores (que gerenciam o diabetes do paciente) de todos os pacientes, notificando-os sobre possíveis mudanças no regime de diabetes do paciente. Todos os indivíduos com insuficiência cardíaca serão aconselhados a relatar falta de ar ou piora do edema a seus médicos e à equipe do estudo.

Visitas de estudo das semanas 8 e 16: Os participantes virão em jejum e terão sangue coletado para o laboratório de pesquisa. Os participantes receberão o medicamento do estudo por mais 8 semanas. Os participantes serão vistos por um médico do estudo para exame físico. Pacientes diabéticos usando insulina ou sulfoniluréias discutirão seus níveis de açúcar no sangue com o médico do estudo. O médico do estudo pode optar por diminuir a dose ou interromper a insulina ou as sulfoniluréias para evitar a hipoglicemia. Se a terapia for alterada, uma carta será enviada ao provedor de diabetes do paciente.

Visita do estudo da semana 24 (final do estudo): Os participantes virão em jejum e terão sangue coletado para medir hemograma completo, CMP, testosterona total e livre, SHBG. O sangue será tirado. MNC e soro serão armazenados para o laboratório de pesquisa. Biópsia de gordura subcutânea e EHC serão realizadas. Os sujeitos serão então liberados do estudo e seguirão com seus médicos. Os pacientes diabéticos serão informados sobre a possibilidade de que seus níveis de açúcar no sangue possam aumentar.

PROCEDIMENTOS Medição da captação de glicose corporal total por grampo euglicêmico hiperinsulinêmico: Os indivíduos chegarão ao centro de pesquisa clínica pela manhã após um jejum noturno de 10 horas. Pacientes com glicemia >180 mg/dl serão reagendados. As medicações para diabetes serão realizadas na manhã do EHC. A insulina de ação prolongada (se estiver sendo tomada) será realizada na noite anterior ao clamp. O clamp de insulina será iniciado com uma dose inicial de insulina humana de ação curta administrada em 10 minutos e, em seguida, uma infusão na taxa de 80mU/m2/min. A infusão de glicose a 20% será iniciada em 5 minutos e a taxa de infusão de glicose será titulada para manter a concentração de glicose no sangue em 90 mg/dl. Vinte mEq de KCL serão adicionados a um litro de glicose a 20%. A insulina será infundida por três horas. Amostras de sangue serão coletadas para medir as concentrações de insulina em 0, 60, 120, 150 e 180 minutos. A sensibilidade à insulina será calculada a partir das taxas de infusão de glicose durante os últimos 30 minutos do clamp (estado estacionário) dividida pela concentração plasmática de insulina no estado estacionário dividida pelo peso corporal.

Procedimento de aspiração de gordura: A aspiração de tecido adiposo subcutâneo será realizada no abdômen a uma distância de 10 cm do umbigo. A pele será primeiro preparada e uma cortina estéril será colocada ao redor da área apropriada. Sob anestesia local, serão obtidos 500mg-3g de tecido adiposo. O tecido adiposo será centrifugado para remover sangue e fluidos contaminantes. O tecido adiposo superior será coletado em um tubo estéril separado, lavado duas vezes com solução salina tamponada com fosfato estéril fria e centrifugado para remover a solução salina. RNA total, extratos nucleares e lisados ​​celulares totais serão preparados a partir do tecido adiposo.

Ensaios clínicos laboratoriais: As concentrações de testosterona total e livre serão medidas por cromatografia líquida tandem espectrometria de massa e diálise de equilíbrio (12). SHBG, LH, CBC, CMP serão medidos por ensaios padrão. Todas as medições serão realizadas pelo diagnóstico da Quest.

Isolamento de células mononucleares (MNC): Amostras de sangue serão coletadas em Na-EDTA e cuidadosamente colocadas em meio Lympholyte (Cedarlane Laboratories, Hornby, ON). As amostras serão centrifugadas até que duas bandas se separem no topo do pellet de RBC. A banda MNC será colhida e lavada duas vezes com solução salina balanceada de Hank. Este método fornece rendimentos superiores a 95% de preparação de MNC.

Quantificação da Expressão de mRNA por RT-PCR: A expressão de mediadores inflamatórios envolvidos na resistência à insulina e aqueles que medeiam a sinalização da insulina será testada por RT-PCR em mRNA isolado de MNC e tecido adiposo. O RNA total será isolado de MNC e tecido adiposo usando o kit RNAqueous®-4PCR disponível comercialmente e o kit de isolamento de RNA de tecido adiposo (Ambion, Austin, TX). RT-PCR em tempo real será realizado usando Stratagene Mx3000P QPCR System (La Jolla, CA), Sybergreen master mix (Qiagen, CA) e primers específicos de gene para IKK-β, SOCS-3, PTEN, PTP-IB, JNK-1 , TLR-4, IL-1β, IR, IRS-1, AKT-2, GLUT-4 (Life Technologies, MD). Todos os valores serão normalizados para a expressão de um grupo de genes housekeeping incluindo actina, ubiquitina C e ciclofilina A. O fator de normalização utilizado é calculado pelo software GeneNorm e é baseado nos valores de todos os genes housekeeping usados.

Western blotting: MNC e lisados ​​de células totais de tecido adiposo serão preparados. A eletroforese e imunotransferência serão realizadas conforme descrito anteriormente (13). Serão utilizados anticorpos policlonais contra IR, AKT-2, SOCS-3, IKK-β e actina e todos os valores serão corrigidos para carregamento em actina.

Medições plasmáticas: ELISA será usado para medir as concentrações plasmáticas de insulina, proteína C-reativa, adiponectina, TNF-α e IL-1β. As concentrações de FFA serão medidas por um ensaio colorimétrico. As medições laboratoriais de pesquisa serão realizadas no laboratório endócrino em Doisy Hall.

Análise de dados: O foco da pesquisa proposta é avaliar a eficácia do tratamento com pioglitazona em homens sensíveis à insulina recebendo ADT. Transformações dos dados a fim de atender a suposições estatísticas podem ser consideradas. Os resultados serão computados como média ± desvio padrão. O objetivo primário do estudo é detectar uma diferença na sensibilidade à insulina medida pela captação de glicose corporal total durante o EHC após o tratamento com pioglitazona em comparação com o placebo. Não há estudos anteriores analisando o efeito da pioglitazona em homens em ADT. No entanto, estudos de pioglitazona em pacientes com diabetes tipo 2 mostraram um aumento na sensibilidade à insulina de aproximadamente 30% (14-16). A mudança na sensibilidade à insulina após pioglitazona ou placebo por 24 semanas será comparada entre os grupos pelo teste t não pareado. Estimando uma diferença na sensibilidade à insulina de 30%, um tamanho de amostra de 22 pacientes por grupo de tratamento (assumindo uma taxa de abandono de 20%) deve fornecer poder adequado (Beta = 0,8) para detectar uma diferença significativa (alfa = 0,05), desde que o desvio padrão dos resíduos não seja maior que a diferença média. Assim, 44 homens serão recrutados no estudo.

Pontos finais secundários: Os pontos finais secundários para o estudo serão a comparação da mudança relativa da linha de base em HOMA-IR, sinalização de insulina e mediadores inflamatórios após pioglitazona ou placebo.