Insuliiniresistenssi ADT:n jälkeen eturauhasen CA:lle

OPINTOSUUNNITELMA Tutkimus suoritetaan Saint Louisin yliopistossa. Tutkijat suunnittelevat suorittavansa prospektiivisen, satunnaistetun, kaksoissokkoutetun, lumekontrolloidun tutkimuksen 44:llä ei-metastaattista eturauhassyöpää sairastavalla miehellä, jotka saavat ADT:tä pitkävaikutteisen GnRH-agonistin kanssa. Potilaat rekrytoidaan urologian osastolta. Potilaille, jotka suunnittelevat ADT-hoitoa osana eturauhassyövän perushoitoa, tarjotaan mahdollisuus osallistua tutkimukseen ennen ADT:n aloittamista.

Tutkimushenkilöille tehdään EHC, ihonalainen rasvabiopsia ja niistä otetaan verinäyte ennen ADT:n aloittamista. Koehenkilöt satunnaistetaan saamaan 30 mg pioglitatsonia tai lumetablettia päivittäin 6 kuukauden ajan. Verinäytteet otetaan 2 ja 4 kuukauden kuluttua tutkimuslääkkeen aloittamisesta. Viimeinen opintomatka kestää 6 kuukautta. Koehenkilöille tehdään EHC, rasvabiopsia ja verinäyte, ja heidät poistetaan tutkimuksesta. Opintovierailut tehdään Salus Centerin endokrinologian osaston kliinisen tutkimuskeskuksen tiloissa.

Seulonta:

Kaikki koehenkilöt suorittavat seuraavat toimenpiteet ennen tutkimukseen osallistumista: -

1. Lääketieteellinen historia. Diabeteksen hoitoon insuliinia tai sulfonyyliureoita käyttäville potilaille kerrotaan, että pioglitatsonin käyttö voi johtaa alhaiseen verensokeriin. Kongestiivista sydämen vajaatoimintaa sairastaville potilaille kerrotaan mahdollisuudesta, että heidän turvotuksensa tai hengenahdistus voi pahentua.
2. Fyysinen koe
3. Tietoinen suostumus
4. Laboratoriotesti: CBC ja kattava aineenvaihduntapaneeli (CMP), jos niitä ei ole saatavilla viimeisten 3 kuukauden lääketieteellisissä tiedoissa

Koehenkilöille, jotka ovat päteviä ja suostuvat osallistumaan tutkimukseen, annetaan numero tietokoneistetun satunnaislukujen generointiohjelman avulla, ja heidät satunnaistetaan (1:1) saamaan joko pioglitatsonia tai lumelääkettä. Sokeamaton apteekki valmistaa tutkimustuotteen. Tutkimuksen tutkijat, henkilökunta ja tutkimukseen osallistujat sokennetaan.

Perustutkimuskäynti: Tämä vierailu tapahtuu ennen ADT:n aloittamista. Osallistujat tulevat paastoamaan ja heiltä otetaan verikoe CBC:n, kattavan metabolisen paneelin (CMP), kokonais- ja vapaan testosteronin, SHBG:n ja LH:n mittaamiseksi. MNC ja seerumi säilytetään tutkimuslaboratoriota varten. Suoritetaan ihonalainen rasvabiopsia. Biopsian jälkeen EHC aloitetaan (toimenpiteet kuvataan alla). Koehenkilöille annetaan 8 viikoksi pioglitatsonia 30 mg tai selluloosaa sisältäviä lumelääkepillereitä. Gemfibrotsiilia käyttävien potilaiden annos on 15 mg vuorokaudessa. Koehenkilöt aloittavat tutkimuslääkkeen viikon kuluttua ADT:n aloittamisesta. Koehenkilöt ottavat tutkimuslääkkeen kerran päivässä aamulla. Insuliinia tai sulfonyyliureoita käyttäviä koehenkilöitä pyydetään ottamaan yhteyttä lääkäriinsä ja raportoimaan tutkimusryhmälle, jos heillä on hypoglykemiaa. Tutkimuslääkäri voi tarvittaessa muuttaa diabeteksen hoitoa. Kaikkien potilaiden palveluntarjoajille (jotka hoitavat potilaan diabetesta) lähetetään kirje, jossa ilmoitetaan mahdollisista muutoksista potilaan diabeteshoitoon. Kaikkia sydämen vajaatoimintaa sairastavia koehenkilöitä kehotetaan ilmoittamaan hengästyneisyydestä tai turvotuksen pahenemisesta lääkäreilleen ja tutkimusryhmälle.

Viikot 8 ja 16 opintovierailut: Osallistujat tulevat paastoamaan ja heiltä otetaan verikoe tutkimuslaboratorioon. Osallistujille tarjotaan tutkimuslääkettä vielä 8 viikoksi. Tutkimuslääkäri ottaa osallistujat vastaan ​​fyysistä tarkastusta varten. Insuliinia tai sulfonyyliureoita käyttävät diabeetikot keskustelevat verensokereistaan ​​tutkimuslääkärin kanssa. Tutkimuslääkäri voi pienentää annosta tai lopettaa insuliinin tai sulfonyyliureoiden hypoglykemian välttämiseksi. Jos hoitoa muutetaan, lähetetään kirje potilaan diabeteshoitajalle.

Viikon 24 opintokäynti (tutkimuksen loppu): Osallistujat tulevat paastoamaan ja heiltä otetaan verikoe CBC:n, CMP:n, kokonais- ja vapaan testosteronin, SHBG:n mittaamiseksi. Veri otetaan. MNC ja seerumi säilytetään tutkimuslaboratoriota varten. Suoritetaan ihonalainen rasvabiopsia ja EHC. Koehenkilöt poistetaan sitten tutkimuksesta ja seurataan lääkärinsä kanssa. Diabeetikoille kerrotaan mahdollisuudesta, että heidän verensokerinsa voivat nousta.

TOIMENPITEET Koko kehon glukoosin oton mittaus hyperinsulinemisella euglykeemisellä puristinlaitteella: Koehenkilöt saapuvat kliiniseen tutkimuskeskukseen aamulla yön yli 10 tunnin paaston jälkeen. Potilaat, joiden verensokeri on >180 mg/dl, määrätään uudelleen. Diabeteslääkkeet pidetään EHC-aamuna. Pitkävaikutteinen insuliini (jos sitä otetaan) pidetään puristinta edeltävänä iltana. Insuliinipuristin aloitetaan lyhytvaikutteisella ihmisinsuliinilla, joka annetaan 10 minuutin aikana, ja sitten infuusio nopeudella 80 mU/m2/min. 20 % glukoosi-infuusio aloitetaan 5 minuutin kohdalla ja glukoosi-infuusionopeus titrataan, jotta veren glukoosipitoisuus pysyy 90 mg/dl:ssa. 20 meekvivalenttia KCL:ää lisätään yhteen litraan 20 % glukoosia. Insuliinia infusoidaan kolmen tunnin ajan. Verinäyte otetaan insuliinipitoisuuksien mittaamiseksi 0, 60, 120, 150 ja 180 minuutin kohdalla. Insuliiniherkkyys lasketaan glukoosi-infuusionopeuksista puristimen viimeisen 30 minuutin aikana (steady state) jaettuna vakaan tilan plasman insuliinipitoisuudella jaettuna ruumiinpainolla.

Rasvan aspiraatiomenettely: Ihonalainen rasvakudos aspiroidaan vatsalle 10 cm:n etäisyydellä navasta. Iho valmistellaan ensin ja sopivan alueen ympärille asetetaan steriili liina. Paikallispuudutuksessa saadaan 500mg-3g rasvakudosta. Rasvakudos sentrifugoidaan veren ja nesteen epäpuhtauksien poistamiseksi. Ylempi rasvakudos kerätään erilliseen steriiliin putkeen, pestään kahdesti kylmällä steriilillä fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella ja sentrifugoidaan suolaliuoksen poistamiseksi. Kokonais-RNA, tumauutteet ja kokonaissolulysaatit valmistetaan rasvakudoksesta.

Kliiniset laboratoriokokeet: Kokonais- ja vapaan testosteronin pitoisuudet mitataan nestekromatografialla tandemmassaspektrometrialla ja tasapainodialyysillä (12). SHBG, LH, CBC, CMP mitataan standardimäärityksillä. Kaikki mittaukset suorittaa Quest-diagnostiikka.

Mononukleaaristen solujen (MNC) eristäminen: Verinäytteet kerätään Na-EDTA:ssa ja kerrostetaan huolellisesti Lympholyte-elatusaineelle (Cedarlane Laboratories, Hornby, ON). Näytteitä sentrifugoidaan, kunnes kaksi vyöhykettä erottuu punasolupelletin päällä. MNC-nauha kerätään ja pestään kahdesti Hankin tasapainotetulla suolaliuoksella. Tällä menetelmällä saadaan yli 95 %:n MNC-valmisteen saanto.

mRNA:n ilmentymisen kvantifiointi RT-PCR:llä: Insuliiniresistenssiin liittyvien ja insuliinisignalointia välittävien tulehdusvälittäjien ilmentyminen testataan RT-PCR:llä MNC:stä ja rasvakudoksesta eristetyssä mRNA:ssa. Kokonais-RNA eristetään MNC:stä ja rasvakudoksesta käyttämällä kaupallisesti saatavilla olevaa RNAqueous®-4PCR Kit -sarjaa ja rasvakudoksen RNA-eristyspakkausta (Ambion, Austin, TX). Reaaliaikainen RT-PCR suoritetaan käyttämällä Stratagene Mx3000P QPCR Systemiä (La Jolla, CA), Sybergreen master mixiä (Qiagen, CA) ja geenispesifisiä alukkeita IKK-β:lle, SOCS-3:lle, PTEN:lle, PTP-IB:lle, JNK-1:lle. , TLR-4, IL-1β, IR, IRS-1, AKT-2, GLUT-4 (Life Technologies, MD). Kaikki arvot normalisoidaan taloudenpitogeenien ryhmän ilmentymiseen mukaan lukien aktiini, ubikitiini C ja syklofiliini A. Käytetty normalisointitekijä lasketaan GeneNorm-ohjelmistolla ja perustuu kaikkien käytettyjen taloudenhoitogeenien arvoihin.

Western blotting: Valmistetaan MNC- ja rasvakudoksen kokonaissolulysaatit. Elektroforeesi ja immunoblottaus suoritetaan edellä kuvatulla tavalla (13). Polyklonaalisia vasta-aineita IR:tä, AKT-2:ta, SOCS-3:a, IKK-β:ta ja aktiinia vastaan ​​käytetään ja kaikki arvot korjataan aktiinin kuormituksen suhteen.

Plasmamittaukset: ELISA:a käytetään insuliinin, C-reaktiivisen proteiinin, adiponektiinin, TNF-α:n ja IL-1β:n plasmapitoisuuksien mittaamiseen. FFA-pitoisuudet mitataan kolorimetrisellä määrityksellä. Tutkimuslaboratoriomittaukset tehdään Doisy Hallin endokriinisessa laboratoriossa.

Tietojen analyysi: Ehdotetun tutkimuksen painopiste on arvioida pioglitatsonihoidon tehokkuutta ADT-hoitoa saavilla insuliiniherkillä miehillä. Voidaan harkita tietojen muuntamista tilastollisten oletusten täyttämiseksi. Tulokset lasketaan keskiarvona ± keskihajonta. Tutkimuksen ensisijainen päätetapahtuma on havaita ero insuliiniherkkyydessä mitattuna koko kehon glukoosin oton aikana EHC:n aikana pioglitatsonihoidon jälkeen lumelääkkeeseen verrattuna. Pioglitatsonin vaikutusta ADT-hoitoa saavilla miehillä ei ole aiemmin analysoitu. Tyypin 2 diabetespotilailla tehdyt pioglitatsonitutkimukset ovat kuitenkin osoittaneet insuliiniherkkyyden lisääntymistä ~30 % (14-16). Muutoksia insuliiniherkkyydessä pioglitatsonin tai lumelääkkeen jälkeen 24 viikon ajan verrataan ryhmien kesken parittoman t-testin avulla. Arvioimalla ero insuliiniherkkyydessä 30 %, näytteen koon, joka on 22 potilasta hoitoryhmää kohden (olettaen, että poistumisaste on 20 %), pitäisi tarjota riittävä teho (beeta = 0,8) merkittävän eron havaitsemiseksi (alfa = 0,05), edellyttäen, että jäännösten keskihajonta ei ole suurempi kuin keskimääräinen ero. Siten tutkimukseen rekrytoidaan 44 miestä.

Toissijaiset päätepisteet: Tutkimuksen toissijaiset päätepisteet ovat HOMA-IR:n, insuliinin signaalin ja tulehdusvälittäjien suhteellisen muutoksen vertailu lähtötasosta pioglitatsonin tai lumelääkkeen jälkeen.