Insulinooporność po ADT dla prostaty CA

PLAN STUDIÓW Badanie zostanie przeprowadzone na Saint Louis University. Badacze planują przeprowadzić prospektywne, randomizowane, podwójnie ślepe, kontrolowane placebo badanie z udziałem 44 mężczyzn z rakiem prostaty bez przerzutów, którzy otrzymają ADT z długo działającym agonistą GnRH. Pacjenci będą rekrutowani z praktyki klinicznej Oddziału Urologii. Pacjenci, którzy planują poddać się ADT w ramach standardowego leczenia raka prostaty, otrzymają możliwość wyboru udziału w badaniu przed rozpoczęciem ADT.

Osoby badane zostaną poddane EHC, biopsji podskórnej tkanki tłuszczowej i zostaną pobrane próbki krwi przed rozpoczęciem ADT. Pacjenci zostaną następnie losowo przydzieleni do grupy otrzymującej 30 mg pioglitazonu lub tabletki placebo codziennie przez 6 miesięcy. Próbki krwi zostaną pobrane 2 i 4 miesiące po rozpoczęciu podawania badanego leku. Ostatnia wizyta studyjna odbędzie się w wieku 6 miesięcy. Uczestnicy zostaną poddani EHC, biopsji tłuszczu i pobraniu krwi i zostaną zwolnieni z badania. Wizyty studyjne będą realizowane w klinicznym ośrodku badawczym Oddziału Endokrynologii Centrum Salus.

Ekranizacja:

Przed wzięciem udziału w badaniu wszyscy uczestnicy przejdą następujące procedury:

1. Historia medyczna. Osoby przyjmujące insulinę lub pochodne sulfonylomocznika z powodu cukrzycy zostaną poinformowane, że stosowanie pioglitazonu może prowadzić do obniżenia stężenia cukru we krwi. Pacjenci z zastoinową niewydolnością serca zostaną poinformowani o możliwości nasilenia obrzęku lub duszności.
2. Fizyczny egzamin
3. Świadoma zgoda
4. Test laboratoryjny: CBC i kompleksowy panel metaboliczny (CMP), jeśli nie są dostępne w dokumentacji medycznej z ostatnich 3 miesięcy

Osoby, które się zakwalifikują i wyrażą zgodę na udział w badaniu, otrzymają numer za pomocą komputerowego programu generowania liczb losowych i zostaną losowo przydzielone (1:1) do grupy otrzymującej pioglitazon lub placebo. Farmaceuta bez zaślepienia przygotuje badany produkt. Badacze, personel i uczestnicy badania zostaną zaślepieni.

Podstawowa wizyta studyjna: Wizyta ta odbędzie się przed rozpoczęciem ADT. Uczestnicy przyjdą na czczo i zostaną pobrani krew do pomiaru CBC, kompleksowego panelu metabolicznego (CMP), całkowitego i wolnego testosteronu, SHBG i LH. MNC i surowica będą przechowywane dla laboratorium badawczego. Zostanie wykonana biopsja podskórnej tkanki tłuszczowej. Po biopsji zostanie rozpoczęta EHC (procedury opisane poniżej). Pacjenci otrzymają 8-tygodniowy zapas 30 mg pioglitazonu lub pigułek placebo zawierających celulozę. W przypadku pacjentów przyjmujących gemfibrozyl dawka wynosi 15 mg na dobę. Pacjenci rozpoczną przyjmowanie badanego leku tydzień po rozpoczęciu ADT. Pacjenci będą przyjmować badany lek raz dziennie rano. Osoby przyjmujące insulinę lub pochodne sulfonylomocznika zostaną poproszone o kontakt z lekarzem i zgłoszenie się do zespołu badawczego w przypadku wystąpienia hipoglikemii. Lekarz prowadzący badanie może zmienić terapię przeciwcukrzycową, jeśli jest to uzasadnione. List zostanie wysłany do świadczeniodawców (którzy zajmują się cukrzycą pacjenta) wszystkich pacjentów, powiadamiając ich o możliwych zmianach w schemacie leczenia cukrzycy pacjenta. Wszystkim pacjentom z niewydolnością serca należy zalecić zgłaszanie duszności lub nasilenia obrzęku swoim lekarzom i zespołowi badawczemu.

Tygodnie 8 i 16 wizyty studyjne: Uczestnicy przyjdą na czczo i pobiorą krew do laboratorium badawczego. Uczestnicy otrzymają zapas badanego leku na kolejne 8 tygodni. Uczestnicy zostaną zbadani przez lekarza prowadzącego badanie w celu przeprowadzenia badania fizykalnego. Pacjenci z cukrzycą stosujący insulinę lub pochodne sulfonylomocznika omówią poziom cukru we krwi z lekarzem prowadzącym badanie. Lekarz prowadzący badanie może zdecydować o zmniejszeniu dawki lub odstawieniu insuliny lub pochodnych sulfonylomocznika, aby uniknąć hipoglikemii. Jeśli terapia zostanie zmieniona, list zostanie wysłany do lekarza diabetologa pacjenta.

Wizyta studyjna w 24. tygodniu (zakończenie badania): Uczestnicy przyjdą na czczo i zostaną pobrani krew w celu zmierzenia CBC, CMP, całkowitego i wolnego testosteronu, SHBG. Zostanie pobrana krew. MNC i surowica będą przechowywane dla laboratorium badawczego. Wykonana zostanie biopsja podskórnej tkanki tłuszczowej i EHC. Pacjenci zostaną następnie zwolnieni z badania i będą podążać za swoimi lekarzami. Pacjenci z cukrzycą zostaną poinformowani o możliwości zwiększenia stężenia cukru we krwi.

PROCEDURY Pomiar wychwytu glukozy w całym organizmie za pomocą hiperinsulinemicznego klamry euglikemicznej: Pacjenci przyjdą do ośrodka badań klinicznych rano po całonocnym 10-godzinnym poście. Pacjenci z poziomem cukru we krwi >180 mg/dl zostaną przeniesieni na inny termin. Leki na cukrzycę będą przechowywane rano EHC. Insulina długo działająca (jeśli jest przyjmowana) będzie trzymana na noc przed zaciskiem. Klamrę insulinową rozpocznie się od dawki pierwotnej krótkodziałającej insuliny ludzkiej podanej w ciągu 10 minut, a następnie wlewu z szybkością 80 mU/m2/min. Wlew 20% glukozy rozpocznie się po 5 minutach, a szybkość wlewu glukozy będzie dostosowywana tak, aby utrzymać stężenie glukozy we krwi na poziomie 90 mg/dl. Dwadzieścia mEq KCL zostanie dodane do jednego litra 20% glukozy. Insulina będzie podawana przez trzy godziny. Zostanie pobrana próbka krwi w celu zmierzenia stężenia insuliny po 0, 60, 120, 150 i 180 minutach. Wrażliwość na insulinę zostanie obliczona na podstawie szybkości wlewu glukozy podczas ostatnich 30 minut klamry (stan stacjonarny) podzielonej przez stężenie insuliny w osoczu w stanie stacjonarnym podzielone przez masę ciała.

Procedura aspiracji tłuszczu: Pobranie podskórnej tkanki tłuszczowej zostanie wykonane z brzucha w odległości 10 cm od pępka. Skóra zostanie najpierw przygotowana, a wokół odpowiedniego obszaru zostanie umieszczona sterylna serweta. W znieczuleniu miejscowym uzyska się 500mg-3g tkanki tłuszczowej. Tkanka tłuszczowa zostanie odwirowana w celu usunięcia zanieczyszczeń krwią i płynami. Górna tkanka tłuszczowa zostanie pobrana do oddzielnej sterylnej probówki, dwukrotnie przemyta zimną sterylną solą fizjologiczną buforowaną fosforanami i odwirowana w celu usunięcia soli fizjologicznej. Z tkanki tłuszczowej zostanie przygotowany całkowity RNA, ekstrakty jądrowe i całkowite lizaty komórkowe.

Kliniczne testy laboratoryjne: Całkowite i wolne stężenie testosteronu będzie mierzone za pomocą chromatografii cieczowej tandemowej spektrometrii mas i równowagowej dializy (12). SHBG, LH, CBC, CMP będą mierzone za pomocą standardowych testów. Wszystkie pomiary będą wykonywane przez diagnostykę Quest.

Izolacja komórek jednojądrzastych (MNC): Próbki krwi zostaną zebrane w Na-EDTA i ostrożnie nałożone na podłoże Lympholyte (Cedarlane Laboratories, Hornby, ON). Próbki będą wirowane do momentu, gdy na górze osadu RBC oddzielą się dwa prążki. Pasmo MNC zostanie zebrane i przemyte dwukrotnie zrównoważonym roztworem soli Hanka. Ta metoda zapewnia wydajność większą niż 95% preparatu MNC.

Kwantyfikacja ekspresji mRNA metodą RT-PCR: Ekspresja mediatorów stanu zapalnego zaangażowanych w oporność na insulinę oraz tych, które pośredniczą w przekazywaniu sygnałów przez insulinę, zostanie zbadana metodą RT-PCR w mRNA wyizolowanym z MNC i tkanki tłuszczowej. Całkowity RNA zostanie wyizolowany z MNC i tkanki tłuszczowej przy użyciu dostępnego w handlu zestawu RNAqueous®-4PCR Kit i zestawu do izolacji RNA tkanki tłuszczowej (Ambion, Austin, TX). Real Time RT-PCR zostanie przeprowadzony przy użyciu Stratagene Mx3000P QPCR System (La Jolla, CA), Sybergreen master mix (Qiagen, CA) i starterów specyficznych dla genów dla IKK-β, SOCS-3, PTEN, PTP-IB, JNK-1 , TLR-4, IL-1β, IR, IRS-1, AKT-2, GLUT-4 (Life Technologies, MD). Wszystkie wartości zostaną znormalizowane do ekspresji grupy genów metabolizmu podstawowego, w tym aktyny, ubikwityny C i cyklofiliny A. Stosowany współczynnik normalizacji jest obliczany przez oprogramowanie GeneNorm i jest oparty na wartościach wszystkich użytych genów metabolizmu podstawowego.

Western blotting: zostaną przygotowane MNC i całkowite lizaty komórek tkanki tłuszczowej. Elektroforezę i immunoblotting przeprowadza się w sposób opisany wcześniej (13). Zastosowane zostaną przeciwciała poliklonalne przeciwko IR, AKT-2, SOCS-3, IKK-β i aktynie, a wszystkie wartości zostaną skorygowane pod kątem obciążenia aktyną.

Pomiary w osoczu: ELISA zostanie wykorzystany do pomiaru stężeń w osoczu insuliny, białka C-reaktywnego, adiponektyny, TNF-α i IL-1β. Stężenia FFA będą mierzone w teście kolorymetrycznym. Laboratorium badawcze pomiary będą prowadzone w Pracowni Endokrynologicznej w Doisy Hall.

Analiza danych: Celem proponowanych badań jest ocena skuteczności leczenia pioglitazonem u mężczyzn z wrażliwością na insulinę otrzymujących ADT. Można rozważyć przekształcenia danych w celu spełnienia założeń statystycznych. Wyniki zostaną obliczone jako średnia ± odchylenie standardowe. Pierwszorzędowym punktem końcowym badania jest wykrycie różnicy we wrażliwości na insulinę mierzonej na podstawie wychwytu glukozy w całym organizmie podczas EHC po leczeniu pioglitazonem w porównaniu z placebo. Nie ma wcześniejszych badań analizujących wpływ pioglitazonu na mężczyzn poddawanych ADT. Jednak badania pioglitazonu u pacjentów z cukrzycą typu 2 wykazały wzrost wrażliwości na insulinę o ~30% (14-16). Zmiana wrażliwości na insulinę po pioglitazonie lub placebo przez 24 tygodnie zostanie porównana między grupami za pomocą niesparowanego testu t. Szacując różnicę we wrażliwości na insulinę na poziomie 30%, próba licząca 22 pacjentów na grupę leczoną (przy założeniu wskaźnika rezygnacji wynoszącego 20%) powinna zapewnić odpowiednią moc (Beta = 0,8) do wykrycia istotnej różnicy (alfa = 0,05), pod warunkiem, że odchylenie standardowe reszt nie jest większe niż różnica średnia. Tym samym do badania zostanie zrekrutowanych 44 mężczyzn.

Drugorzędowe punkty końcowe: Drugorzędowymi punktami końcowymi badania będzie porównanie względnej zmiany w stosunku do wartości wyjściowych w badaniu HOMA-IR, sygnalizacji insulinowej i mediatorach stanu zapalnego po podaniu pioglitazonu lub placebo.