皮膚の紫外線照射後の尿中の DNA 修復産物の定量化

プロジェクト名：

皮膚の紫外線照射後の尿中の DNA 修復産物の測定

1. 目的

   問題定義

   DNA損傷は、日光にさらされることによって皮膚に形成されます。 最も一般的な DNA 損傷は、チミン二量体と呼ばれます。 これらの損傷の多くは、「ヌクレオチド除去修復」(NER) によって修復され、尿を通して排泄されます。 この修復メカニズムの重要性は、皮膚がんを発症するリスクが非常に高い、NER に欠陥のある患者に見られます。 研究者は、皮膚の紫外線 (UV) 照射後の尿中のチミン二量体の量を定量化できるようにしたいと考えています。 このような試験システムの確立により、最終的には、既知の紫外線照射後の尿中の損傷を測定することにより、潜在的な光防御物質または潜在的な光発がん物質をテストすることが可能になります。 研究者は、このタイプの DNA 損傷の最高の分泌がいつ発生するかを、2 つの異なる照射レジメンを使用して調査したいと考えています。 以前は同位体法を使用して尿中のチミン二量体を定量化することができましたが、その方法はもはや利用できず、同位体を避けることが望ましいです。 研究者らは、超高圧液体クロマトグラフィー質量分析法 (UHPLC-MS) に基づく新しい方法を開発しました。

   仮説

   研究者は、尿中へのチミン二量体の最大排泄は、皮膚への UV 照射の 1 ～ 4 日後に起こるという仮説を立てています。

   バックグラウンド

   紫外線 (UV) 放射は皮膚の DNA 損傷を引き起こし、最終的に皮膚がんにつながる可能性があります。 チミン二量体は、紫外線が皮膚細胞の DNA に当たったときにのみ形成される DNA 損傷です。 ヌクレオチド除去修復 (NER) は、個々の細胞内のチミン二量体を修復および除去し、尿中に排泄します。 尿中のチミン二量体は、全 DNA 修復のバイオマーカーです。 過去には、同位体標識を使用して尿中のチミン二量体を定量化する方法が存在していました。 この方法は非常に高感度でしたが、分析時間が長くなりました。さらに、放射性同位体を使用しない作業環境が利点でした。

   研究者は、UHPLC-MS を使用した新しい分析方法の開発に成功しました。 この方法は、分析時間が高速でありながら、高感度と高選択性を備えています。 さらに、この装置は、複数の DNA 修飾を分析することができます。 さらに、高感度と高選択性があります。 この研究は概念実証研究であり、調査員は、2 つの異なる照射レジメンの後で尿を収集するのに最適な時期を調査したいと考えています。 この方法を使用して、新しい潜在的な光防御物質および光発がん物質を発見できるようになることが展望です。

2. 方法

   健常者の研究デザイン

   被験者 (n = 16 ～ 20) は、Bispebjerg の病院の Web サイトの通知によって募集されます。 被験者は最初のスクリーニング訪問に招待され、参加者は試験監督者のカタリーナ・レルチェから研究に関する口頭で情報を受け取ります。 安全で静かな環境を確保するために、会議は別室で行われます。 被験者は、参加者が必要に応じてアシスタントを連れてくることができることを通知されます。 書面によるインフォームドコンセントが保証され、スクリーニング訪問の少なくとも24時間後に行われます。

   これに基づいて、被験者は8〜10人の2つのグループに分けられます。 グループ１は、１回の標準紅斑線量（ＳＥＤ）で３回照射される。 1 SED は約 klの周りに10分の太陽。 13 デンマークの良い夏の日に。 グループ 2 は 3 SED で 1 回照射されます。 KLあたり30分。 13 デンマークの良い夏の日に。 グループ２は１日目に照射し、グループ１は１日目、２日目、３日目に照射する。

   被験者は、26本のF85 / 100W UV6チューブ（290〜350 nm、広域スペクトル）を備えた全身UVキャビン（Waldmann、Willing-Schwenningen、ドイツ）で照射されます。 照射時間はタイマー時計で設定され、希望の照射時間後に UV キャビンがオフになります。 照射時間は1SEDで16秒、3SEDで43秒です。 UV キャビンは、患者に使用される診療所の UV キャビンの測定にも使用される校正済みの機器を使用して測定されます。 被験者はキャビン内で立ち上がり、目や顔が放射線にさらされないようにスクリーンをオンにします。 照明の際は、下着のみを着用してください。男性はパンツ/ボクサー パンツ、女性はブラジャーとパンティーです。 実験は10月から3月の間に行われ、被験者が太陽からの紫外線を同時に受けず、DNA損傷を形成するのを避ける. 被験者は、調剤された容器に朝の尿を集め、最後の訪問まで自分の冷凍庫に保管する必要があります。

   朝の尿（2×50ml）を照射前（1日目と呼ばれる）、さらに最後の照射後8日目まで収集する。 グループ 1 では 10 日目、グループ 2 では 8 日目。グループ 1 では 2 x 50 ml x 10 の合計 1000 ml の尿が収集され、グループ 2 では 2 x 50 ml x 8 で合計 800 ml の尿が収集されます。各照明は、被験者の色素と赤み、および最終訪問で測定されます。 背中、胸、お尻の色素と赤みの測定を行います。

3. 統計上の考慮事項

   以前の研究では、1.3 nmol 4 の散乱 (SD)、0.80 の検出力、および 0.05 の有意水準で 1.7 nmol の増加が観測されており、調査員が検出力を0.80 で有意水準が 0.05 で、対応のある検定を使用します (検出力とサンプル サイズの計算、PS、ヴァンダービルト大学、バージョン 3.1.2)。 研究は最大 10 日間続くため、ドロップアウトが予想されるため、2 つのグループのそれぞれに 8 ～ 10 人が含まれます。合計16〜20人の健康な被験者。

4. 短期および長期のリスク、副作用、デメリット

   照明の後、および太陽の下にとどまった後、短期間の赤みのわずかなリスクがあります。 UV 線量 (3 SED) は、ほとんどすべてのデンマーク人が赤みを避けるように選択されています。 総紫外線量は、デンマークの夏の日中に太陽の下で 30 時間滞在することに相当します。 すべての被験者は、口頭と書面の両方で、リスクと起こりうる副作用について通知されます。

   バイオバンクは作成されません。 尿サンプルは採取後すぐに分析されます。 余分な生体物質は、分析後すぐに破壊されます。

5. 品質管理

   ヘルシンキ II 宣言は、優れた臨床研究の基準と同様に尊重されます。 患者の身体的および精神的完全性だけでなく、プライバシーの尊重も維持されます。 この研究は、電子システム Pactius の首都地域のデータ報告知識センターに登録されます。

6. データ保護と保管 一般的なデータ保護規則が尊重されます。 首都圏のデータを用いた研究は公的研究とみなされます。 この研究で収集されたデータの使用と配布については、同意プロセス中に患者と話し合います。 このプロジェクトは、電子システム Pactius で、デンマークの首都地域であるデータ レポートのナレッジ センターに報告されます。 被験者の名前、スタディ ID、生年月日のリストが作成されます。 収集されたすべてのデータは匿名化され、個人データの取り扱いに関するデンマークの法律と健康法によって保護されます。 データは登録され、試験完了後 5 年間、ビスペビア病院の皮膚科で保存されます。
7. 経済 実験の主導権を握ったのは薬剤師のカタリーナ・レルチェ、ハンス・クリスチャン・ウルフ教授、エンジニアのペーター・フィリップセンであり、調査員はすべて皮膚科、ビスペビャール病院から支払われています。 この実験への企業や外部資金からの寄付はありません。
8. 被験者への情報主任研究者である Catharina M. Lerche は、研究の目標、計画、およびリスクに関する明確な口頭および書面による情報を提供する責任があります。保健省と高齢者。 邪魔されない環境で、参加者は、1 人または複数の付添人を同席させる権利、参加は任意であり、研究中いつでも中止できることを知らされます。 被験者には十分な熟考時間（少なくとも 24 時間）が与えられます。 被験者は同意書に署名するよう求められます。
9. 結果の公開 肯定的、否定的、および決定的な結果が公開されます。 その目的は、ピアレビューされた国際皮膚科学ジャーナルおよび/または皮膚科学会議で結果を発表および発表することです。 結果の知的財産権は Bispebjerg Hospital に帰属します。 出版物は、バンクーバー ガイドラインに準拠します。
10. 倫理 個人情報と尿サンプルは、個人データ法と健康法に従って処理されます。 また、このプロジェクトは、参加者の健康と安全に関するリスクを最小限に抑えて実施されます。 この研究における副作用の潜在的なリスクは非常に小さいと予想されます。 エビデンスに基づく将来の利益の可能性と、この研究が提供する可能性のある将来の見通しは、試験への参加と比較検討する必要があります。 患者の権利と補償に関するデンマークの法律が守られています。