皮肤紫外线照射后尿液中 DNA 修复产物的定量

项目名称：

皮肤紫外线照射后尿液中DNA修复产物的测定

1. 目的

   问题定义

   阳光照射会在皮肤中形成 DNA 损伤。 最常见的 DNA 损伤称为胸腺嘧啶二聚体。 许多这些损伤是通过“核苷酸切除修复”（NER）修复并通过尿液排出体外的。 这种修复机制的重要性在 NER 有缺陷的患者身上可见，他们患皮肤癌的风险非常高。 研究人员希望能够量化皮肤受到紫外线 (UV) 照射后尿液中胸腺嘧啶二聚体的含量。 随着这样一个测试系统的建立，最终将有可能根据已知紫外线剂量后在尿液中测量的损伤来测试潜在的光保护物质或潜在的光致癌物质。 研究人员想使用两种不同的照射方案来研究何时会发生这种类型的 DNA 损伤的最高分泌。 以前可以使用同位素方法对尿液中的胸腺嘧啶二聚体进行定量，但该方法不再可用，最好避免使用同位素。 研究人员开发了一种基于超高压液相色谱-质谱 (UHPLC-MS) 的新方法。

   假设

   研究人员假设，尿液中胸腺嘧啶二聚体的最大排泄发生在皮肤受到紫外线照射后 1-4 天。

   背景

   紫外线 (UV) 辐射会导致皮肤 DNA 损伤，最终导致皮肤癌。 胸腺嘧啶二聚体是一种 DNA 损伤，只有当紫外线照射皮肤细胞中的 DNA 时才会形成。 核苷酸切除修复 (NER) 修复并去除单个细胞中的胸腺嘧啶二聚体，然后从尿液中排出。 尿液中的胸腺嘧啶二聚体是总 DNA 修复的生物标志物。 过去，存在一种使用同位素标记来量化尿液中胸腺嘧啶二聚体的方法。 该方法非常灵敏，但分析时间长，此外，从工作环境来看，避免使用放射性同位素是一个优势。

   研究人员已成功开发出一种使用 UHPLC-MS 的新分析方法。 该方法具有高灵敏度和高选择性，同时具有快速的分析时间。 此外，该设备还能够分析多种 DNA 修饰。 此外，具有高灵敏度和高选择性。 这项研究是一项概念验证研究，研究人员想调查在两种不同的照射方案之后什么时候尿液收集的最佳时间。 前景是能够使用该方法找到新的潜在光保护和光致癌物质。

2. 方法

   健康受试者的研究设计

   受试者 (n = 16-20) 是根据 Bispebjerg 医院网站上的通知招募的。 受试者将被邀请参加初步筛选访问，参与者将收到试验主管 Catharina Lerche 的口头信息。 会议在单独的房间举行，以确保安全和安静的环境。 受试者将被告知，如果愿意，参与者可以带一名助手。 将确保书面知情同意，并在筛选访问后至少 24 小时进行。

   基于此，受试者被分成 2 组，每组 8-10 人。 第 1 组用 1 个标准红斑剂量 (SED) 照射 3 次。 1 SED 相当于大约。 吉隆坡附近 10 分钟太阳。 13 日，在一个美好的丹麦夏日。 第 2 组用 3 SED 照射一次，相当于约 吉隆坡附近 30 分钟13 日，在一个美好的丹麦夏日。 第 2 组在第 1 天进行照射，第 1 组在第 1、2 和 3 天进行照射。

   受试者在全身紫外线舱（Waldmann，Willing-Schwenningen，德国）中接受 26 F85 / 100W UV6 管（290-350 nm，广谱）的照射。 照射时间在定时器时钟上设置，以便在所需的照射时间后 UV 舱关闭。 1 SED 的照射时间为 16 秒，3 SED 的照射时间为 43 秒。 紫外线舱是使用校准设备测量的，该设备也用于测量诊所中用于患者的紫外线舱。 受试者站在舱内并打开屏幕，这样他们的眼睛和脸就不会暴露在辐射下。 打光时，拍摄对象只穿内衣，男性为内裤/平角裤，女性为文胸和内裤。 实验在十月到三月之间进行，以避免受试者不同时接受来自太阳的紫外线辐射而形成DNA损伤。 受试者必须在分配的容器中收集晨尿，并且必须将其储存在自己的冰箱中直到最后一次就诊。

   在照射前收集晨尿 (2x 50 ml)，称为第 1 天，甚至直到最后一次照射后的第 8 天，即。 第 1 组第 10 天和第 2 组第 8 天。第 1 组收集 2 x 50 ml x 10 总共 1000 ml 尿液，第 2 组收集 2 x 50 ml x 8 总共 800 ml 尿液。之前和之后每次照明都会测量受试者的色素和发红程度以及最后一次就诊。 在背部、胸部和臀部进行色素和发红测量。

3. 统计考虑

   之前的研究已经观察到在配对测试中增加了 1.7 nmol，散射 (SD) 为 1.3 nmol 4，功效为 0.80，显着性水平为 0.05，那么当研究人员将功效设置为 7 人必须完成研究时0.80，显着性水平为 0.05，并使用配对检验（功效和样本量计算，PS，范德比尔特大学；版本 3.1.2）。 由于研究持续长达 10 天，预计会出现辍学，因此两组中的每组都包括 8-10 人，即。共有 16-20 个健康受试者。

4. 短期和长期的风险、副作用和缺点

   照明后以及在阳光下停留后，有轻微的短期发红风险。 已选择紫外线剂量 (3 SED)，以便几乎所有丹麦人都能避免发红。 总紫外线剂量相当于丹麦夏季中午在阳光下停留 ½ 小时。 将以口头和书面形式告知所有受试者有关风险和可能的副作用。

   不会创建生物样本库。 尿样在收集后立即进行分析。 分析后立即销毁多余的生物材料。

5. 质量控制

   赫尔辛基 II 宣言以及良好临床研究的标准将受到尊重。 尊重患者的隐私以及身心的完整性。 该研究将在首都地区的数据报告知识中心的电子系统 Packius 中注册。

6. 数据保护和存储 将遵守一般数据保护条例。 使用首都地区数据的研究被认为是公共研究。 本研究中收集的数据的使用和分发将在同意过程中与患者讨论。 该项目通过电子系统 Packius 报告给丹麦首都地区的数据报告知识中心。 准备了受试者姓名、研究 ID 和出生日期的列表。 所有收集到的数据都将被匿名化，并受丹麦有关个人数据处理的立法和《卫生法》的保护。 研究完成后，数据将在 Bispebjerg 医院皮肤科登记和存储 5 年。
7. 经济 实验的发起者是药剂师Catharina Lerche、Hans Christian Wulf教授和工程师Peter Philipsen，研究人员的费用全部由Bispebjerg医院皮肤科支付。 本次实验没有公司或外部资金的捐助。
8. 受试者信息 首席研究员 Catharina M. Lerche 负责提供有关研究目标、设计和风险的明确口头和书面信息，如“参与健康科学研究项目的信息和同意书”中所述卫生和老年人部。 在不受干扰的环境中，参与者将被告知他们有权让一名/或多名陪同人员在场，参与是自愿的，并且可以在研究期间随时退出。 受试者有足够的思考时间（至少 24 小时）。 将要求受试者签署同意书。
9. 结果公布 将公布阳性、阴性和结论性结果。 目的是在同行评审的国际皮肤病学杂志和/或皮肤病学会议上发表和展示结果。 结果的知识产权属于 Bispebjerg 医院。 出版物将符合温哥华准则。
10. 道德规范 个人信息和尿液样本根据《个人数据法》和《健康法》进行处理。 该项目的实施也将参与者的健康和安全风险降至最低。 预计本研究中不良反应的潜在风险很小。 应根据试验参与权衡本研究可能提供的基于证据的未来收益的潜力和未来前景。 丹麦关于患者权利和赔偿的法律得到遵守。