피부의 자외선 조사 후 소변 내 DNA 복구 제품의 정량화

프로젝트 제목:

피부의 UV 조사 후 소변에서 DNA 복구 제품 결정

1. 목적

   문제 정의

   DNA 손상은 태양 노출에 의해 피부에 형성됩니다. 가장 흔한 DNA 손상은 티민 다이머라고 합니다. 이러한 손상의 대부분은 "뉴클레오티드 절제 복구"(NER)에 의해 복구되고 소변을 통해 배설됩니다. 이 복구 메커니즘의 중요성은 피부암 발병 위험이 매우 높은 NER에 결함이 있는 환자에게서 나타납니다. 연구자들은 피부에 자외선(UV)을 조사한 후 소변에 있는 티민 다이머의 양을 정량화할 수 있기를 원합니다. 이러한 테스트 시스템을 구축하면 알려진 UV 선량 후 소변에서 측정된 손상을 기반으로 잠재적 광보호 물질 또는 잠재적 광발암성 물질을 테스트하는 것이 궁극적으로 가능할 것입니다. 연구자들은 두 가지 다른 방사선 요법을 사용하여 이러한 유형의 DNA 손상이 가장 많이 분비되는 시기를 조사하고자 합니다. 이전에는 동위 원소 방법을 사용하여 소변의 티민 이량체를 정량화할 수 있었지만 해당 방법은 더 이상 사용할 수 없으며 동위 원소를 피하는 것이 바람직합니다. 연구자들은 초고압 액체 크로마토그래피-질량 분석법(UHPLC-MS)을 기반으로 하는 새로운 방법을 개발했습니다.

   가설

   조사자들은 피부의 UV 조사 후 1-4일에 소변에서 티민 다이머의 최대 배설이 일어난다는 가설을 세웠습니다.

   배경

   자외선(UV)은 피부의 DNA 손상을 유발하여 결국 피부암으로 이어질 수 있습니다. 티민 다이머는 자외선이 피부 세포의 DNA에 닿을 때만 형성되는 DNA 손상입니다. 뉴클레오티드 절제 복구(NER)는 개별 세포에서 티민 이량체를 복구 및 제거한 다음 소변으로 배설합니다. 소변의 티민 다이머는 전체 DNA 복구에 대한 바이오마커입니다. 과거에는 동위원소 라벨링을 이용하여 소변 내 티민 다이머를 정량화하는 방법이 존재하였다. 이 방법은 매우 민감하지만 분석 시간이 길고 방사성 동위 원소를 사용하지 않는 작업 환경에서 이점이 있습니다.

   연구팀은 UHPLC-MS를 이용한 새로운 분석법 개발에 성공했다. 이 방법은 빠른 분석 시간을 가지면서 높은 감도와 높은 선택성을 가지고 있습니다. 또한, 이 장비는 여러 DNA 변형을 분석할 수 있습니다. 또한 높은 감도와 높은 선택성이 있습니다. 이 연구는 조사자가 소변 수집을 위한 가장 최적의 시간이 두 가지 다른 방사선 조사 요법 이후인 때를 조사하고자 하는 개념 증명 연구입니다. 이 방법을 사용하여 광발암성 물질뿐만 아니라 새로운 잠재적인 광 보호 물질을 찾을 수 있다는 관점입니다.

2. 방법

   건강한 피험자를 위한 연구 설계

   피험자(n = 16-20)는 Bispebjerg 병원 웹사이트의 공지를 통해 모집합니다. 피험자는 참가자가 시험 감독자 Catharina Lerche로부터 연구에 대한 구두 정보를 받는 초기 선별 방문에 초대됩니다. 회의는 안전하고 조용한 환경을 위해 별도의 방에서 진행됩니다. 피험자는 참가자가 원하는 경우 조수를 데려올 수 있음을 알립니다. 사전 서면 동의가 보장되며 스크리닝 방문 후 최소 24시간 후에 이루어집니다.

   이를 바탕으로 피험자는 8~10명씩 2개 그룹으로 나뉜다. 그룹 1은 1 표준 홍반 선량(SED)으로 3회 조사됩니다. 1 SED는 약에 해당합니다. kl 주위 10 분 태양. 좋은 덴마크 여름날 13시. 그룹 2는 3 SED로 한 번 조사되며 이는 약. KL 주변 30분. 좋은 덴마크 여름날 13시. 조사는 그룹 2의 경우 1일, 그룹 1의 경우 1, 2, 3일에 실시한다.

   26개의 F85/100W UV6 튜브(290-350 nm, 광역 스펙트럼)로 전신 UV 캐빈(Waldmann, Willing-Schwenningen, Germany)에서 피험자를 조사합니다. 조사 시간은 원하는 조사 시간 후에 UV 캐빈이 꺼지도록 타이머 시계에 설정됩니다. 조사 시간은 1 SED의 경우 16초, 3 SED의 경우 43초입니다. UV Cabin은 보정된 장비를 사용하여 측정되며, 병원에서 환자에게 사용되는 UV Cabin을 측정하는 데에도 사용됩니다. 피험자들은 선실에 서서 눈과 얼굴이 방사선에 노출되지 않도록 화면을 켠 상태입니다. 조명을 사용할 때 피사체는 속옷만 착용해야 하며, 남성은 속바지/사각반바지, 여성은 브래지어와 팬티를 착용해야 합니다. 실험은 10월에서 3월 사이에 수행되며 피험자가 동시에 태양으로부터 UV 방사선을 받지 않아 DNA 손상을 일으킬 수 있습니다. 피험자는 분배된 용기에 아침 소변을 수집하고 최종 방문까지 자신의 냉동고에 보관해야 합니다.

   아침 소변(2x 50 ml)은 조사 전(1일차라고 함)과 마지막 조사 후 8일차까지 수집됩니다. 1군은 10일째, 2군은 8일째. 1군은 2 x 50 ml x 10 총 1000 ml, 2군은 2 x 50 ml x 8 총 800 ml 소변을 채취합니다. 전과 후 각 조명은 피험자 및 최종 방문 시 색소와 발적을 측정합니다. 색소 및 발적 측정은 등, 가슴 및 엉덩이에서 수행됩니다.

3. 통계적 고려 사항

   이전 연구에서는 산란(SD) 1.3nmol 4, 검정력 0.80, 유의 수준 0.05로 1.7nmol이 증가하는 것을 관찰했습니다. 그런 다음 조사관이 검정력을 다음으로 설정하면 7명이 연구를 완료해야 합니다. 0.80이고 유의 수준은 0.05이며 대응 테스트(Power and Sample Size Calculation, PS, Vanderbilt University; 버전 3.1.2)를 사용합니다. 연구가 최대 10일 동안 지속되기 때문에 탈락이 예상될 수 있으므로 두 그룹 각각에 8-10명이 포함됩니다. 총 16-20명의 건강한 피험자.

4. 장단기 위험, 부작용 및 단점

   조명을 받은 후나 햇빛에 노출된 후에도 일시적으로 붉어지는 약간의 위험이 있습니다. 거의 모든 덴마크인이 발적을 피할 수 있도록 UV 선량(3 SED)을 선택했습니다. 총 UV 선량은 덴마크에서 여름 동안 한낮에 태양 아래에서 30분 동안 머무르는 것에 해당합니다. 모든 피험자는 위험과 가능한 부작용에 대해 구두 및 서면으로 통보받습니다.

   바이오뱅크가 생성되지 않습니다. 소변 샘플은 수집 직후에 분석됩니다. 과도한 생물학적 물질은 분석 직후 폐기됩니다.

5. 품질 관리

   헬싱키 II 선언은 훌륭한 임상 연구의 기준과 마찬가지로 존중될 것입니다. 환자의 신체적, 정신적 온전함뿐만 아니라 프라이버시에 대한 존중이 유지됩니다. 이 연구는 전자 시스템 Pactius의 수도권 데이터 보고를 위한 지식 센터에 등록됩니다.

6. 데이터 보호 및 저장 일반 데이터 보호 규정이 준수됩니다. 수도권 자료를 활용한 연구는 공공연구로 분류된다. 본 연구에서 수집된 데이터의 사용 및 배포는 동의 과정에서 환자와 논의될 것입니다. 이 프로젝트는 전자 시스템 Pactius를 통해 덴마크 수도권의 데이터 보고 지식 센터에 보고됩니다. 피험자의 이름, 연구 ID 및 생년월일 목록이 작성됩니다. 수집된 모든 데이터는 익명으로 처리되며 개인 데이터 및 보건법 처리에 관한 덴마크 법률에 의해 보호됩니다. 데이터는 연구 완료 후 Bispebjerg 병원 피부과에서 5년간 등록 및 저장됩니다.
7. 경제 실험을 주도한 것은 약사 Catharina Lerche, Hans Christian Wulf 교수, 엔지니어 Peter Philipsen이며 조사원은 모두 Bispebjerg 병원 피부과에서 급여를 받습니다. 이 실험에 대한 회사나 외부 자금의 기여는 없습니다.
8. 피험자에 대한 정보 주 조사관인 Catharina M. Lerche는 "건강 과학 연구 프로젝트에 참여하기 위한 정보 및 동의"에 명시된 바와 같이 연구의 목표, 설계 및 위험에 대한 명확한 구두 및 서면 정보를 제공할 책임이 있습니다. 보건 및 노인부. 방해받지 않는 환경에서 참가자는 한 명 이상의 참석자를 가질 수 있는 권리, 참여는 자발적이며 연구 중 언제든지 철회가 가능하다는 사실을 알게 됩니다. 피험자에게는 충분한 숙고 시간(최소 24시간)이 주어집니다. 피험자는 동의서에 서명해야 합니다.
9. 결과 발표 긍정적, 부정적, 결정적인 결과가 발표됩니다. 목표는 피어 리뷰를 거친 국제 피부과 저널 및/또는 피부과 학회에서 결과를 발표하고 발표하는 것입니다. 결과에 대한 지적 재산권은 Bispebjerg 병원에 있습니다. 간행물은 밴쿠버 가이드라인을 준수합니다.
10. 윤리 개인정보 및 소변 샘플은 개인정보법 및 보건법에 따라 처리됩니다. 이 프로젝트는 참가자의 건강 및 안전 위험을 최소화하면서 구현됩니다. 이 연구에서 부작용의 잠재적 위험은 매우 적을 것으로 예상됩니다. 이 연구가 제공할 수 있는 증거 기반 미래 이익의 잠재력과 미래 전망은 시험 참여와 비교하여 평가되어야 합니다. 환자의 권리 및 보상에 관한 덴마크 법률을 준수합니다.