不育症患者におけるマイクロキメリズム

研究者の知る限り、マイクロキメラ細胞の起源を特定したこれまでの研究は存在しないため、このパイロット研究では、男性のマイクロキメラ細胞からのDNA断片をRPL患者の息子からのDNA断片と比較する、新しく開発された遺伝子分析が使用される予定である。 ）と兄（たち）。

このパイロット研究は、マイクロキメラ細胞を同定する新しく開発された遺伝子検査の機能と能力を評価することを目的としています。 これらの調査を開始する前に、遺伝子分析で分析された DNA フラグメント (インデル) に、息子、娘、兄を区別するのに十分な有益な差異が含まれていることを確認するための予備調査が必要です。大きめのサンプル。 この検査が血縁者間のマイクロキメラ細胞の起源を確実に区別し、性別に関係なく機能することを保証するために、この研究には発端者の娘と息子の両方が含まれ、検査がこの能力を有するという確信を強化する。

10 sRPLとその兄と長子が含まれます。 合計: 約 30 個。

兄弟や子供も参加に同意している sRPL のみが含まれます。

12 ml EDTA 血漿の血液サンプルを sRPL 患者から採取します。 兄と子供から口腔粘膜の交換サンプルを採取します。

サンプルは遠心分離され、DNA を含むバフィーコートが患者から収集され、-80 °C で保存されます。 Y染色体のTSPY1遺伝子に位置するマルチコピーDYS14マーカーを検出するために、参照遺伝子に特異的なPCRマスターミックスを使用して、抽出されたDNAに対してリアルタイムPCR分析が実行されます。

また、抽出された DNA は、マルチプレックス PCR 分析で特定のプライマーとそれに関連するプローブを使用して増幅されます。 特異的プライマーは 10 の異なるインデルをターゲットにし、重複しないアンプリコン サイズを持つ 10 の PCR 産物を生成します。 PCR 分析後、GeneticAnalyzer と GeneMapper を使用したキャピラリー電気泳動によってフラグメントが分析されます。 違いが特定された場合、子供または兄のいずれかにのみ存在するインデル断片に特異的なプライマーとプローブを使用して、発端者のみからのサンプルに対して qPCR 分析が実行されます。 12 ウェルに 30,000 個をロード 各ウェル内の GE は、テンプレートなしのコントロールおよび対立遺伝子変異体に対してホモ接合性の 10 GE の DNA を含むポジティブコントロールとともにスクリーニングされます。