Microquimerismo en pacientes con pérdidas recurrentes de embarazo

Según el conocimiento de los investigadores, ningún estudio anterior ha determinado el origen de las células microquiméricas y, por lo tanto, este estudio piloto utilizará un análisis genético recientemente desarrollado que comparará fragmentos de ADN de las células microquiméricas masculinas con fragmentos de ADN del hijo(s) del paciente RPL. ) y hermano(s) mayor(es).

El estudio piloto tiene como objetivo evaluar las funciones y la capacidad de una prueba genética recientemente desarrollada que identifica células microquiméricas. Es necesario un estudio piloto para asegurar que los fragmentos de ADN (indels) analizados en el análisis genético incluyan suficientes diferencias informativas para distinguir entre el(los) hijo(s), la(s) hija(s) y el(los) hermano(s) mayor(es) antes de que estas investigaciones puedan iniciarse en un muestra más grande. Para asegurar que la prueba pueda distinguir el origen de las células microquiméricas entre parientes y trabajo independientemente del género, el estudio incluirá tanto a la(s) hija(s) como al (los) hijo(s) del probando para fortalecer la confianza de que la prueba posee esta capacidad.

10 sRPL y su(s) hermano(s) mayor(es) y primogénito están incluidos. total incluido: aprox 30.

Solo se incluirán los sRPL cuyos hermanos e hijos también den su consentimiento para participar.

Se recoge una muestra de sangre de 12 ml de plasma con EDTA del paciente con sRPL. Se toma una muestra de intercambio de la mucosa oral del hermano mayor y del niño(s).

Las muestras se centrifugarán y la capa leucocítica que contiene el ADN se recolectará del paciente y se almacenará a -80 °C. Para detectar el marcador DYS14 de múltiples copias ubicado en el gen TSPY1 en el cromosoma Y, se realizará un análisis de PCR en tiempo real en el ADN extraído con una mezcla maestra de PCR específica para el gen de referencia.

Además, el ADN extraído se amplificará utilizando cebadores específicos y sus sondas asociadas en un análisis de PCR multiplex. Los cebadores específicos se dirigen a los 10 indeles diferentes que conducen a 10 productos de PCR con tamaños de amplicón que no se superponen. Después de los análisis de PCR, los fragmentos se analizan mediante electroforesis capilar utilizando GeneticAnalyzer y GeneMapper. Cuando se identifican diferencias, se realiza un análisis de qPCR en muestras solo del probando con cebadores y sondas específicas para los fragmentos indel que solo están presentes en el niño o en el hermano mayor. 12 pozos cargados con 30.000 Los GE de cada pocillo se analizan junto con un control sin plantilla y un control positivo que contiene 10 GE de ADN homocigoto para la variante de alelo.