Mikrokimerisme hos patienter med tilbagevendende graviditetstab

Så vidt efterforskerne ved, har ingen tidligere undersøgelse bestemt oprindelsen af ​​mikrokimære celler, og derfor vil denne pilotundersøgelse bruge en nyudviklet genetisk analyse, som vil sammenligne DNA-fragmenter fra de mandlige mikrokimære celler med DNA-fragmenter fra RPL-patientens søn(e). ) og ældre bror(e).

Pilotstudiet har til formål at evaluere funktionerne og kapaciteten af ​​en nyudviklet genetisk test, der identificerer mikrokimære celler. En pilotundersøgelse er nødvendig for at sikre, at de DNA-fragmenter (indele), der analyseres i den genetiske analyse, indeholder tilstrækkelige informative forskelle til at skelne mellem sønnen(e), datter(e) og den(e) ældre bror(e), før disse undersøgelser kan påbegyndes i en større prøve. For at sikre, at testen kan skelne oprindelsen af ​​mikrokimære celler mellem slægtninge og arbejde uafhængigt af køn, vil undersøgelsen omfatte både probandens datter(e) og søn(e) for at styrke tilliden til, at testen besidder denne evne.

10 sRPL og deres ældre bror(e) og førstefødte barn er inkluderet. i alt inkluderet: ca 30.

Kun sRPL, hvis bror(e) og børn også giver samtykke til at deltage, vil blive inkluderet.

Blodprøve på 12 ml EDTA-plasma udtages fra sRPL-patienten. En bytteprøve fra mundslimhinden udtages fra den ældre bror og børn.

Prøverne vil blive centrifugeret, og buffy coaten, der indeholder DNA'et, vil blive indsamlet fra patienten og opbevaret ved -80 °C. For at detektere multi-kopi DYS14 markøren placeret i TSPY1 genet på Y-kromosomet vil en real-time PCR analyse blive udført på det ekstraherede DNA med en PCR mastermix specifik for referencegenet.

Det ekstraherede DNA vil også blive amplificeret under anvendelse af specifikke primere og deres associerede prober i en multipleks PCR-analyse. De specifikke primere målretter mod de 10 forskellige indels, hvilket fører til 10 PCR-produkter med ikke-overlappende amplikonstørrelser. Efter PCR-analyserne analyseres fragmenterne ved kapillærelektroforese ved brug af GeneticAnalyzer og GeneMapper. Når forskelle er identificeret, udføres en qPCR-analyse på prøver fra kun probandet med primere og prober, der er specifikke for de indel-fragmenter, der kun er til stede i enten barnet eller den ældre bror. 12 brønde fyldt med 30.000 GE i hver brønd screenes sammen med en no-template kontrol og en positiv kontrol indeholdende 10 GE DNA homozygot for allelvarianten.