반복적인 임신 손실이 있는 환자의 미세키메리즘

조사관이 아는 한, 이전 연구에서는 마이크로키메라 세포의 기원을 결정하지 않았으므로 이 파일럿 연구에서는 남성 마이크로키메라 세포의 DNA 조각을 RPL 환자의 아들의 DNA 조각과 비교하는 새로 개발된 유전자 분석을 사용할 것입니다. ) 및 형(들).

파일럿 연구는 마이크로키메라 세포를 식별하는 새로 개발된 유전자 테스트의 기능과 용량을 평가하는 것을 목표로 합니다. 유전자 분석에서 분석된 DNA 조각(indel)에 이러한 조사가 시작되기 전에 아들, 딸 및 형을 구별할 수 있는 충분한 정보적 차이가 포함되어 있음을 확인하기 위해 파일럿 연구가 필요합니다. 더 큰 샘플. 검사가 친척 사이의 마이크로키메라 세포의 기원을 구별하고 성별에 관계없이 작업할 수 있도록 보장하기 위해 발의자의 딸(들)과 아들(들)을 모두 포함하여 검사가 이 능력을 가지고 있다는 확신을 강화할 것입니다.

10 sRPL 및 그들의 형과 맏아들이 포함됩니다. 총 포함: 약 30.

형제와 자녀도 참여에 동의한 sRPL만 포함됩니다.

12ml EDTA 혈장의 혈액 샘플을 sRPL 환자로부터 수집합니다. 구강 점막의 스왑 샘플은 형과 자녀로부터 수집됩니다.

샘플을 원심분리하고 DNA를 포함하는 연막을 환자에게서 채취하여 -80°C에서 보관합니다. Y-염색체의 TSPY1 유전자에 위치한 다중 복사 DYS14 마커를 검출하기 위해 참조 유전자에 특정한 PCR 마스터믹스를 사용하여 추출된 DNA에 대해 실시간 PCR 분석을 수행합니다.

또한 추출된 DNA는 다중 PCR 분석에서 특정 프라이머와 관련 프로브를 사용하여 증폭됩니다. 특정 프라이머는 앰플리콘 크기가 겹치지 않는 10개의 PCR 제품으로 이어지는 10개의 서로 다른 인델을 대상으로 합니다. PCR 분석 후 단편은 GeneticAnalyzer 및 GeneMapper를 사용하여 모세관 전기영동으로 분석됩니다. 차이점이 확인되면 아이 또는 형에게만 존재하는 인델 단편에 특이적인 프라이머 및 프로브를 사용하여 프로밴드의 샘플에 대해서만 qPCR 분석을 수행합니다. 30.000으로 채워진 12개의 우물 각 웰의 GE는 대립유전자 변이체에 대해 동형접합성 DNA 10GE를 포함하는 양성 대조군 및 템플릿 없는 대조군과 함께 스크리닝됩니다.