Mikrokimerismi potilailla, joilla on toistuvia raskauden menetyksiä

Tutkijoiden tietojen mukaan mikään aikaisempi tutkimus ei ole määrittänyt mikrokimeeristen solujen alkuperää, ja siksi tässä pilottitutkimuksessa käytetään äskettäin kehitettyä geneettistä analyysiä, jossa verrataan miehen mikrokimeeristen solujen DNA-fragmentteja RPL-potilaan poikien DNA-fragmentteihin. ) ja vanhemmat veljet.

Pilottitutkimuksen tavoitteena on arvioida äskettäin kehitetyn mikrokimeerisiä soluja tunnistavan geneettisen testin toimintoja ja kapasiteettia. Pilottitutkimus on tarpeen sen varmistamiseksi, että geneettisessä analyysissä analysoidut DNA-fragmentit (indelit) sisältävät riittävästi informatiivisia eroja poikien, tyttärien ja vanhemman veljen erottamiseksi ennen kuin nämä tutkimukset voidaan aloittaa suurempi näyte. Sen varmistamiseksi, että testi pystyy erottamaan mikrokimeeristen solujen alkuperän sukulaisten ja työn välillä sukupuolesta riippumatta. Tutkimukseen osallistuu sekä tutkittavan tyttäret että pojat vahvistaakseen luottamusta siihen, että testillä on tämä kyky.

Mukana on 10 sRPL ja heidän vanhemmat veljensä ja esikoiset. yhteensä: noin 30.

Vain sRPL, jonka veljet ja lapset myös suostuvat osallistumaan, otetaan mukaan.

sRPL-potilaalta otetaan verinäyte 12 ml EDTA-plasmaa. Vanhemmalta veljeltä ja lapselta (lapsilta) otetaan vaihtonäyte suun limakalvolta.

Näytteet sentrifugoidaan ja DNA:ta sisältävä buffy coat kerätään potilaalta ja säilytetään -80 °C:ssa. Y-kromosomin TSPY1-geenissä sijaitsevan monikopioisen DYS14-markkerin havaitsemiseksi uutetulle DNA:lle suoritetaan reaaliaikainen PCR-analyysi referenssigeenille spesifisellä PCR-mastermixillä.

Uutettu DNA monistetaan myös käyttämällä spesifisiä alukkeita ja niihin liittyviä koettimia multipleksi-PCR-analyysissä. Spesifiset alukkeet kohdistuvat 10 eri indeliin, mikä johtaa 10 PCR-tuotteeseen, joiden amplikonikoko ei ole päällekkäinen. PCR-analyysien jälkeen fragmentit analysoidaan kapillaarielektroforeesilla käyttäen GeneticAnalyzeria ja GeneMapperia. Kun eroja tunnistetaan, qPCR-analyysi suoritetaan näytteille vain koettimesta alukkeilla ja koettimilla, jotka ovat spesifisiä indel-fragmenteille, joita on vain joko lapsessa tai vanhemmassa veljessä. 12 kaivoa, joissa on 30 000 GE kussakin kuopassa seulotaan yhdessä templaattittoman kontrollin ja positiivisen kontrollin kanssa, joka sisältää 10 GE alleelivariantille homotsygoottista DNA:ta.