Mikrokimerism hos patienter med återkommande graviditetsförluster

Såvitt utredarna vet har ingen tidigare studie fastställt ursprunget för mikrochimera celler, och därför kommer denna pilotstudie att använda en nyutvecklad genetisk analys som kommer att jämföra DNA-fragment från de manliga mikrochimera cellerna med DNA-fragment från RPL-patientens son(ar) ) och äldre bror(ar).

Pilotstudien syftar till att utvärdera funktionerna och kapaciteten hos ett nyutvecklat genetiskt test som identifierar mikrochimera celler. En pilotstudie är nödvändig för att säkerställa att DNA-fragmenten (indelar) som analyseras i den genetiska analysen innehåller tillräckligt med informativa skillnader för att kunna skilja mellan sonen/sönerna, dottern/döttrarna och äldre brodern innan dessa undersökningar kan inledas i en större prov. För att säkerställa att testet kan särskilja ursprunget för mikrochimera celler mellan släktingar och arbete oberoende av kön, kommer studien att inkludera både probandens dotter(ar) och son(ar) för att stärka förtroendet för att testet besitter denna förmåga.

10 sRPL och deras äldre bror(ar) och förstfödda barn ingår. Totalt ingår: ca 30.

Endast sRPL vars bror(ar) och barn(ar) också samtycker till att delta, kommer att inkluderas.

Blodprov på 12 ml EDTA-plasma tas från sRPL-patienten. Ett bytesprov från munslemhinnan tas från den äldre brodern och barnet/barnen.

Proverna kommer att centrifugeras och buffy coaten som innehåller DNA kommer att samlas in från patienten och förvaras vid -80 °C. För att detektera DYS14-markören med flera kopior som finns i TSPY1-genen på Y-kromosomen kommer en realtids-PCR-analys att utföras på det extraherade DNA:t med en PCR-mastermix specifik för referensgenen.

Det extraherade DNA:t kommer också att amplifieras med användning av specifika primrar och deras associerade prober i en multiplex PCR-analys. De specifika primrarna är inriktade på de 10 olika indelarna som leder till 10 PCR-produkter med icke-överlappande amplikonstorlekar. Efter PCR-analyserna analyseras fragmenten genom kapillärelektrofores med hjälp av GeneticAnalyzer och GeneMapper. När skillnader identifieras utförs en qPCR-analys på prover från endast probandet med primrar och prober specifika för indel-fragmenten som bara finns i antingen barnet eller den äldre brodern. 12 brunnar laddade med 30.000 GE i varje brunn screenas tillsammans med en kontroll utan mall och en positiv kontroll innehållande 10 GE DNA homozygot för allelvarianten.