タンパク質合成とmTORC1活性化に対する昆虫由来タンパク質サプリメントの効果

この研究の目的は、昆虫由来のタンパク質サプリメント (IPC80 および Whole Buffalo Powder、Ynsect®) が mTORC1 経路と筋肉細胞のタンパク質合成を活性化する能力を判断することです。

この目的を達成するために、参加者は、IPC80、バッファロー全体の粉末、またはホエイプロテインの補足用量 (0.25 g/kg 体重) を摂取します。 血液サンプルは、補充の前と、補充の 15、30、60、および 90 分後に採取されます。

このプロジェクトは、昆虫由来のタンパク質サプリメント (IPC80 および Whole Buffalo Powder、Ynsect®) が mTORC1 経路の活性化と筋肉細胞のタンパク質合成を誘導する能力を持っているかどうかを判断することが期待されています。 この研究の結果は、運動後の筋肉タンパク質合成をサポートするために、この新しい持続可能なタンパク質源の使用法についてさらに洞察を与えるでしょう.

18〜30歳の男女の参加者が研究に登録されます。 この研究は無作為化された二重盲検クロスオーバーデザインであり、被験者も研究者も誰がどの治療を受けているかを知りません（IPC80、全バッファローパウダーまたはホエー）.

I. ベースラインの採血 被験者は、一晩絶食した後、実験室に到着します。 肘前静脈にカニューレを挿入し、最初の 5 mL のベースライン血液サンプルを採取します。

Ⅱ．補足 ベースラインの採血後、被験者には体重 1 kg あたり 0.25 g のホエイプロテイン、IPC80、または 250 ml の水に溶解したバッファロー粉末全体のいずれかの補足が提供されます。

III.食後の採血 サプリメントの摂取後、参加者は実験室にさらに 1.5 時間留まり、時間を過ごすために本や電子機器を持参することができます。 補充後 15、30、60、および 90 分に、それぞれ 5 mL の血液サンプルをさらに 4 回採取し、1 回の訪問で合計 5 mL (1 回の訪問で 25 mL) の採血を 5 回行い、被験者ごとに合計 75 mL の採血を行います。全体の研究。

血液は、5 mL の血清分離チューブに採取されます。 すべての血液サンプルは、1000 x gで10分間遠心分離する前に1時間凝固させ、血清を凍結し、処理するまで-30°Cに保ちます。 治療は順序効果を避けるために無作為化され、前の治療の影響を最小限に抑えるために、試験の間に少なくとも48時間のウォッシュアウト期間が使用されます。

タンパク質合成を測定するために、C2C12 筋細胞にプラスミド (pcDNA3 ルシフェラーゼ) を安定的にトランスフェクトし、これを使用して全体的なタンパク質合成を測定しました。 C2C12Luc 細胞を 24 ウェルプレートに播種し、4 日間かけて分化させます。 分化したＣ２Ｃ１２細胞は、ＰＢＳで洗浄し、次いでそれらを試験培地（２０％ＤＭＥＭ；８０％ハンクス緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ））で１５分間処理することにより絶食する。 次に、絶食した筋肉細胞を、0、2.5、5、または 10% のベースラインを含む試験培地または飼料添加血清で 60 分間処理します。 細胞は受動的溶解緩衝液で収集され、ホタルルシフェラーゼ活性は以前に記載されているように決定されます（Philp et al。、2013）。

タンパク質源が mTORC1 を活性化する能力を決定するために、ルシフェラーゼ mRNA が 5' 末端ポリピリミジン トラクト (TOP) を含むプラスミド (pcDNA3-TOP ルシフェラーゼ) を C2C12 筋細胞に安定的にトランスフェクトしました。 5'TOP mRNA は、mTORC1 活性によって特異的に調節されます (Jefferies et al., 1994)。 上記のように、24 ウェル プレート内の分化した C2C12TOPLuc 筋肉細胞は、上記のベースラインまたは供給血清を使用して刺激されます。 mTORC1 活性化の程度は、ベースラインと摂食血清の間の勾配の差として決定されます。 ホエイ、IPC80、Whole Buffalo Powder による mTORC1 およびタンパク質合成の誘導を、個人内で直接比較し、次にグループ間で比較します。