昆虫来源的蛋白质补充剂对蛋白质合成和 mTORC1 激活的影响

本研究的目的是确定昆虫来源的蛋白质补充剂（IPC80 和全水牛粉，Ynsect®）激活肌肉细胞中的 mTORC1 通路和蛋白质合成的能力。

为实现这一目标，参与者将摄入补充剂量（0.25 克/千克体重）的 IPC80、全水牛粉或乳清蛋白。 将在补充前和补充后 15、30、60 和 90 分钟抽取血样。

预计该项目将确定昆虫来源的蛋白质补充剂（IPC80 和全水牛粉，Ynsect®）是否具有诱导肌肉细胞中 mTORC1 通路激活和蛋白质合成的能力。 这项研究的结果将进一步深入了解这种新型可持续蛋白质来源在运动后支持肌肉蛋白质合成的用途。

年龄在 18-30 岁之间的男性和女性参与者将被纳入研究。 该研究是一项随机双盲交叉设计，受试者和研究人员都不知道谁在接受哪种治疗（IPC80、全水牛粉或乳清）。

I. 基线抽血受试者将在禁食过夜后到达实验室。 肘前静脉将插管，并收集初始 5 mL 基线血样。

二。补充 基线抽血后，将向受试者提供补充剂，0.25 g/kg 体重的乳清蛋白、IPC80 或溶解在 250 毫升水中的全水牛粉。

三、餐后抽血 服用补充剂后，参与者将在实验室再停留 1.5 小时，他们可能会带书本或电子设备打发时间。 补充后15、30、60、90分钟再取四份血样，每份5mL，每次访视共抽取五次血样，每次5mL（每次访视25mL），每位受试者完成总计抽取75mL血样整个研究。

血液将收集在 5 mL 血清分离管中。 在以 1000 x g 离心 10 分钟之前，允许所有血液样本凝结 1 小时，并将血清冷冻并保存在 -30°C 直至处理。 治疗将被随机化以避免顺序效应，试验之间至少 48 小时的清除期将用于最小化先前治疗的影响。

为了确定蛋白质合成，我们用我们用来测量整体蛋白质合成的质粒（pcDNA3 荧光素酶）稳定转染 C2C12 肌肉细胞。 C2C12Luc 细胞将接种在 24 孔板中并在 4 天内分化。 分化的 C2C12 细胞将通过用 PBS 洗涤然后用测试培养基（20% DMEM；80% Hank 缓冲盐溶液 (HBSS)）处理它们 15 分钟来禁食。 然后用含有 0%、2.5%、5% 或 10% 基线或补料血清的测试培养基处理禁食的肌肉细胞 60 分钟。 细胞将收集在被动裂解缓冲液中，萤火虫荧光素酶活性将如前所述测定（Philp 等人，2013）。

为了确定蛋白质来源激活 mTORC1 的能力，我们用质粒（pcDNA3-TOP 荧光素酶）稳定转染 C2C12 肌肉细胞，其中荧光素酶 mRNA 包含 5' 末端聚嘧啶束（TOP）。 5'TOP mRNA 受 mTORC1 活性的特异性调节 (Jefferies et al., 1994)。 如上所述，24 孔板中分化的 C2C12TOPLuc 肌肉细胞将使用上述基线或补料血清进行刺激。 mTORC1 激活的程度将被确定为基线和喂食血清之间的斜率差异。 乳清、IPC80 和全水牛粉对 mTORC1 的诱导和蛋白质合成将直接在个体内部进行比较，然后进行跨组比较。