Vliv proteinových doplňků pocházejících z hmyzu na syntézu proteinů a aktivaci mTORC1

Účelem této studie je určit schopnost proteinových doplňků pocházejících z hmyzu (IPC80 a Whole Buffalo Powder, Ynsect®) aktivovat dráhu mTORC1 a syntézu proteinů ve svalových buňkách.

K dosažení tohoto cíle budou účastníci konzumovat doplňkovou dávku (0,25 g/kg tělesné hmotnosti) IPC80, Whole Buffalo Powder nebo syrovátkový protein. Vzorky krve budou odebrány před a 15, 30, 60 a 90 minut po suplementaci.

Očekává se, že tento projekt určí, zda proteinové doplňky získané z hmyzu (IPC80 a Whole Buffalo Powder, Ynsect®) mají schopnost indukovat aktivaci dráhy mTORC1 a syntézu proteinů ve svalových buňkách. Výsledky této studie poskytnou další pohled na využití tohoto nového udržitelného zdroje bílkovin k podpoře syntézy svalových bílkovin po cvičení.

Do studie budou zařazeni muži a ženy ve věku 18-30 let. Studie je randomizovaný dvojitě zaslepený zkřížený design, přičemž ani subjekty, ani zkoušející nevědí, kdo je na jaké léčbě (IPC80, Whole Buffalo Powder nebo Whey).

I. Základní odběr krve Subjekty dorazí do laboratoře po celonočním hladovění. Do antekubitální žíly bude zavedena kanyla a bude odebrán počáteční vzorek krve o objemu 5 ml.

II. Suplementace Po základním odběru krve bude subjektům poskytnut doplněk, 0,25 g/kg tělesné hmotnosti buď syrovátkového proteinu, IPC80 nebo prášku z celého buvola rozpuštěného ve 250 ml vody.

III. Postprandiální odběry krve Po konzumaci doplňku zůstanou účastníci ještě 1,5 hodiny v laboratoři, na zkrácení času si mohou přinést knihy nebo elektronická zařízení. Čtyři další vzorky krve po 5 ml budou odebrány 15, 30, 60 a 90 minut po suplementaci, celkem pět odběrů krve po 5 ml na návštěvu (25 ml na návštěvu) a celkem 75 ml krve odebrané každému subjektu, který dokončil. celou studii.

Krev bude odebírána do 5ml zkumavek pro separaci séra. Všechny vzorky krve se nechají srážet po dobu 1 hodiny před centrifugací při 1000 x g po dobu 10 minut a sérum se zmrazí a udržuje při -30 °C až do zpracování. Léčby budou randomizovány, aby se zabránilo efektu pořadí, a mezi studiemi se použije vymývací období alespoň 48 hodin, aby se minimalizoval účinek předchozí léčby.

Pro stanovení syntézy proteinů jsme stabilně transfekovali svalové buňky C2C12 plazmidem (pcDNA3 luciferáza), který používáme k měření globální syntézy proteinů. Buňky C2C12Luc se nanesou na 24jamkové destičky a diferencují se během 4 dnů. Diferencované buňky C2C12 budou ponechány na lačno promytím PBS a následným ošetřením testovacím médiem (20% DMEM; 80% Hankův pufrovaný solný roztok (HBSS)) po dobu 15 minut. Svalové buňky na lačno budou poté ošetřeny testovacím médiem obsahujícím 0, 2,5, 5 nebo 10 % základní linie nebo naplněným sérem po dobu 60 minut. Buňky budou shromážděny v pasivním lyzačním pufru a aktivita luciferázy světlušek bude stanovena, jak bylo popsáno dříve (Philp et al., 2013).

Pro stanovení schopnosti zdroje proteinu aktivovat mTORC1 jsme stabilně transfekovali svalové buňky C2C12 plazmidem (pcDNA3-TOP luciferáza), kde luciferázová mRNA obsahuje 5' terminální polypyrimidinový trakt (TOP). 5'TOP mRNA jsou specificky regulovány aktivitou mTORC1 (Jefferies et al., 1994). Jak je uvedeno výše, diferencované svalové buňky C2C12TOPLuc ve 24jamkových destičkách budou stimulovány pomocí základního nebo nasyceného séra, jak je popsáno výše. Stupeň aktivace mTORC1 bude určen jako rozdíl ve směrech mezi základní linií a nasyceným sérem. Indukce mTORC1 a syntézy proteinů syrovátkou a IPC80 a Whole Buffalo Powder budou porovnány přímo u jednotlivců a poté napříč skupinami.