Effect van van insecten afgeleide eiwitsupplementen op eiwitsynthese en mTORC1-activering

Het doel van deze studie is om het vermogen te bepalen van van insecten afgeleide eiwitsupplementen (IPC80 en Whole Buffalo Powder, Ynsect®) om de mTORC1-route en eiwitsynthese in spiercellen te activeren.

Om dit doel te bereiken, consumeren de deelnemers een aanvullende dosis (0,25 g/kg lichaamsgewicht) IPC80, Whole Buffalo Powder of wei-eiwit. Voor en 15, 30, 60 en 90 minuten na de suppletie wordt bloed afgenomen.

Verwacht wordt dat dit project zal bepalen of van insecten afgeleide eiwitsupplementen (IPC80 en Whole Buffalo Powder, Ynsect®) het vermogen hebben om activering van de mTORC1-route en eiwitsynthese in spiercellen te induceren. De resultaten van deze studie zullen meer inzicht geven in het gebruik van deze nieuwe duurzame eiwitbron ter ondersteuning van spiereiwitsynthese na inspanning.

Mannelijke en vrouwelijke deelnemers in de leeftijd van 18-30 jaar zullen aan het onderzoek deelnemen. De studie is een gerandomiseerde dubbelblinde cross-over opzet waarbij noch de proefpersonen, noch de onderzoekers weten wie welke behandeling krijgt (IPC80, Whole Buffalo Powder of Whey).

I. Bloedafname bij baseline De proefpersonen komen na een nacht vasten aan in het laboratorium. De antecubitale ader wordt gecanuleerd en er wordt een eerste basislijnbloedmonster van 5 ml verzameld.

II. Suppletie Na de bloedafname bij baseline krijgen proefpersonen een supplement, 0,25 g/kg lichaamsgewicht van ofwel wei-eiwit, IPC80 of Whole Buffalo Powder opgelost in 250 ml water.

III. Postprandiale bloedafname Na consumptie van het supplement blijven de deelnemers nog 1,5 uur in het laboratorium, ze mogen boeken of elektronische apparaten meenemen om de tijd te doden. Na 15, 30, 60 en 90 minuten na suppletie worden nog vier bloedmonsters van elk 5 ml genomen, in totaal vijf bloedafnames van 5 ml per bezoek (25 ml per bezoek) en in totaal 75 ml bloed voor elke proefpersoon die de de hele studie.

Bloed wordt verzameld in serumscheidingsbuizen van 5 ml. Alle bloedmonsters mogen 1 uur stollen voordat ze gedurende 10 minuten bij 1000 x g worden gecentrifugeerd en het serum wordt ingevroren en bewaard bij -30°C tot verwerking. Behandelingen worden gerandomiseerd om een ​​volgorde-effect te voorkomen en er wordt een uitwasperiode van ten minste 48 uur tussen de proeven gebruikt om het effect van de vorige behandeling te minimaliseren.

Om de eiwitsynthese te bepalen, hebben we C2C12-spiercellen stabiel getransfecteerd met een plasmide (pcDNA3-luciferase) dat we gebruiken om de globale eiwitsynthese te meten. C2C12Luc-cellen worden uitgeplaat in platen met 24 putjes en gedurende 4 dagen gedifferentieerd. Gedifferentieerde C2C12-cellen worden gevast door ze te wassen met PBS en ze vervolgens te behandelen met testmedia (20% DMEM; 80% Hank's gebufferde zoutoplossing (HBSS)) gedurende 15 minuten. Gevaste spiercellen worden vervolgens gedurende 60 minuten behandeld met testmedia die 0, 2,5, 5 of 10% basislijn of gevoed serum bevatten. Cellen zullen worden verzameld in passieve lysisbuffer en de activiteit van vuurvliegluciferase zal worden bepaald zoals eerder beschreven (Philp et al., 2013).

Om het vermogen van een eiwitbron om mTORC1 te activeren te bepalen, hebben we C2C12-spiercellen stabiel getransfecteerd met een plasmide (pcDNA3-TOP luciferase) waarbij het luciferase-mRNA een 5'-terminaal polypyrimidinekanaal (TOP) bevat. 5'TOP-mRNA wordt specifiek gereguleerd door mTORC1-activiteit (Jefferies et al., 1994). Zoals hierboven, zullen gedifferentieerde C2C12TOPLuc-spiercellen in platen met 24 putjes worden gestimuleerd met behulp van de basislijn of gevoed serum zoals hierboven beschreven. De mate van mTORC1-activering zal worden bepaald als het verschil in hellingen tussen de basislijn en gevoede sera. De inductie van mTORC1 en eiwitsynthese door wei en IPC80 en Whole Buffalo Powder zal direct binnen individuen en vervolgens tussen groepen worden vergeleken.