A rovar eredetű fehérje-kiegészítők hatása a fehérjeszintézisre és az mTORC1 aktivációra

Ennek a vizsgálatnak a célja annak meghatározása, hogy a rovarokból származó fehérje-kiegészítők (IPC80 és Whole Buffalo Powder, Ynsect®) mennyire képesek aktiválni az mTORC1 útvonalat és a fehérjeszintézist az izomsejtekben.

E cél elérése érdekében a résztvevők kiegészítő adagot (0,25 g/ttkg) IPC80-at, teljes bivalyport vagy tejsavófehérjét fogyasztanak. Vérmintát vesznek a kiegészítés előtt és után 15, 30, 60 és 90 perccel.

Várhatóan ez a projekt meghatározza, hogy a rovarokból származó fehérje-kiegészítők (IPC80 és Whole Buffalo Powder, Ynsect®) képesek-e az mTORC1 útvonal aktiválását és fehérjeszintézist indukálni az izomsejtekben. A tanulmány eredményei további betekintést nyújtanak ennek az új, fenntartható fehérjeforrásnak az edzés utáni izomfehérje szintézis támogatására való felhasználásába.

A vizsgálatba 18-30 év közötti férfi és női résztvevőket vonnak be. A vizsgálat egy randomizált, kettős vak keresztezési terv, amelyben sem az alanyok, sem a vizsgálók nem tudták, hogy ki melyik kezelésben részesül (IPC80, Whole Buffalo Powder vagy Whey).

I. Kiindulási vérvétel Az alanyok egy éjszakai koplalást követően érkeznek a laboratóriumba. Az antecubitalis vénát kanülbe helyezik, és egy kezdeti 5 ml-es kiindulási vérmintát vesznek.

II. Kiegészítés Az alapszintű vérvétel után az alanyok 0,25 g/testtömeg-kg tejsavófehérjét, IPC80-at vagy teljes bivalyport kapnak 250 ml vízben oldva.

III. Étkezés utáni vérvétel A táplálékkiegészítő elfogyasztását követően a résztvevők további 1,5 órán át a laboratóriumban maradnak, könyveket, elektronikus eszközöket hozhatnak magukkal az idő eltöltésére. További négy, egyenként 5 ml-es vérmintát veszünk 15, 30, 60 és 90 perccel a kiegészítés után, összesen öt 5 ml-es vérvétel vizitenként (látogatásonként 25 ml), és összesen 75 ml vért veszünk minden egyes befejező alanynál. az egész tanulmányt.

A vért 5 ml-es szérumelválasztó csövekbe gyűjtik. Minden vérmintát hagyni kell 1 órán keresztül megalvadni, mielőtt 10 percig 1000 x g-vel centrifugálják, majd a szérumot lefagyasztják és -30 °C-on tartják a feldolgozásig. A kezeléseket randomizálják a sorrendi hatás elkerülése érdekében, és a vizsgálatok között legalább 48 órás kimosási időszakot alkalmaznak az előző kezelés hatásának minimalizálása érdekében.

A fehérjeszintézis meghatározásához stabilan transzfektáltunk C2C12 izomsejteket egy plazmiddal (pcDNA3 luciferáz), amelyet a globális fehérjeszintézis mérésére használunk. A C2C12Luc sejteket 24 lyukú lemezekre szélesztjük, és 4 napon keresztül differenciálódnak. A differenciált C2C12 sejteket éheztetjük PBS-sel történő mosással, majd tesztközeggel (20% DMEM; 80% Hank-féle pufferolt sóoldat (HBSS)) 15 percig kezeljük. Az éheztetett izomsejteket ezután 0, 2,5, 5 vagy 10% alapvonalat tartalmazó tesztközeggel vagy táplált szérummal kezeljük 60 percig. A sejteket passzív lízispufferben gyűjtjük össze, és a szentjánosbogár-luciferáz aktivitását a korábban leírtak szerint határozzuk meg (Philp et al., 2013).

Egy fehérjeforrás mTORC1-et aktiváló képességének meghatározására stabilan transzfektáltunk C2C12 izomsejteket egy plazmiddal (pcDNA3-TOP luciferáz), ahol a luciferáz mRNS egy 5'-terminális polipirimidin traktust (TOP) tartalmaz. Az 5'TOP mRNS-t specifikusan az mTORC1 aktivitás szabályozza (Jefferies et al., 1994). A fentiek szerint a 24 lyukú lemezeken lévő differenciált C2C12TOPLuc izomsejteket az alapvonal vagy a táplált szérum felhasználásával stimuláljuk a fent leírtak szerint. Az mTORC1 aktiváció mértékét az alapvonal és a táplált szérum közötti meredekség különbségeként határozzuk meg. Az mTORC1 és a fehérjeszintézis tejsavó és IPC80 és Whole Buffalo Powder általi indukálását közvetlenül egyéneken belül, majd csoportokon belül hasonlítják majd össze.