Влияние белковых добавок, полученных из насекомых, на синтез белка и активацию mTORC1

Целью данного исследования является определение способности белковых добавок, полученных из насекомых (IPC80 и порошок из цельного буйвола, Ynsect®), активировать путь mTORC1 и синтез белка в мышечных клетках.

Для достижения этой цели участники будут потреблять дополнительную дозу (0,25 г/кг массы тела) IPC80, цельного порошка буйвола или сывороточного протеина. Образцы крови будут взяты до и через 15, 30, 60 и 90 минут после приема добавки.

Ожидается, что этот проект определит, обладают ли белковые добавки, полученные из насекомых (IPC80 и порошок из цельного буйвола, Ynsect®), способностью вызывать активацию пути mTORC1 и синтез белка в мышечных клетках. Результаты этого исследования дадут дополнительное представление об использовании этого нового устойчивого источника белка для поддержки синтеза мышечного белка после тренировки.

В исследовании принимают участие мужчины и женщины в возрасте от 18 до 30 лет. Исследование представляет собой рандомизированное двойное слепое перекрестное исследование, в котором ни участники, ни исследователи не знают, кто какое лечение принимает (IPC80, порошок из цельного буйволиного молока или сыворотку).

I. Исходный забор крови Субъекты доставляются в лабораторию после ночного голодания. Антенуктальная вена будет канюлирована, и будет взят исходный образец крови объемом 5 мл.

II. Добавка После исходного забора крови субъектам будет предоставлена ​​добавка: 0,25 г/кг массы тела сывороточного протеина, IPC80 или цельного порошка буйвола, растворенного в 250 мл воды.

III. Забор крови после приема пищи После приема добавки участники останутся в лаборатории еще на 1,5 часа, они могут принести книги или электронные устройства, чтобы скоротать время. Еще четыре образца крови по 5 мл каждый будут получены через 15, 30, 60 и 90 минут после приема, всего пять заборов крови по 5 мл за посещение (25 мл за посещение) и 75 мл крови, взятых в общей сложности для каждого субъекта, завершающего все исследование.

Кровь будет собираться в пробирки для разделения сыворотки объемом 5 мл. Всем образцам крови дают свернуться в течение 1 часа перед центрифугированием при 1000 x g в течение 10 минут, а сыворотку замораживают и хранят при -30°C до обработки. Лечение будет рандомизировано, чтобы избежать эффекта порядка, и будет использоваться период вымывания не менее 48 часов между испытаниями, чтобы свести к минимуму эффект предыдущего лечения.

Чтобы определить синтез белка, мы стабильно трансфицировали мышечные клетки C2C12 плазмидой (люцифераза pcDNA3), которую мы используем для измерения глобального синтеза белка. Клетки C2C12Luc будут высевать в 24-луночные планшеты и дифференцировать в течение 4 дней. Дифференцированные клетки C2C12 подвергают голоданию, промывая PBS, а затем обрабатывая их тестовой средой (20% DMEM; 80% забуференный солевой раствор Хэнка (HBSS)) в течение 15 минут. Натощак мышечные клетки затем обрабатывают тестовой средой, содержащей 0, 2,5, 5 или 10% исходного уровня, или подкармливают сывороткой в ​​течение 60 минут. Клетки собирают в буфере для пассивного лизиса и определяют активность люциферазы светлячка, как описано ранее (Philp et al., 2013).

Чтобы определить способность источника белка активировать mTORC1, мы стабильно трансфицировали мышечные клетки C2C12 плазмидой (люцифераза pcDNA3-TOP), где мРНК люциферазы содержит 5'-концевой полипиримидиновый тракт (ТОР). мРНК 5'TOP специфически регулируется активностью mTORC1 (Jefferies et al., 1994). Как указано выше, дифференцированные мышечные клетки C2C12TOPLuc в 24-луночных планшетах будут стимулироваться с использованием исходного уровня или подпитки сывороткой, как описано выше. Степень активации mTORC1 будет определяться как разница наклонов между исходной сывороткой и сывороткой подпитки. Индукция mTORC1 и синтез белка сывороткой, IPC80 и цельным порошком буйвола будут сравниваться непосредственно между отдельными людьми, а затем между группами.