Hyönteisperäisten proteiinilisäravinteiden vaikutus proteiinisynteesiin ja mTORC1-aktivaatioon

Tämän tutkimuksen tarkoituksena on määrittää hyönteisperäisten proteiinilisäaineiden (IPC80 ja Whole Buffalo Powder, Ynsect®) kyky aktivoida mTORC1-reittiä ja proteiinisynteesiä lihassoluissa.

Tämän tavoitteen saavuttamiseksi osallistujat kuluttavat lisäannoksen (0,25 g/kg) IPC80:tä, Whole Buffalo Powder -jauhetta tai heraproteiinia. Verinäytteet otetaan ennen lisäystä ja 15, 30, 60 ja 90 minuuttia sen jälkeen.

Tämän projektin odotetaan määrittävän, pystyvätkö hyönteisperäiset proteiinilisät (IPC80 ja Whole Buffalo Powder, Ynsect®) aktivoimaan mTORC1-reitin ja proteiinisynteesin lihassoluissa. Tämän tutkimuksen tulokset antavat lisätietoa tämän uuden kestävän proteiinilähteen käytöstä lihasproteiinisynteesin tukemiseen harjoituksen jälkeen.

Tutkimukseen otetaan 18-30-vuotiaita miehiä ja naisia. Tutkimus on satunnaistettu kaksoissokkoutettu risteytyssuunnitelma, jossa koehenkilöt tai tutkijat eivät tiedä, kuka on missäkin hoidossa (IPC80, Whole Buffalo Powder tai Whey).

I. Perusverenotto Koehenkilöt saapuvat laboratorioon yön yli paaston jälkeen. Antecubitaalinen laskimo kanyloidaan, ja ensimmäinen 5 ml:n perusverinäyte otetaan.

II. Lisäravinteet Perusverenoton jälkeen koehenkilöille annetaan lisä, 0,25 g/kg joko heraproteiinia, IPC80:tä tai kokonaista puhvelijauhetta liuotettuna 250 ml:aan vettä.

III. Aterian jälkeiset verinäytteet Ravintolisän nauttimisen jälkeen osallistujat viipyvät laboratoriossa vielä 1,5 tuntia, he voivat tuoda kirjoja tai elektronisia laitteita ajanviettoon. Neljä 5 ml:n verinäytettä otetaan lisää 15, 30, 60 ja 90 minuutin kuluttua täydennyksestä, yhteensä viisi 5 ml:n verinäytteenottoa käyntiä kohden (25 ml käyntiä kohden) ja yhteensä 75 ml verta kutakin suoritettavaa kohdetta kohden. koko tutkimuksen.

Veri kerätään 5 ml:n seeruminerotusputkiin. Kaikkien verinäytteiden annetaan hyytyä 1 tunnin ajan ennen sentrifugointia 1000 x g:llä 10 minuuttia ja seerumi jäädytetään ja säilytetään -30 °C:ssa käsittelyyn asti. Hoidot satunnaistetaan järjestysvaikutuksen välttämiseksi, ja testien välillä käytetään vähintään 48 tunnin huuhtoutumisaikaa edellisen hoidon vaikutuksen minimoimiseksi.

Proteiinisynteesin määrittämiseksi olemme stabiilisti transfektoineet C2C12-lihassoluja plasmidilla (pcDNA3-lusiferaasi), jota käytämme globaalin proteiinisynteesin mittaamiseen. C2C12Luc-solut maljataan 24-kuoppalevyille ja erilaistetaan 4 päivän aikana. Erilaistuneita C2C12-soluja paastotaan pesemällä PBS:llä ja käsittelemällä niitä sitten testiväliaineella (20 % DMEM; 80 % Hankin puskuroitu suolaliuos (HBSS)) 15 minuuttia. Paastonneet lihassolut käsitellään sitten testiväliaineella, joka sisältää 0, 2,5, 5 tai 10 % perusviivaa, tai syötetyllä seerumilla 60 minuutin ajan. Solut kerätään passiiviseen lyysipuskuriin ja tulikärpäsen lusiferaasiaktiivisuus määritetään aiemmin kuvatulla tavalla (Philp et al., 2013).

Määrittääksemme proteiinilähteen kyvyn aktivoida mTORC1:tä olemme stabiilisti transfektoineet C2C12-lihassoluja plasmidilla (pcDNA3-TOP-lusiferaasi), jossa lusiferaasi-mRNA sisältää 5'-pään polypyrimidiinikanavan (TOP). 5'TOP-mRNA:ta säätelee spesifisesti mTORC1-aktiivisuus (Jefferies et ai., 1994). Kuten edellä, erilaistuneita C2C12TOPLuc-lihassoluja 24-kuoppalevyillä stimuloidaan käyttämällä perusviivaa tai syötettyä seerumia edellä kuvatulla tavalla. mTORC1-aktivaatioaste määritetään perusviivan ja syötetyn seerumin kaltevuuden erona. mTORC1:n ja proteiinisynteesin induktiota heralla ja IPC80:llä ja Whole Buffalo Powderilla verrataan suoraan yksilöiden sisällä ja sitten ryhmien välillä.