Efecto de los suplementos proteicos derivados de insectos sobre la síntesis de proteínas y la activación de mTORC1

El propósito de este estudio es determinar la capacidad de los suplementos proteicos derivados de insectos (IPC80 y Whole Buffalo Powder, Ynsect®) para activar la vía mTORC1 y la síntesis de proteínas en las células musculares.

Para lograr este objetivo, los participantes consumirán una dosis suplementaria (0,25 g/kg de peso corporal) de IPC80, Whole Buffalo Powder o proteína de suero. Se tomarán muestras de sangre antes y 15, 30, 60 y 90 minutos después de la suplementación.

Se espera que este proyecto determine si los suplementos proteicos derivados de insectos (IPC80 y Whole Buffalo Powder, Ynsect®) tienen la capacidad de inducir la activación de la vía mTORC1 y la síntesis de proteínas en las células musculares. Los resultados de este estudio brindarán más información sobre el uso de esta nueva fuente de proteína sostenible para apoyar la síntesis de proteína muscular después del ejercicio.

Se inscribirán en el estudio participantes masculinos y femeninos de entre 18 y 30 años de edad. El estudio es un diseño cruzado doble ciego aleatorizado en el que ni los sujetos ni los investigadores saben quién está en qué tratamiento (IPC80, Whole Buffalo Powder o Whey).

I. Extracción de sangre inicial Los sujetos llegarán al laboratorio después de una noche en ayunas. Se canulará la vena antecubital y se recolectará una muestra de sangre basal inicial de 5 ml.

II. Suplemento Después de la extracción de sangre inicial, los sujetos recibirán un suplemento, 0,25 g/kg de peso corporal de proteína de suero, IPC80 o Whole Buffalo Powder disueltos en 250 ml de agua.

tercero Extracción de sangre posprandial Luego del consumo del suplemento, los participantes permanecerán en el laboratorio por otra hora y media, pueden traer libros o dispositivos electrónicos para pasar el tiempo. Se obtendrán cuatro muestras de sangre más de 5 ml cada una a los 15, 30, 60 y 90 minutos después de la suplementación, con un total de cinco extracciones de sangre de 5 ml por visita (25 ml por visita) y 75 ml de sangre extraída en total para cada sujeto que complete todo el estudio.

La sangre se recogerá en tubos de separación de suero de 5 ml. Se permitirá que todas las muestras de sangre se coagulen durante 1 hora antes de la centrifugación a 1000 x g durante 10 minutos y el suero se congelará y mantendrá a -30 °C hasta que se procese. Los tratamientos se aleatorizarán para evitar un efecto de orden y se utilizará un período de lavado de al menos 48 h entre ensayos para minimizar el efecto del tratamiento anterior.

Para determinar la síntesis de proteínas, hemos transfectado de manera estable células musculares C2C12 con un plásmido (pcDNA3 luciferasa) que usamos para medir la síntesis global de proteínas. Las células C2C12Luc se sembrarán en placas de 24 pocillos y se diferenciarán durante 4 días. Las células C2C12 diferenciadas se mantendrán en ayunas lavándolas con PBS y luego tratándolas con medios de prueba (DMEM al 20 %; solución salina tamponada de Hank al 80 % (HBSS)) durante 15 minutos. A continuación, las células musculares en ayunas se tratarán con medios de prueba que contengan 0, 2,5, 5 o 10 % de la línea de base o suero alimentado durante 60 minutos. Las células se recogerán en tampón de lisis pasiva y la actividad de la luciferasa de luciérnaga se determinará como se ha descrito anteriormente (Philp et al., 2013).

Para determinar la capacidad de una fuente de proteína para activar mTORC1, hemos transfectado de forma estable células musculares C2C12 con un plásmido (pcDNA3-TOP luciferasa) donde el ARNm de luciferasa contiene un tracto de polipirimidina terminal 5' (TOP). El ARNm de 5'TOP está regulado específicamente por la actividad de mTORC1 (Jefferies et al., 1994). Como se indicó anteriormente, las células musculares C2C12TOPLuc diferenciadas en placas de 24 pocillos se estimularán utilizando la línea de base o suero alimentado como se describe anteriormente. El grado de activación de mTORC1 se determinará como la diferencia en las pendientes entre los sueros de referencia y alimentados. La inducción de mTORC1 y la síntesis de proteínas por suero e IPC80 y Whole Buffalo Powder se compararán directamente entre individuos y luego entre grupos.