Effekt af insekt-afledte proteintilskud på proteinsyntese og mTORC1-aktivering

Formålet med denne undersøgelse er at bestemme evnen af ​​insekt-afledte proteintilskud (IPC80 og Whole Buffalo Powder, Ynsect®) til at aktivere mTORC1-vejen og proteinsyntese i muskelceller.

For at nå dette mål vil deltagerne indtage en supplerende dosis (0,25 g/kg kropsvægt) af IPC80, Whole Buffalo Powder eller valleprotein. Blodprøver vil blive udtaget før og 15, 30, 60 og 90 minutter efter tilskuddet.

Det forventes, at dette projekt vil afgøre, om insekt-afledte proteintilskud (IPC80 og Whole Buffalo Powder, Ynsect®) har evnen til at inducere aktivering af mTORC1-vejen og proteinsyntese i muskelceller. Resultater fra denne undersøgelse vil give yderligere indsigt i brugen af ​​denne nye bæredygtige proteinkilde til at understøtte muskelproteinsyntese efter træning.

Mandlige og kvindelige deltagere i alderen 18-30 år vil blive optaget i undersøgelsen. Undersøgelsen er et randomiseret dobbeltblindt crossover-design, hvor hverken forsøgspersonerne eller efterforskerne ved, hvem der er på hvilken behandling (IPC80, Whole Buffalo Powder eller Whey).

I. Baseline-blodtagning Forsøgspersonerne ankommer til laboratoriet efter en faste natten over. Den antecubitale vene vil blive kanyleret, og en indledende 5 mL baseline blodprøve vil blive indsamlet.

II. Supplering Efter baseline-blodudtagning vil forsøgspersonerne blive forsynet med et tilskud, 0,25 g/kg kropsvægt af enten valleprotein, IPC80 eller Whole Buffalo Powder opløst i 250 ml vand.

III. Postprandiale blodprøver Efter indtagelse af tilskuddet vil deltagerne blive i laboratoriet i yderligere 1,5 time, de kan medbringe bøger eller elektronisk udstyr for at fordrive tiden. Yderligere fire blodprøver på 5 mL hver vil blive taget 15, 30, 60 og 90 minutter efter tilskud, i alt fem blodprøver på 5 mL pr. besøg (25 mL pr. besøg) og 75 mL blod udtaget i alt for hvert forsøgsperson, der fuldfører hele undersøgelsen.

Blod vil blive opsamlet i 5 mL serumsepareringsrør. Alle blodprøver får lov til at størkne i 1 time før centrifugering ved 1000 x g i 10 minutter, og serumet vil blive frosset og opbevaret ved -30°C, indtil det behandles. Behandlingerne vil blive randomiseret for at undgå en ordenseffekt, og en udvaskningsperiode på mindst 48 timer mellem forsøgene vil blive brugt for at minimere effekten af ​​den tidligere behandling.

For at bestemme proteinsyntese har vi stabilt transficeret C2C12 muskelceller med et plasmid (pcDNA3 luciferase), som vi bruger til at måle global proteinsyntese. C2C12Luc-celler udplades i 24-brøndsplader og differentieres over 4 dage. Differentierede C2C12-celler vil blive fastet ved at vaske med PBS og derefter behandle dem med testmedier (20 % DMEM; 80 % Hanks bufret saltopløsning (HBSS)) i 15 minutter. Fastende muskelceller vil derefter blive behandlet med testmedier indeholdende 0, 2,5, 5 eller 10 % baseline eller fodret serum i 60 minutter. Celler vil blive opsamlet i passiv lysisbuffer, og ildflueluciferaseaktivitet vil blive bestemt som beskrevet tidligere (Philp et al., 2013).

For at bestemme en proteinkildes evne til at aktivere mTORC1 har vi stabilt transficeret C2C12-muskelceller med et plasmid (pcDNA3-TOP luciferase), hvor luciferase-mRNA'et indeholder en 5'-terminal polypyrimidinkanal (TOP). 5'TOP mRNA er specifikt reguleret af mTORC1 aktivitet (Jefferies et al., 1994). Som ovenfor vil differentierede C2C12TOPLuc-muskelceller i 24-brøndsplader blive stimuleret ved hjælp af baseline eller fodret serum som beskrevet ovenfor. Graden af ​​mTORC1-aktivering vil blive bestemt som forskellen i hældninger mellem baseline og fodret sera. Induktionen af ​​mTORC1 og proteinsyntese af valle og IPC80 og Whole Buffalo Powder vil blive sammenlignet direkte inden for individer og derefter på tværs af grupper.