Effet des suppléments de protéines dérivés d'insectes sur la synthèse des protéines et l'activation de mTORC1

Le but de cette étude est de déterminer la capacité des suppléments protéiques dérivés d'insectes (IPC80 et Whole Buffalo Powder, Ynsect®) à activer la voie mTORC1 et la synthèse des protéines dans les cellules musculaires.

Pour atteindre cet objectif, les participants consommeront une dose supplémentaire (0,25 g/kg de poids corporel) d'IPC80, de poudre de buffle entière ou de protéine de lactosérum. Des échantillons de sang seront prélevés avant et 15, 30, 60 et 90 minutes après la supplémentation.

On s'attend à ce que ce projet détermine si les suppléments protéiques dérivés d'insectes (IPC80 et Whole Buffalo Powder, Ynsect®) ont la capacité d'induire l'activation de la voie mTORC1 et la synthèse des protéines dans les cellules musculaires. Les résultats de cette étude permettront de mieux comprendre l'utilisation de cette nouvelle source de protéines durable pour soutenir la synthèse des protéines musculaires après l'exercice.

Les participants masculins et féminins âgés de 18 à 30 ans seront inscrits à l'étude. L'étude est un plan croisé randomisé en double aveugle, ni les sujets ni les investigateurs ne sachant qui est sous quel traitement (IPC80, Whole Buffalo Powder ou Whey).

I. Prise de sang de base Les sujets arriveront au laboratoire après une nuit de jeûne. La veine antécubitale sera canulée et un échantillon sanguin initial de 5 ml sera prélevé.

II. Supplémentation Après le prélèvement sanguin de base, les sujets recevront un supplément de 0,25 g/kg de poids corporel de protéine de lactosérum, d'IPC80 ou de poudre de buffle entière dissoute dans 250 ml d'eau.

III. Prélèvements sanguins postprandiaux Suite à la consommation du supplément, les participants resteront au laboratoire pendant encore 1,5 heure, ils pourront apporter des livres ou des appareils électroniques pour passer le temps. Quatre autres échantillons de sang de 5 ml chacun seront obtenus 15, 30, 60 et 90 minutes après la supplémentation, totalisant cinq prises de sang de 5 ml par visite (25 ml par visite) et 75 ml de sang prélevé au total pour chaque sujet remplissant toute l'étude.

Le sang sera prélevé dans des tubes de séparation de sérum de 5 ml. Tous les échantillons de sang seront autorisés à coaguler pendant 1 heure avant centrifugation à 1000 x g pendant 10 minutes et le sérum sera congelé et conservé à -30°C jusqu'au traitement. Les traitements seront randomisés pour éviter un effet d'ordre et une période de sevrage d'au moins 48h entre les essais sera utilisée pour minimiser l'effet du traitement précédent.

Pour déterminer la synthèse des protéines, nous avons transfecté de manière stable des cellules musculaires C2C12 avec un plasmide (pcDNA3 luciférase) que nous utilisons pour mesurer la synthèse globale des protéines. Les cellules C2C12Luc seront étalées dans des plaques de 24 puits et différenciées sur 4 jours. Les cellules C2C12 différenciées seront mises à jeun en les lavant avec du PBS puis en les traitant avec un milieu de test (20 % de DMEM ; 80 % de solution saline tamponnée de Hank (HBSS)) pendant 15 minutes. Les cellules musculaires à jeun seront ensuite traitées avec un milieu de test contenant 0, 2,5, 5 ou 10 % de référence ou alimentées en sérum pendant 60 minutes. Les cellules seront collectées dans un tampon de lyse passive et l'activité de la luciférase de luciole sera déterminée comme décrit précédemment (Philp et al., 2013).

Pour déterminer la capacité d'une source de protéines à activer mTORC1, nous avons transfecté de manière stable des cellules musculaires C2C12 avec un plasmide (luciférase pcDNA3-TOP) où l'ARNm de la luciférase contient un tractus polypyrimidine terminal 5 '(TOP). Les ARNm 5'TOP sont spécifiquement régulés par l'activité de mTORC1 (Jefferies et al., 1994). Comme ci-dessus, les cellules musculaires C2C12TOPLuc différenciées dans des plaques à 24 puits seront stimulées à l'aide de la ligne de base ou du sérum alimenté comme décrit ci-dessus. Le degré d'activation de mTORC1 sera déterminé comme la différence de pentes entre la ligne de base et les sérums nourris. L'induction de mTORC1 et la synthèse des protéines par le lactosérum et l'IPC80 et la poudre de buffle entière seront comparées directement au sein des individus, puis entre les groupes.