Efeito de suplementos de proteína derivados de insetos na síntese de proteínas e ativação de mTORC1

O objetivo deste estudo é determinar a capacidade dos suplementos proteicos derivados de insetos (IPC80 e Whole Buffalo Powder, Ynsect®) de ativar a via mTORC1 e a síntese de proteínas nas células musculares.

Para atingir este objetivo, os participantes consumirão uma dose suplementar (0,25 g/kg de peso corporal) de IPC80, Whole Buffalo Powder ou whey protein. Amostras de sangue serão coletadas antes e 15, 30, 60 e 90 minutos após a suplementação.

Espera-se que este projeto determine se os suplementos proteicos derivados de insetos (IPC80 e Whole Buffalo Powder, Ynsect®) têm a capacidade de induzir a ativação da via mTORC1 e a síntese de proteínas nas células musculares. Os resultados deste estudo fornecerão mais informações sobre o uso desta nova fonte de proteína sustentável para apoiar a síntese de proteína muscular após o exercício.

Participantes do sexo masculino e feminino com idades entre 18 e 30 anos de idade serão incluídos no estudo. O estudo é um projeto randomizado, duplo-cego cruzado, sem que nem os sujeitos nem os investigadores saibam quem está em qual tratamento (IPC80, Whole Buffalo Powder ou Whey).

I. Coleta de sangue de linha de base Os indivíduos chegarão ao laboratório após um jejum noturno. A veia antecubital será canulada e uma amostra de sangue inicial de 5 mL será coletada.

II. Suplementação Após a coleta de sangue inicial, os indivíduos receberão um suplemento, 0,25 g/kg de peso corporal de proteína de soro de leite, IPC80 ou Whole Buffalo Powder dissolvido em 250 ml de água.

III. Coleta de sangue pós-prandial Após o consumo do suplemento, os participantes permanecerão no laboratório por mais 1,5 horas, podendo trazer livros ou aparelhos eletrônicos para passar o tempo. Mais quatro amostras de sangue de 5 mL cada serão obtidas aos 15, 30, 60 e 90 minutos após a suplementação, totalizando cinco coletas de sangue de 5 mL por visita (25 mL por visita) e 75 mL de sangue coletado no total para cada sujeito que completa todo o estudo.

O sangue será coletado em tubos de separação de soro de 5 mL. Todas as amostras de sangue coagularão por 1 hora antes da centrifugação a 1000 x g por 10 minutos e o soro será congelado e mantido a -30°C até ser processado. Os tratamentos serão randomizados para evitar um efeito de ordem e um período de washout de pelo menos 48h entre os ensaios será usado para minimizar o efeito do tratamento anterior.

Para determinar a síntese de proteínas, temos células musculares C2C12 transfectadas de forma estável com um plasmídeo (pcDNA3 luciferase) que usamos para medir a síntese global de proteínas. As células C2C12Luc serão semeadas em placas de 24 poços e diferenciadas ao longo de 4 dias. Células C2C12 diferenciadas serão submetidas a jejum lavando com PBS e, em seguida, tratando-as com meio de teste (DMEM a 20%; solução salina tamponada de Hank a 80% (HBSS)) por 15 minutos. As células musculares em jejum serão então tratadas com meio de teste contendo 0, 2,5, 5 ou 10% da linha de base ou soro alimentado por 60 minutos. As células serão coletadas em tampão de lise passiva e a atividade da luciferase do vaga-lume será determinada conforme descrito anteriormente (Philp et al., 2013).

Para determinar a capacidade de uma fonte de proteína para ativar mTORC1, transfectamos estavelmente células musculares C2C12 com um plasmídeo (pcDNA3-TOP luciferase) onde o mRNA da luciferase contém um trato de polipirimidina (TOP) terminal 5'. O mRNA 5'TOP é especificamente regulado pela atividade mTORC1 (Jefferies et al., 1994). Como acima, as células musculares C2C12TOPLic diferenciadas em placas de 24 poços serão estimuladas usando a linha de base ou soro alimentado conforme descrito acima. O grau de ativação do mTORC1 será determinado como a diferença nas inclinações entre a linha de base e os soros alimentados. A indução de mTORC1 e síntese protéica por soro de leite e IPC80 e Whole Buffalo Powder serão comparadas diretamente dentro dos indivíduos e depois entre os grupos.