慢性咳嗽におけるATPおよびP2X3受容体

この調査の目的は次のとおりです。

1. ATP が特発性慢性咳嗽患者の気道に存在または放出されているかどうかを判断する
2. 外因性 ATP に対する咳の感受性と喉頭の感受性の増加があるかどうかを判断します。
3. 上気道と下気道の炎症反応に対する外因性 ATP の影響を調べます。

結果の測定

これらはすべて、この研究の主要な結果の尺度です。

1. 特発性慢性咳嗽患者の気道におけるATPの存在と気道におけるP2X2/3受容体の局在
2. 外因性ATPに対する咳過敏症および喉頭過敏症
3. 外因性 ATP に対する上気道および下気道の炎症反応。

研究デザインの同意は、スクリーニングの前に取得されます。 スクリーニング: 参加者は研究に参加する前にスクリーニングされます。 咳をしていない正常な患者は、咳の既往歴があるかどうかを尋ねられ、8 週間以上慢性的な咳をしていてはいけません。 慢性咳嗽のある参加者は、慢性咳嗽が8週間以上続いているという定義を満たす必要があります。 これらの参加者は、Royal Brompton Hospital Cough Clinic から募集されます。 適格性の確認に関しては、以下に示す包含および除外基準を使用します。

研究 1 と 2 参加者は合計 3 か月間、この研究プロジェクトに参加します。

この調査は 2 つの部分に分かれているため、時系列順ではない可能性があります。

研究1。 募集後、被験者は光ファイバー気管支鏡検査に参加します。

研究 2: 被験者は、噴霧化された ATP の吸入の影響に関する研究に参加します。 被験者は、少なくとも 5 日間空けて 2 日間研究されます。 毎日、肺機能、FeNOおよび咳アンケートの測定後、被験者はネブライザーから生理食塩水またはATP溶液のいずれかを吸入し、その後、喉頭過敏症、カプサイシン咳チャレンジ、および喀痰誘発が行われます。 ATPまたは生理食塩水のチャレンジの順序は無作為化され、いずれかの投与は、チャレンジに対する反応を測定している患者および研究者に対して盲検化されます。

被験者集団:

これは単一のサイト調査になります。 治験責任医師は、Royal Brompton Hospital の Cough Clinic に通う 12 人の慢性咳嗽患者と、対照の 8 人の健康な被験者 (年齢と性別が一致) を募集します。

特発性慢性咳嗽を伴ういずれかの性別の参加者が調査され、少なくとも8週間の慢性咳嗽があり、少なくとも6か月間咳嗽クリニックで追跡されている必要があります。 これらの参加者は、咳の管理に関する欧州呼吸器学会のガイドラインで推奨されている診断経路を含むプロトコルを受けています。 参加者は、特定された原因を対象とした治療に失敗した咳の原因が特定できるか、特定可能な原因が見つからない慢性特発性咳嗽に分類されます。

咳をしていないコントロール対象者は、病院内の広告および地元の新聞サービスを通じて募集されます。

研究介入と手順 光ファイバー気管支鏡検査 気管支鏡検査は標準的な診断手順であり、研究チームの経験豊富な医師によって実施されます。

光ファイバー気管支鏡は、気管に入る前に、鼻腔または中咽頭のいずれかを通過します。 鼻道が優先されますが、鼻道でこれができない場合は、中咽頭が使用されます。 気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）は、右中葉から加温した０．９％生理食塩水を用いて、６０ｍｌの４つの連続アリコートで行う。 次に、気管支鏡検査医は、ブラシとピンセットを使用して気道の内側を覆う細胞のサンプルを採取します。後者は、組織の小片を取得できるようにします。

処置後、参加者は処置室から回復エリアに移動し、そこで看護スタッフによって監視されます。 気管支収縮の場合は、サルブタモールの噴霧で治療し、必要に応じてコルチコステロイド療法を行います。 安定し、酸素を必要とせず、眠気もなくなったら、研究医による審査の後、退院します。 ただし、医師は、退院するまで経過観察が必要であると判断する場合があります。 処置中にミダゾラムを投与された患者は、責任ある成人がその日に家に同行するよう求められます。

施術前に局所麻酔を行いますので、口や喉がしびれる場合があります。 一部の患者では、安全であれば抗不安薬（ミダゾラム）をカニューレから少量ずつ投与します。 これは通常、問題なく許容されます。

処置後、参加者は気道への刺激による喉の痛み、声のかすれ、または咳を経験することがありますが、これは通常数時間以内に落ち着きます. 他の症状には、痰の増加、時には粘液の血筋、処置後数時間後に発生する可能性のある一時的な発熱などがあります. これは通常、数時間以内に落ち着き、パラセタモールを服用することで助けることができます. 長期にわたる後遺症があってはなりません。

深刻なリスクはまれですが、気胸 (2000 例に 1 例) や重大な出血などがあります。 参加者は、手順に従って注意深く監視され、重大な合併症が発生した場合は、病院で適切な治療が行われます。

呼気凝縮液 (EBC) コレクション。 EBC は、Respire Diagnostics、Imperial College のハンドヘルド呼気収集装置で正常に呼吸するように被験者に依頼することによって収集されます。この装置は呼気を冷やして、呼気の凝縮を可能にします。 被験者は、最大 500 マイクロリットル (uL) の液体を収集できるように、それぞれ 3 ～ 4 分間の休憩で区切られた 5 分間の呼吸を 2 回行います。 液体は後で分析するために保存されます。

採血 前腕の静脈から静脈血（30cc）を採取します。 この検査では、針を使用して血液サンプルを採取するため、一時的な不快感が生じます。 血液サンプルは、さまざまなタンパク質を測定したり、白血球からいくつかの種類の幹細胞を取得したりするために使用されます。

連続喉頭鏡検査 連続喉頭鏡検査は、以前の方法論に基づいて行われます。 連続喉頭鏡テストは、鼻咽頭後部に光ファイバー鼻内視鏡を配置し、専門のヘッドギアを使用して固定することによって実行されます。 スコープの通過を容易にするために、少量の潤滑ゼリーが使用されます。 その後、被験者が呼吸運動や咳などのさまざまな操作を行っている間、喉頭入口のビデオ画像が連続的に記録されます。 これらの動きは、チャレンジプロトコルのさまざまな側面の前後に観察および記録されるため、喉頭の動きの異常や、声帯の位置などを評価できます。 声門開口部のサイズとサイズの変化が評価されます。

カプサイシン咳嗽チャレンジ カプサイシン チャレンジは、当研究室で確立された方法で実施されます。

レスター咳アンケート。 これは、慢性咳嗽が患者の生活の質に与える影響を評価するために使用されます。

咳の頻度の測定 咳の頻度は、Hyfe 咳記録モニターで 48 時間客観的に測定されます。

登録されたすべての研究参加者には、咳の音を監視および記録するためのHyfe Researchアプリケーションを搭載した専用のAndroidフォンまたは時計が提供されます。

咳の記録には、キャリブレーションのための研究登録時に5回の要請された咳が含まれます。 研究担当者は、Hyfe Research Platform Dashboard を使用して、各参加者の咳の発生をリアルタイムで遠隔監視することができます。これにより、必要に応じて、電話がオンになっており、適切に機能していることを確認できます。

調査が完了すると、訓練を受けた調査スタッフが電話を回収し、データが Hyfe サーバーに自動的にアップロードされていることを確認します。

アンケートによる喉頭機能の評価 喉頭機能障害の評価には、Laryngeal Hypersensitivity Questionnaire を使用します。

喀痰の誘発 喀痰は、無菌の 3% 生理食塩水のエアロゾルを吸入し、続いて 5 分の 3 期間で 4% および 5% に増加させることによって誘発されます。 喀痰サンプルを滅菌ポットに収集します。

喀痰プラグを選択し、一部を使用して細胞の分別カウントを行います。 微分細胞計数を行うには、ジチオスレイトールを喀痰プラグに加え、プレートシェーカーで激しく混合して喀痰を可溶化します。 次いで、サイトスピンが調製され、示差細胞数が得られる。

さらに、一部の細胞は、RNAseq 分析のために後で RNA に配置されます。 上清は、神経免疫バイオマーカーの後のアッセイのために保持されます。

スパイロメトリー測定 スパイロメトリー (FEV1 および強制肺活量、FVC) は、ドライ ウェッジ スパイロメーター (Vitalograph、バッキンガムシャー、英国) を使用して測定されます。

部分呼気一酸化窒素 (FeNO) 部分呼気一酸化窒素 (FeNO) レベルは、ポータブル FeNO モニター (NObreath; Bedfont Scientific Ltd, Rochester, UK) を使用して、0.05 L/s の一定の呼気流量で測定されます。

気管支鏡検査からの標本 (i) 気管支ブラッシング: (a) 細胞が付着したスライドを取得し、後の免疫組織化学分析のために保存します (b) 細胞は、後で RNAseq 分析のために抽出するために、後で RNA に入れます (c) 細胞を培養に入れます.

(ii) 気管支生検: 形態を評価するために、5 μm の切片を切り取り、ヘマトキシリンとエオシンで染色します。 研究者は、前述のように、これらの生検で炎症とリモデリングの程度を測定します。 さらに、これらのセクションは、ATP およびその他の関連する神経免疫バイオマーカーの局在化に関する一連の免疫組織化学的調査に使用されます。

(iii) 気管支肺胞洗浄: 気管支肺胞洗浄細胞は、分化細胞を計数するためにサイトスピンに配置されます。 一部の細胞は、RNAseq のために RNAlater に保持されます。 上清の BAL 液は、ATP を含む神経免疫マーカーの後のアッセイのために保持されます。