Рецептор АТФ и P2X3 при хроническом кашле

Вот цели этого исследования:

1. Определите, присутствует ли АТФ или высвобождается в дыхательных путях пациентов с идиопатическим хроническим кашлем.
2. Определить, есть ли повышение кашлевой чувствительности и чувствительности гортани к экзогенному АТФ
3. Изучите влияние экзогенного АТФ на воспалительную реакцию в верхних и нижних дыхательных путях.

Критерии оценки

Это все основные показатели результатов этого исследования:

1. Наличие АТФ в дыхательных путях больных идиопатическим хроническим кашлем и локализация рецепторов Р2Х2/3 в дыхательных путях
2. Кашлевая чувствительность и чувствительность гортани к экзогенному АТФ
3. Воспалительная реакция верхних и нижних дыхательных путей на экзогенный АТФ.

Согласие на дизайн исследования будет получено до скрининга. Скрининг: участники будут проверены до участия в исследованиях. Нормальных пациентов без кашля спросят, есть ли у них кашель в анамнезе, и у них не должно быть хронического кашля в течение 8 недель или более. Участники с хроническим кашлем должны соответствовать определению хронического кашля, продолжающегося более 8 недель. Эти участники будут набраны из клиники кашля Королевской больницы Бромптон. Мы будем использовать критерии включения и исключения, указанные ниже, в отношении подтверждения приемлемости.

Исследование 1 и 2 Участники будут участвовать в этом исследовательском проекте в общей сложности 3 месяца.

Это исследование будет состоять из двух частей, которые могут располагаться не в хронологическом порядке:

Исследование 1. После набора испытуемые пройдут фиброоптическую бронхоскопию.

Исследование 2: Субъекты примут участие в исследовании эффекта вдыхания распыленной АТФ. Субъекты будут изучаться в течение 2 дней, разделенных не менее чем 5 днями. Каждый день, после измерения функции легких, FeNO и кашлевых опросников, субъект будет вдыхать либо физиологический раствор, либо раствор АТФ из небулайзера, после чего будет выполняться гиперчувствительность гортани, кашлевая провокация капсаицином и индукция мокроты. Порядок провокации АТФ или физиологического раствора будет рандомизированным, и введение любого из них будет ослеплено для пациентов и исследователей, измеряющих ответ на провокацию.

Субъектное население:

Это будет исследование одного сайта. Исследователи наберут 12 пациентов с хроническим кашлем, посещающих нашу клинику кашля в Королевской больнице Бромптона, и 8 контрольных здоровых людей (соответствующих по возрасту и полу).

Будут изучены участники любого пола с идиопатическим хроническим кашлем, у которых должен быть хронический кашель продолжительностью не менее 8 недель, и они должны наблюдаться в Клинике кашля не менее 6 месяцев. Эти участники прошли протокол с диагностическим путем, рекомендованным Европейским респираторным обществом для лечения кашля. У участников должна быть либо идентифицируемая причина кашля, при которой не удалось провести терапию, направленную на выявленную причину, либо классификация хронического идиопатического кашля, когда не была обнаружена идентифицируемая причина.

Субъекты контроля, не кашляющие, будут набраны через рекламу в больнице и в местных газетах.

Исследование Вмешательство и процедуры Фиброоптическая бронхоскопия Бронхоскопия является стандартной диагностической процедурой и проводится опытным врачом исследовательской группы.

Волоконно-оптический бронхоскоп будет проведен либо через носовые ходы, либо через ротоглотку, прежде чем попасть в трахею. Носовые ходы будут предпочтительным путем, но в случае, если это невозможно сделать через носовые ходы, будет использоваться ротоглотка. Бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) будет выполняться из правой средней доли с использованием подогретого 0,9% физиологического раствора 4 последовательными аликвотами по 60 мл. Затем бронхоскопист возьмет образцы клеток, выстилающих дыхательные пути, с помощью щетки и щипцов, что позволяет получить небольшие кусочки ткани.

После процедуры участник будет перемещен из процедурной в зону восстановления, где за ним будет наблюдать медперсонал. В случае любой бронхоспазма ему/ей будет назначено лечение сальбутамолом через небулайзер и, при необходимости, будет назначена кортикостероидная терапия. После того, как состояние стабилизируется, ему больше не потребуется кислород и не будет сонливости, он будет выписан после осмотра врачами-исследователями. Однако врач может определить, что вы должны находиться под наблюдением до выписки домой. Любого пациента, получающего мидазолам во время процедуры, попросят сопровождать домой в этот день ответственного взрослого.

Перед процедурой используется местная анестезия, и у участников может возникнуть онемение рта или горла. Некоторым пациентам, если это безопасно, анксиолитический препарат (мидазолам) будет вводиться в малых дозах через канюлю. Обычно это переносится без проблем.

После процедуры участники могут испытывать боль в горле, хриплый голос или кашель из-за раздражения дыхательных путей, но это обычно проходит в течение нескольких часов. Другие симптомы могут включать повышенное выделение мокроты, иногда с прожилками крови в слизи и кратковременную лихорадку, которая может возникнуть через несколько часов после процедуры. Обычно это проходит в течение нескольких часов, и этому может помочь прием парацетамола. Не должно быть длительных последствий.

Серьезные риски встречаются редко, но включают пневмоторакс (1 случай на 2000) и значительное кровотечение. Участники будут находиться под пристальным наблюдением после процедуры, и в случае возникновения каких-либо серьезных осложнений им будет предоставлено соответствующее лечение в больнице.

Сбор конденсата выдыхаемого воздуха (КВВ). EBC будут собирать, попросив субъекта нормально дышать на портативный прибор для сбора выдыхаемого воздуха от Respire Diagnostics, Имперский колледж, который будет охлаждать выдыхаемый воздух, чтобы обеспечить конденсацию выдыхаемого воздуха. Субъект будет дышать в течение 2 периодов по 5 минут каждый, разделенных 3-4-минутным отдыхом, что позволит собрать до 500 микролитров (мкл) жидкости. Жидкость будет храниться для последующего анализа.

Сбор проб крови Венозная кровь (30 мл) будет взята из вены на предплечье. Этот тест вызывает временный дискомфорт, поскольку для получения образца крови используется игла. Образец крови будет использоваться для измерения различных белков и получения лейкоцитов для получения некоторых типов стволовых клеток.

Непрерывное ларингоскопическое обследование Непрерывное ларингоскопическое обследование проводится на основе предыдущей методики. Непрерывная ларингоскопия проводится путем размещения фиброоптического назенендоскопа в задней части носоглотки и закрепления его с помощью специального головного убора. Небольшое количество смазывающего желе используется для облегчения прохождения эндоскопа. После этого видеоизображения входа в гортань непрерывно записываются, пока субъект выполняет различные маневры, включая дыхательные движения и кашель. Эти движения будут наблюдаться и записываться до и после различных аспектов протокола испытания, что позволит нам оценить аномалии движения гортани и, например, положение голосовых складок. Будут оцениваться размер и изменение размера голосовой щели.

Заражение капсаицином от кашля Заражение капсаицином проводят, как это установлено в нашей лаборатории.

Лестерский опросник от кашля. Это будет использоваться для оценки влияния хронического кашля на качество жизни пациентов.

Измерение частоты кашля Частота кашля будет объективно измеряться с помощью монитора записи кашля Hyfe в течение 48 часов.

Всем зарегистрированным участникам исследования будет предоставлен специальный телефон или часы на базе Android с установленным приложением Hyfe Research для отслеживания и записи звуков их кашля.

Запись кашля будет включать 5 запрошенных кашлей во время включения в исследование для калибровки. Исследовательский персонал будет иметь возможность удаленно отслеживать появление кашля у каждого участника в режиме реального времени с помощью панели управления исследовательской платформы Hyfe, таким образом проверяя при необходимости, что телефоны включены и работают должным образом.

По завершении исследования обученный исследовательский сотрудник извлечет телефоны и обеспечит автоматическую загрузку данных на сервер Hyfe.

Оценка функции гортани с помощью вопросника Мы будем использовать вопросник гортанной гиперчувствительности для оценки дисфункции гортани.

Индукция мокроты Мокроту вызывают ингаляцией аэрозоля стерильного 3% физиологического раствора с последующим увеличением до 4% и 5% в течение 3 периодов по 5 минут каждый. Образцы мокроты собирают в стерильные емкости.

Отбирают образцы мокроты, и одну часть используют для дифференциального подсчета клеток. Для проведения дифференциального подсчета клеток дитиотреитол добавляют в пробку с мокротой и энергично перемешивают на шейкере для растворения мокроты. Затем готовят цитоспины и получают дифференциальный подсчет клеток.

Кроме того, некоторые из клеток будут позже помещены в РНК для анализа РНКсек. Супернатант будет храниться для последующего анализа нейроиммунных биомаркеров.

Спирометрические измерения Спирометрию (ОФВ1 и форсированную жизненную емкость легких, ФЖЕЛ) измеряют с помощью спирометра с сухим клином (Vitalograph, Buckinghamshire, UK).

Фракционный уровень оксида азота в выдыхаемом воздухе (FeNO) Фракционный уровень оксида азота в выдыхаемом воздухе (FeNO) измеряется с помощью портативного монитора FeNO (NObreath; Bedfont Scientific Ltd, Рочестер, Великобритания) при постоянном потоке выдоха 0,05 л/с.

Образцы из бронхоскопии (i) Бронхиальные щетки: (a) слайды с прикрепленными клетками будут получены и сохранены для последующего иммуногистохимического анализа (b) клетки будут помещены в РНК позже для последующего выделения для анализа RNAseq (c) клетки будут помещены в культуру .

(ii) Бронхиальные биопсии: срезы размером 5 мкм будут вырезаны и окрашены гематоксилином и эозином для оценки морфологии. Исследователи будут измерять степень воспаления и ремоделирования в этих биопсиях, как описано ранее. Кроме того, эти разделы будут использоваться для серии иммуногистохимических исследований для локализации АТФ и других представляющих интерес связанных нейроиммунных биомаркеров.

(iii) Бронхоальвеолярный лаваж: клетки бронхоальвеолярного лаважа помещают в цитоспин для подсчета дифференциальных клеток. Некоторые из клеток будут храниться в RNAlater для RNAseq. Надосадочная жидкость БАЛ будет храниться для последующего анализа нейроиммунных маркеров, включая АТФ.