Récepteur ATP et P2X3 dans la toux chronique

Voici les objectifs de cette étude :

1. Déterminer si l'ATP est présent ou libéré dans les voies respiratoires des patients atteints de toux chronique idiopathique
2. Déterminer s'il y a une augmentation de la sensibilité à la toux et de la sensibilité du larynx à l'ATP exogène
3. Examinez les effets de l'ATP exogène sur la réponse inflammatoire dans les voies respiratoires supérieures et inférieures.

Mesures des résultats

Ce sont toutes les principales mesures des résultats de cette étude :

1. Présence d'ATP dans les voies respiratoires des patients atteints de toux chronique idiopathique et localisation des récepteurs P2X2/3 dans les voies respiratoires
2. Sensibilité à la toux et sensibilité laryngée à l'ATP exogène
3. Réponse inflammatoire des voies respiratoires supérieures et inférieures à l'ATP exogène.

Conception de l'étude Le consentement sera obtenu avant la sélection. Sélection : les participants seront sélectionnés avant de s'engager dans des études. On demandera aux patients normaux qui ne toussent pas s'ils ont des antécédents de toux et s'ils ne devraient pas avoir eu de toux chronique pendant 8 semaines ou plus. Les participants souffrant de toux chronique doivent répondre à la définition d'une toux chronique ayant duré plus de 8 semaines. Ces participants seront recrutés à la clinique de la toux du Royal Brompton Hospital. Nous utiliserons les critères d'inclusion et d'exclusion indiqués ci-dessous en ce qui concerne la confirmation d'éligibilité.

Étude 1 et 2 Les participants participeront à ce projet de recherche pour un total de 3 mois.

Cette étude sera en deux parties qui peuvent ne pas être chronologiques dans l'ordre :

Étude 1. Après le recrutement, les sujets se présenteront pour une fibroscopie bronchique.

Étude 2 : Les sujets participeront à une étude sur l'effet de l'inhalation d'ATP nébulisé. Les sujets seront étudiés sur 2 jours séparés d'au moins 5 jours. Chaque jour, après les mesures de la fonction pulmonaire, le FeNO et les questionnaires sur la toux, le sujet inhalera une solution saline ou ATP à partir d'un nébuliseur, après quoi une hypersensibilité laryngée, un défi à la toux à la capsaïcine et une induction d'expectoration seront effectués. L'ordre du défi ATP ou salin sera randomisé et l'administration de l'un ou l'autre sera en aveugle pour les patients et les enquêteurs mesurant la réponse au défi.

Population de sujets :

Il s'agira d'une étude de site unique. Les enquêteurs recruteront 12 patients atteints de toux chronique fréquentant notre clinique de la toux à l'hôpital Royal Brompton et 8 sujets sains témoins (d'âge et de sexe appariés).

Les participants de l'un ou l'autre sexe souffrant de toux chronique idiopathique seront étudiés et doivent avoir eu une toux chronique d'une durée d'au moins 8 semaines et doivent avoir été suivis à la clinique de la toux pendant au moins 6 mois. Ces participants auront suivi un protocole avec un parcours de diagnostic tel que recommandé par les directives de l'European Respiratory Society pour la prise en charge de la toux. Les participants auraient soit une cause identifiable de leur toux pour laquelle les thérapies ciblées sur la cause identifiée ont échoué, soit une toux chronique idiopathique pour laquelle aucune cause identifiable n'a été trouvée.

Les sujets témoins ne toussant pas seront recrutés par voie d'annonce au sein des services de l'hôpital et des journaux locaux.

Recherche Intervention et procédures Bronchoscopie par fibre optique La bronchoscopie est une procédure diagnostique standard et sera entreprise par un médecin expérimenté de l'équipe de recherche.

Le bronchoscope à fibre optique sera passé à travers les voies nasales ou l'oropharynx avant de passer dans la trachée. Les voies nasales seront la voie préférentielle, mais dans le cas où cela ne peut se faire par les voies nasales, l'oropharynx sera utilisé. Un lavage bronchoalvéolaire (BAL) sera effectué à partir du lobe moyen droit en utilisant une solution saline à 0,9 % chauffée avec 4 aliquotes successives de 60 ml. Le bronchoscopiste prélèvera ensuite des échantillons des cellules tapissant les voies respiratoires à l'aide d'une brosse et d'une pince, cette dernière permettant d'obtenir de petits morceaux de tissu.

Après l'intervention, le participant sera transféré de la salle d'intervention à la salle de réveil, où il sera surveillé par le personnel infirmier. En cas de bronchoconstriction, il sera traité avec du salbutamol nébulisé et, si nécessaire, une corticothérapie sera administrée. Une fois stable, ne nécessitant plus d'oxygène et ne somnolant plus, il sortira après examen par les médecins chercheurs. Le médecin peut toutefois déterminer que vous devez être gardé en observation jusqu'à ce que vous soyez apte à rentrer chez vous. Tout patient recevant du midazolam au cours de la procédure devra être accompagné par un adulte responsable à son domicile ce jour-là.

Un anesthésique local est utilisé avant la procédure et les participants peuvent avoir la bouche ou la gorge engourdies. Chez certains patients, s'il est sécuritaire de le faire, un médicament anxiolytique (midazolam) sera administré à petites doses par la canule. Ceci est généralement toléré sans problème.

Après la procédure, les participants peuvent ressentir un mal de gorge, une voix rauque ou une toux due à une irritation des voies respiratoires, mais cela disparaît généralement en quelques heures. D'autres symptômes peuvent inclure l'augmentation de la production de crachats, parfois accompagnée de stries sanguines du mucus et d'une fièvre passagère qui peut survenir quelques heures après l'intervention. Cela s'installe généralement en quelques heures et peut être aidé en prenant du paracétamol. Il ne devrait pas y avoir de séquelles durables.

Les risques graves sont rares mais comprennent un pneumothorax (1 cas sur 2000) et des saignements importants. Les participants seront suivis de près après la procédure et en cas de complication grave, ils recevront le traitement approprié à l'hôpital.

Collecte des condensats d'air expiré (EBC). L'EBC sera collecté en demandant au sujet de respirer normalement sur un appareil de collecte d'haleine portable de Respire Diagnostics, Imperial College, qui refroidira l'air expiré pour permettre la condensation de l'air expiré. Le sujet respirera pendant 2 périodes de 5 minutes chacune séparées par un repos de 3 à 4 minutes pour permettre la collecte de jusqu'à 500 microlitres (uL) de liquide. Le liquide sera stocké pour une analyse ultérieure.

Prélèvement d'échantillon sanguin Du sang veineux (30 cc) sera prélevé dans une veine de l'avant-bras. Ce test provoque une gêne passagère car une aiguille est utilisée pour prélever l'échantillon de sang. L'échantillon de sang sera utilisé pour mesurer diverses protéines et pour prélever des globules blancs afin d'obtenir certains types de cellules souches.

Examen laryngoscopique continu Le test de laryngoscopie continue est effectué sur la base de la méthodologie précédente. Le test de laryngoscopie continue est effectué en plaçant un nasendoscope à fibre optique dans le nasopharynx postérieur et en le fixant à l'aide d'un casque spécialisé. Une petite quantité de gelée lubrifiante est utilisée pour faciliter le passage de la lunette. Des images vidéo de l'entrée laryngée sont ensuite enregistrées en continu pendant qu'un sujet effectue diverses manœuvres, notamment des mouvements respiratoires et de la toux. Ces mouvements seront observés et enregistrés avant et après les différents aspects du protocole de challenge et permettront ainsi d'évaluer les anomalies des mouvements laryngés et par exemple la position des cordes vocales. La taille et le changement de taille de l'ouverture glottique seront évalués.

Défi à la toux à la capsaïcine Le défi à la capsaïcine est effectué tel qu'établi dans notre laboratoire.

Le questionnaire sur la toux de Leicester. Cela permettra d'évaluer l'impact de la toux chronique sur la qualité de vie des patients.

Mesure de la fréquence de la toux La fréquence de la toux sera mesurée objectivement avec un moniteur d'enregistrement de la toux Hyfe pendant 48 heures.

Tous les participants à l'étude inscrits recevront un téléphone ou une montre Android dédié chargé avec l'application Hyfe Research pour surveiller et enregistrer leurs sons de toux.

L'enregistrement de la toux comprendra 5 toux sollicitées au moment de l'inscription à l'étude pour l'étalonnage. Le personnel de l'étude aura la possibilité de surveiller à distance l'accumulation de toux pour chaque participant en temps réel avec le tableau de bord de la plate-forme de recherche Hyfe - vérifiant ainsi au besoin que les téléphones sont allumés et fonctionnent correctement.

À la fin de l'étude, un membre du personnel de l'étude formé récupérera les téléphones et s'assurera que les données ont été automatiquement téléchargées sur le serveur Hyfe.

Évaluation de la fonction laryngée par questionnaire Nous utiliserons le questionnaire d'hypersensibilité laryngée pour évaluer la dysfonction laryngée.

Induction d'expectorations Les expectorations sont induites par inhalation d'un aérosol de solution saline stérile à 3 % puis augmentation à 4 % et 5 % pendant 3 périodes de 5 minutes chacune. Les échantillons de crachats sont recueillis dans des pots stériles.

Des bouchons d'expectoration sont sélectionnés et une partie est utilisée pour effectuer des numérations cellulaires différentielles. Pour effectuer des numérations cellulaires différentielles, du dithiothréitol est ajouté au bouchon d'expectoration et mélangé vigoureusement sur un agitateur de plaque pour solubiliser l'expectoration. Des cytospins sont ensuite préparés et des numérations cellulaires différentielles sont obtenues.

De plus, certaines des cellules seront placées dans l'ARN plus tard pour l'analyse RNAseq. Le surnageant sera conservé pour un dosage ultérieur des biomarqueurs neuro-immuns.

Mesures spirométriques La spirométrie (FEV1 et capacité vitale forcée, CVF) est mesurée à l'aide d'un spiromètre à coin sec (Vitalograph, Buckinghamshire, UK).

Oxyde nitrique expiré fractionné (FeNO) Le niveau d'oxyde nitrique expiré fractionné (FeNO) est mesuré à l'aide d'un moniteur FeNO portable (NObreath ; Bedfont Scientific Ltd, Rochester, Royaume-Uni) à un débit expiratoire constant de 0,05 L/s.

Échantillons de bronchoscopie (i) Brossages bronchiques : (a) des lames avec des cellules attachées seront obtenues et conservées pour une analyse immunohistochimique ultérieure (b) les cellules seront placées dans l'ARN plus tard pour une extraction ultérieure pour l'analyse RNAseq (c) les cellules seront mises en culture .

(ii) Biopsies bronchiques : Des coupes de cinq μm seront coupées et colorées avec de l'hématoxyline et de l'éosine pour évaluer la morphologie. Les enquêteurs mesureront l'étendue de l'inflammation et du remodelage dans ces biopsies, comme décrit précédemment. De plus, ces sections seront utilisées pour une série d'investigations immunohistochimiques pour la localisation de l'ATP et d'autres biomarqueurs neuro-immunitaires associés d'intérêt.

(iii) Lavage bronchoalvéolaire : les cellules de lavage bronchoalvéolaire seront placées dans un cytospin pour le comptage des cellules différentielles. Certaines des cellules seront conservées dans RNAlater pour RNAseq. Le liquide BAL surnageant sera conservé pour un dosage ultérieur des marqueurs neuro-immuns, y compris l'ATP.