ATP- ja P2X3-reseptori kroonisessa yskässä

Nämä ovat tämän tutkimuksen tavoitteet:

1. Selvitä, onko ATP:tä läsnä tai vapautuuko idiopaattisen kroonisen yskän potilaiden hengitysteihin
2. Selvitä, onko yskän herkkyys ja kurkunpään herkkyys lisääntynyt eksogeeniselle ATP:lle
3. Tutki eksogeenisen ATP:n vaikutuksia ylempien ja alempien hengitysteiden tulehdusvasteeseen.

Tulostoimenpiteet

Nämä ovat kaikki tämän tutkimuksen ensisijaisia ​​tulosmittauksia:

1. ATP:n esiintyminen idiopaattisen kroonisen yskän potilaiden hengitysteissä ja P2X2/3-reseptorien sijainti hengitysteissä
2. Yskäherkkyys ja kurkunpään herkkyys eksogeeniselle ATP:lle
3. Ylempien ja alempien hengitysteiden tulehduksellinen vaste eksogeeniselle ATP:lle.

Opintosuunnitelman suostumus hankitaan ennen seulontaa. Seulonta: Osallistujat seulotaan ennen opiskelua. Tavallisilta ei-yskiviltä potilailta kysytään, onko heillä ollut yskää, ja heillä ei olisi pitänyt olla kroonista yskää 8 viikkoon tai pidempään. Niiden osallistujien, joilla on krooninen yskä, on täytettävä yli 8 viikkoa kestäneen kroonisen yskän määritelmä. Nämä osallistujat rekrytoidaan Royal Brompton Hospital Cough -klinikalta. Käytämme alla mainittuja hyväksymis- ja poissulkemiskriteerejä kelpoisuusvahvistuksessa.

Tutkimus 1 ja 2 Osallistujat ovat tässä tutkimusprojektissa yhteensä 3 kuukautta.

Tämä tutkimus koostuu kahdesta osasta, jotka eivät välttämättä ole kronologisessa järjestyksessä:

Tutkimus 1. Rekrytoinnin jälkeen koehenkilöt osallistuvat kuituoptiseen bronkoskopiaan.

Tutkimus 2: Koehenkilöt osallistuvat tutkimukseen sumutetun ATP:n sisäänhengityksen vaikutuksesta. Aiheet opiskellaan 2 päivää, joiden välillä on vähintään 5 päivää. Joka päivä keuhkojen toiminnan mittausten, FeNO- ja yskäkyselyiden jälkeen koehenkilö hengittää joko suolaliuosta tai ATP-liuosta sumuttimesta, minkä jälkeen suoritetaan kurkunpään yliherkkyys, kapsaisiini-yskäaltistus ja ysköksen induktio. ATP:n tai suolaliuoksen altistuksen järjestys satunnaistetaan ja jommankumman antaminen sokkoutetaan altistusvastetta mittaaville potilaille ja tutkijoille.

Aihepopulaatio:

Tämä on yhden sivuston tutkimus. Tutkijat rekrytoivat 12 kroonista yskää sairastavaa potilasta Royal Bromptonin sairaalan yskäklinikallemme ja 8 tervettä vertailuhenkilöä (ikä ja sukupuoli vastaavat).

Kumman tahansa sukupuolen osallistujat, joilla on idiopaattinen krooninen yskä, tutkitaan, ja heillä olisi ollut krooninen yskä, joka on kestänyt vähintään 8 viikkoa, ja heitä olisi seurattu yskäklinikalla vähintään 6 kuukautta. Nämä osallistujat ovat läpäisseet protokollan, jossa on diagnostinen reitti Euroopan hengitystieyhdistyksen ohjeiden mukaisesti yskän hallintaa varten. Osallistujilla olisi joko tunnistettavissa oleva yskän syy, jonka tunnistettuun syyn hoitoon kohdistetut hoidot ovat epäonnistuneet, tai heillä on krooninen idiopaattinen yskä, jolle ei ole löydetty tunnistettavaa syytä.

Ei-yskivät kontrollikohteet rekrytoidaan ilmoituksen kautta sairaalaan ja paikallislehtiin.

Tutkimus Interventio ja toimenpiteet Fiberoptic bronkoscopy Bronkoskopia on standardi diagnostinen toimenpide, ja sen suorittaa kokenut tutkimusryhmän lääkäri.

Kuituoptinen bronkoskooppi johdetaan joko nenäkäytävien tai suunielun läpi ennen kuin se kulkee henkitorveen. Nenäkäytävät ovat ensisijainen reitti, mutta jos tätä ei voida tehdä nenäkäytävän kautta, käytetään suunielun kautta. Bronkoalveolaarinen huuhtelu (BAL) suoritetaan oikeasta keskilohkosta käyttämällä lämmitettyä 0,9-prosenttista suolaliuosta ja neljä peräkkäistä 60 ml:n alikvoottia. Bronkoskopisti ottaa sitten näytteitä hengitysteitä peittävistä soluista harjalla ja pihdeillä, joista jälkimmäinen mahdollistaa pienten kudospalojen saamisen.

Toimenpiteen jälkeen osallistuja siirretään toimenpidehuoneesta toipumisalueelle, jossa häntä valvoo hoitohenkilökunta. Jos keuhkoputken supistumista ilmenee, häntä hoidetaan sumutetulla salbutamolilla ja tarvittaessa kortikosteroidihoitoa. Kun hän on vakaa, ei enää tarvitse happea eikä ole enää unelias, hän kotiutuu tutkijan lääkäreiden arvioinnin jälkeen. Lääkäri voi kuitenkin päättää, että sinun on oltava tarkkailussa, kunnes olet kunnossa kotiuttamista varten. Potilaita, joille annetaan midatsolaamia toimenpiteen aikana, pyydetään olemaan vastuussa oleva aikuinen mukana kotiin sinä päivänä.

Paikallispuudutetta käytetään ennen toimenpidettä, ja osallistujat voivat kokea suun tai kurkun puutumista. Joillekin potilaille annetaan anksiolyyttistä lääkettä (midatsolaamia) pieninä annoksina kanyylin kautta, jos se on turvallista. Tämä siedetään yleensä ongelmitta.

Toimenpiteen jälkeen osallistujat voivat kokea kurkkukipua, käheää ääntä tai yskää hengitysteiden ärsytyksen vuoksi, mutta tämä yleensä rauhoittuu muutamassa tunnissa. Muita oireita voivat olla lisääntynyt ysköksen eritys, joskus liman verisuonetta ja ohimenevää kuumetta, joka voi ilmaantua muutaman tunnin kuluttua toimenpiteestä. Tämä korjaantuu yleensä muutamassa tunnissa, ja sitä voidaan auttaa ottamalla parasetamolia. Pitkäkestoisia seurauksia ei pitäisi olla.

Vakavat riskit ovat harvinaisia, mutta niihin kuuluvat ilmarinta (1 tapauksesta 2000:sta) ja merkittävä verenvuoto. Osallistujia seurataan tarkasti toimenpiteen jälkeen, ja jos vakavia komplikaatioita ilmenee, heille annetaan asianmukaista hoitoa sairaalassa.

Uloshengitetyn hengityksen kondensaatin (EBC) keräys. EBC kerätään pyytämällä koehenkilöä hengittämään normaalisti Respire Diagnostics, Imperial Collegen kädessä pidettävään hengityksen keräyslaitteeseen, joka jäähdyttää uloshengitettyä hengitystä mahdollistaen uloshengitysilman tiivistymisen. Kohde hengittää 2 5 minuutin jaksoa, joista kumpikin on 3-4 minuutin tauko, jotta nestettä kerääntyy jopa 500 mikrolitraa (uL). Neste varastoidaan myöhempää analyysiä varten.

Verinäytteenotto Laskimoveri (30 cc) otetaan kyynärvarren laskimosta. Tämä testi aiheuttaa ohimenevää epämukavuutta, koska verinäytteen ottamiseen käytetään neulaa. Verinäytettä käytetään erilaisten proteiinien mittaamiseen ja valkosolujen saamiseen tietyntyyppisten kantasolujen saamiseksi.

Jatkuva laryngoskooppinen tutkimus Jatkuva laryngoskooppitutkimus tehdään aikaisemman metodologian perusteella. Jatkuva laryngoskooppitutkimus tehdään asettamalla kuituoptinen nasendoskooppi nenänielun takaosaan ja kiinnittämällä se erikoispäähineillä. Pieni määrä voiteluhyytelöä käytetään helpottamaan skoopin läpikulkua. Tämän jälkeen videokuvia kurkunpään sisääntuloaukosta tallennetaan jatkuvasti, kun kohde suorittaa erilaisia ​​liikkeitä, mukaan lukien hengitysliikkeet ja yskä. Näitä liikkeitä tarkkaillaan ja tallennetaan ennen haasteprotokollan eri näkökohtia ja niiden jälkeen, jolloin voimme arvioida kurkunpään liikepoikkeavuuksia ja esimerkiksi äänihuutteiden asentoa. Glottisen aukon koko ja koon muutos arvioidaan.

Kapsaisiini-yskäaltistus Kapsaisiinialtistus suoritetaan laboratoriomme mukaisesti.

Leicester Cough Questionnaire. Sen avulla arvioidaan kroonisen yskän vaikutusta potilaiden elämänlaatuun.

Yskätiheyden mittaaminen Yskätiheyttä mitataan objektiivisesti Hyfe-yskäntallennusmittarilla 48 tunnin ajan.

Kaikille tutkimukseen osallistuneille tarjotaan erillinen Android-puhelin tai -kello, jossa on Hyfe Research -sovellus, jotta he voivat seurata ja tallentaa yskäääniä.

Yskätallenne sisältää viisi pyydettyä yskimistä kalibrointiin ilmoittautumisen yhteydessä. Tutkimushenkilöstöllä on mahdollisuus seurata etänä kunkin osallistujan yskimisen kertymistä reaaliajassa Hyfe Research Platform Dashboardin avulla – näin tarvittaessa varmistaa, että puhelimet ovat päällä ja toimivat asianmukaisesti.

Tutkimuksen päätyttyä koulutettu tutkimushenkilökunnan jäsen hakee puhelimet ja varmistaa, että tiedot on ladattu automaattisesti Hyfe-palvelimelle.

Kurkunpään toiminnan arviointi kyselylomakkeella Käytämme kurkunpään yliherkkyyskyselyä arvioimaan kurkunpään toimintahäiriötä.

Ysköksen induktio Ysköstä indusoidaan hengittämällä steriiliä 3-prosenttista suolaliuosta sisältävää aerosolia ja lisäämällä sen jälkeen 4 %:iin ja 5 %:iin 3 5 minuutin jakson aikana. Yskösnäytteet kerätään steriileihin astioihin.

Ysköstulpat valitaan ja yhtä osaa käytetään differentiaaliseen solulaskentaan. Ditiotreitolia lisätään ysköstulppaan ja sekoitetaan voimakkaasti levyravistelijassa ysköksen liuottamiseksi. Sitten valmistetaan sytospinit ja saadaan differentiaaliset solumäärät.

Lisäksi osa soluista sijoitetaan RNA:han myöhemmin RNAseq-analyysiä varten. Supernatantti säilytetään myöhempää neuroimmuunibiomarkkereiden määritystä varten.

Spirometriset mittaukset Spirometria (FEV1 ja pakotettu vitaalikapasiteetti, FVC) mitataan käyttämällä kuivakiilaspirometriä (Vitalograph, Buckinghamshire, UK).

Fraktionaalinen uloshengitystyppioksidi (FeNO) Fraktionaalinen uloshengitetyn typpioksidin (FeNO) taso mitataan kannettavalla FeNO-monitorilla (NObreath; Bedfont Scientific Ltd, Rochester, UK) jatkuvalla uloshengitysvirtauksella 0,05 l/s.

Bronkoskopiasta saadut näytteet (i) Keuhkoputkien harjaukset: (a) Objektilasit, joihin on kiinnitetty soluja, otetaan ja säilytetään myöhempää immunohistokemiallista analyysiä varten (b) solut sijoitetaan RNA:han myöhemmin myöhempää uuttamista varten RNAseq-analyysiä varten (c) solut sijoitetaan viljelmään .

(ii) Bronkiaaliset biopsiat: Viisi mikrometriä leikataan ja värjätään hematoksyliinillä ja eosiinilla morfologian arvioimiseksi. Tutkijat mittaavat tulehduksen ja uudelleenmuodostumisen laajuuden näissä biopsioissa, kuten aiemmin on kuvattu. Lisäksi näitä osia käytetään sarjassa immunohistokemiallisia tutkimuksia ATP:n ja muiden kiinnostavien neuroimmuunibiomarkkerien lokalisoimiseksi.

(iii) Bronkoalveolaarinen huuhtelu: Bronkoalveolaariset huuhtelusolut sijoitetaan sytospiniin differentiaalisolujen laskemista varten. Osa soluista säilytetään RNAlaterissa RNAseq:tä varten. Supernatantti BAL-neste säilytetään myöhempää neuroimmuunimarkkerien, mukaan lukien ATP:n, määritystä varten.