ATP- og P2X3-reseptor ved kronisk hoste

Dette er målene for denne studien:

1. Bestem om ATP er tilstede eller frigitt i luftveiene til pasienter med idiopatisk kronisk hoste
2. Finn ut om det er en økning i hostefølsomhet og larynxfølsomhet for eksogen ATP
3. Undersøk effekten av eksogen ATP på den inflammatoriske responsen i øvre og nedre luftveier.

Utfallsmål

Dette er alle primære resultatmål for denne studien:

1. Tilstedeværelse av ATP i luftveiene til pasienter med idiopatisk kronisk hoste og lokalisering av P2X2/3-reseptorer i luftveiene
2. Hostefølsomhet og larynxfølsomhet for eksogen ATP
3. Inflammatorisk respons i øvre og nedre luftveier på eksogen ATP.

Studiedesignsamtykke vil bli innhentet før screening. Screening: Deltakerne vil bli screenet før engasjement i studier. Vanlige ikke-hostende pasienter vil bli spurt om de har en historie med hoste og om de ikke skal ha hatt kronisk hoste på 8 uker eller mer. Deltakerne med kronisk hoste må tilfredsstille definisjonen på at en kronisk hoste har vart i mer enn 8 uker. Disse deltakerne vil bli rekruttert fra Royal Brompton Hospital Cough clinic. Vi vil bruke inkluderings- og eksklusjonskriteriene som er angitt nedenfor med hensyn til kvalifikasjonsbekreftelse.

Studie 1 og 2 Deltakerne vil være i dette forskningsprosjektet i totalt 3 måneder.

Denne studien vil være i to deler som kanskje ikke er kronologisk i rekkefølge:

Studie 1. Etter rekruttering vil forsøkspersonene delta for en fiberoptisk bronkoskopi.

Studie 2: Forsøkspersonene vil delta i en studie av effekten av å inhalere forstøvet ATP. Emner vil bli studert på 2 dager med minst 5 dager atskilt. Hver dag, etter målinger av lungefunksjon, FeNO og hostespørreskjemaer, vil forsøkspersonen inhalere enten saltvann eller ATP-løsning fra en forstøver, hvoretter larynxoverfølsomhet, capsaicin-hosteutfordring og sputuminduksjon vil bli utført. Rekkefølgen av ATP- eller saltvannsutfordringen vil bli randomisert og administreringen av begge vil bli blindet for pasientene og etterforskerne som måler responsen på utfordringen.

Emnepopulasjon:

Dette vil være en enkelt stedsstudie. Etterforskerne vil rekruttere 12 pasienter med kronisk hoste som går til vår hosteklinikk ved Royal Brompton Hospital og 8 friske kontrollpersoner (alder og kjønn matchet).

Deltakerne av begge kjønn med idiopatisk kronisk hoste vil bli studert og bør ha hatt en kronisk hoste av minst 8 ukers varighet, og bør ha blitt fulgt i hosteklinikken i minst 6 måneder. Disse deltakerne vil ha gjennomgått en protokoll med en diagnostisk vei som anbefalt av European Respiratory Societys retningslinjer for behandling av hoste. Deltakerne vil enten ha en identifiserbar årsak til hosten som har mislykket behandlinger rettet mot den identifiserte årsaken eller klassifisert som kronisk idiopatisk hoste der ingen identifiserbar årsak er funnet.

Kontrollantene som ikke hoster skal rekrutteres gjennom annonsering innen sykehuset og lokalavistjenestene.

Forskningsintervensjon og prosedyrer Fiberoptisk bronkoskopi Bronkoskopi er en standard diagnostisk prosedyre og vil bli utført av en erfaren lege fra forskerteamet.

Det fiberoptiske bronkoskopet vil føres gjennom enten nesegangene eller orofarynx før det passerer inn i luftrøret. Nesegangene vil være den foretrukne ruten, men i tilfelle dette ikke kan gjøres gjennom nesegangene, vil orofarynx brukes. Bronkoalveolær lavage (BAL) vil bli utført fra høyre midtlapp ved bruk av oppvarmet 0,9 % saltvann med 4 påfølgende alikvoter på 60 ml. Bronkoskopisten vil deretter ta prøver av cellene i luftveiene ved hjelp av en børste og tang, sistnevnte gjør at små vevsbiter kan tas.

Etter prosedyren vil deltakeren bli flyttet fra prosedyrerommet til restitusjonsområdet, hvor han/hun blir overvåket av pleiepersonell. Ved eventuell bronkokonstriksjon vil han/hun bli behandlet med forstøvet salbutamol, og om nødvendig vil kortikosteroidbehandling bli gitt. Når han/hun er stabil, og ikke lenger krever oksygen og ikke lenger er døsig, vil han/hun bli utskrevet etter gjennomgang av forskningslegene. Legen kan imidlertid bestemme at du må holdes under observasjon til du er i stand til å bli utskrevet hjemme. Enhver pasient som får midazolam under prosedyren vil bli bedt om å ha en ansvarlig voksen til å følge dem hjem den dagen.

Lokalbedøvelse brukes før prosedyren og deltakerne kan oppleve følelsesløs munn eller hals. Hos noen pasienter, hvis det er trygt å gjøre det, vil et angstdempende legemiddel (midazolam) gis i små doser gjennom kanylen. Dette tolereres vanligvis uten problemer.

Etter prosedyren kan deltakerne oppleve sår hals, hes stemme eller hoste på grunn av irritasjon i luftveiene, men dette går vanligvis over i løpet av få timer. Andre symptomer kan inkludere økt produksjon av sputum, noen ganger med blodstriper av slimet og forbigående feber som kan oppstå etter noen timer etter inngrepet. Dette ordner seg vanligvis i løpet av noen timer og kan hjelpes ved å ta paracet. Det skal ikke være langvarige følgetilstander.

Alvorlige risikoer er sjeldne, men inkluderer pneumothorax (1 av 2000 tilfeller) og betydelig blødning. Deltakerne vil bli nøye overvåket etter prosedyren, og dersom det skulle oppstå alvorlige komplikasjoner, vil de bli gitt riktig behandling på sykehus.

Utåndet pust kondensat (EBC) samling. EBC vil bli samlet inn ved å be personen om å puste normalt på et håndholdt pusteoppsamlingsapparat fra Respire Diagnostics, Imperial College, som vil kjøle ut pusten for å tillate kondensering av utåndingsluften. Personen vil puste i 2 perioder på 5 minutter hver atskilt med 3-4 minutters hvile for å tillate oppsamling av opptil 500 mikroliter (uL) væske. Væsken vil bli lagret for senere analyse.

Blodprøvetaking Venøst ​​blod (30 cc) vil bli tatt fra en vene i underarmen. Denne testen forårsaker forbigående ubehag ettersom en nål brukes til å ta blodprøven. Blodprøven skal brukes til å måle ulike proteiner og for å få hvite blodceller for å få noen typer stamceller.

Kontinuerlig laryngoskopisk undersøkelse Kontinuerlig laryngoskopi-testing utføres basert på tidligere metodikk. Kontinuerlig laryngoskopi-testing utføres ved å plassere et fiberoptisk nasendoskop i bakre nasofarynx og sikre det med spesialisthodeplagg. En liten mengde smøregelé brukes for å lette passasjen av kikkerten. Videobilder av larynxinnløpet blir deretter kontinuerlig tatt opp mens en person utfører forskjellige manøvrer inkludert respirasjonsbevegelser og hoste. Disse bevegelsene vil bli observert og registrert før og etter de ulike aspektene av utfordringsprotokollen og lar oss dermed evaluere larynxbevegelsesabnormiteter og for eksempel posisjonen til stemmefoldene. Størrelsen og endringen i størrelsen på den glottiske blenderåpningen vil bli evaluert.

Capsaicin hosteutfordring Capsaicinutfordring utføres som etablert i vårt laboratorium.

Leicester Cough Questionnaire. Dette skal brukes til å vurdere innvirkningen av kronisk hoste på pasientenes livskvalitet.

Måling av hostefrekvens Hostefrekvens vil bli målt objektivt med en Hyfe hosteregistreringsmonitor i 48 timer.

Alle påmeldte studiedeltakere vil bli utstyrt med en dedikert Android-telefon eller klokke lastet med Hyfe Research-applikasjonen for å overvåke og registrere hostelydene deres.

Hosteregistrering vil inkludere 5 oppfordrede hoster på tidspunktet for studieregistrering for kalibrering. Studiepersonell vil ha muligheten til å fjernovervåke opphopning av hoste for hver deltaker i sanntid med Hyfe Research Platform Dashboard – og dermed etter behov verifisere at telefonene er på og fungerer som de skal.

Når studiet er fullført, vil en utdannet studiemedarbeider hente telefonene og sørge for at data automatisk er lastet opp til Hyfe-serveren.

Vurdering av larynxfunksjon ved spørreskjema Vi vil bruke Laryngeal Hypersensitivity Questionnaire for å vurdere larynxdysfunksjon.

Induksjon av sputum Sputum induseres ved inhalering av en aerosol av steril 3 % saltvannsløsning og øker deretter til 4 % og 5 % i løpet av 3 perioder på 5 minutter hver. Sputumprøver samles i sterile potter.

Sputumplugger velges og en del brukes til å utføre differensielle celleteller. For å utføre differensielle celleteller tilsettes ditiotreitol til sputumpluggen og blandes kraftig på en plateryster for å oppløse sputumet. Cytospins blir deretter fremstilt, og differensialcelletall oppnås.

I tillegg vil noen av cellene bli plassert i RNA senere for RNAseq-analyse. Supernatanten vil bli oppbevart for senere analyse av nevroimmune biomarkører.

Spirometriske målinger Spirometri (FEV1 og forsert vitalkapasitet, FVC) måles med et tørrkilespirometer (Vitalograph, Buckinghamshire, Storbritannia).

Fraksjonert utåndet nitrogenoksid (FeNO) Nivået av fraksjonert utåndet nitrogenoksid (FeNO) måles ved hjelp av en bærbar FeNO-monitor (NObreath; Bedfont Scientific Ltd, Rochester, Storbritannia) ved en konstant ekspirasjonsstrøm på 0,05 l/s.

Prøver fra bronkoskopi (i) Bronkialbørsting: (a) objektglass med celler festet vil bli oppnådd og bevart for senere immunhistokjemisk analyse (b) celler vil bli plassert i RNA senere for senere ekstraksjon for RNAseq-analyse (c) celler vil bli plassert i kultur .

(ii) Bronkialbiopsier: Fem μm seksjoner vil bli kuttet og farget med hematoksylin og eosin for å vurdere morfologi. Etterforskerne vil måle omfanget av betennelse og remodellering i disse biopsiene som tidligere beskrevet. I tillegg vil disse seksjonene bli brukt til en serie immunhistokjemiske undersøkelser for lokalisering av ATP og andre assosierte nevroimmune biomarkører av interesse.

(iii) Bronkoalveolær skylling: Bronkoalveolære skyllingsceller vil bli plassert i cytospin for telling av differensialceller. Noen av cellene vil bli holdt i RNAlater for RNAseq. Supernatanten BAL-væske vil bli oppbevart for senere analyse av nevroimmune markører inkludert ATP.