ATP en P2X3-receptor bij chronische hoest

Dit zijn de doelstellingen van deze studie:

1. Bepaal of ATP aanwezig is of vrijkomt in de luchtwegen van patiënten met idiopathische chronische hoest
2. Bepaal of er een toename is in hoestgevoeligheid en larynxgevoeligheid voor exogene ATP
3. Onderzoek de effecten van exogeen ATP op de ontstekingsreactie in de bovenste en onderste luchtwegen.

Uitkomstmaatregelen

Dit zijn allemaal primaire uitkomstmaten van deze studie:

1. Aanwezigheid van ATP in de luchtwegen van idiopathische chronische hoestpatiënten en de lokalisatie van P2X2/3-receptoren in de luchtwegen
2. Hoestgevoeligheid en larynxgevoeligheid voor exogeen ATP
3. Ontstekingsreactie in de bovenste en onderste luchtwegen op exogene ATP.

Studieontwerp Toestemming zal voorafgaand aan de screening worden verkregen. Screening: Deelnemers worden gescreend voorafgaand aan deelname aan Studies. Normale niet-hoestende patiënten zullen worden gevraagd of ze een voorgeschiedenis van hoesten hebben en dat ze gedurende 8 weken of langer geen chronische hoest hadden mogen hebben. Die deelnemers met chronische hoest moeten voldoen aan de definitie van een chronische hoest die langer dan 8 weken heeft geduurd. Deze deelnemers zullen worden gerekruteerd uit de hoestkliniek van het Royal Brompton Hospital. We zullen de onderstaande in- en uitsluitingscriteria gebruiken met betrekking tot de bevestiging van geschiktheid.

Studie 1 en 2 Deelnemers zullen in totaal 3 maanden aan dit onderzoeksproject deelnemen.

Deze studie bestaat uit twee delen die mogelijk niet chronologisch zijn:

Studie 1. Na werving zullen proefpersonen aanwezig zijn voor een fiberoptische bronchoscopie.

Studie 2: proefpersonen nemen deel aan een studie naar het effect van het inademen van vernevelde ATP. Onderwerpen worden bestudeerd op 2 dagen gescheiden door ten minste 5 dagen. Elke dag, na metingen van de longfunctie, FeNO en hoestvragenlijsten, inhaleert de proefpersoon zoutoplossing of ATP-oplossing uit een vernevelaar, waarna laryngeale overgevoeligheid, capsaïcine-hoestprikkeling en sputuminductie worden uitgevoerd. De volgorde van de ATP- of zoutoplossing-provocatie zal willekeurig zijn en de toediening van een van beide zal blind zijn voor de patiënten en onderzoekers die de respons op de provocatie meten.

Onderwerp populatie:

Dit zal een onderzoek op één locatie zijn. De onderzoekers zullen 12 patiënten met chronische hoest rekruteren voor onze hoestkliniek in het Royal Brompton Hospital en 8 gezonde controlepersonen (leeftijd en geslacht komen overeen).

De deelnemers van beide geslachten met idiopathische chronische hoest zullen worden bestudeerd en moeten een chronische hoest hebben gehad van ten minste 8 weken, en moeten gedurende ten minste 6 maanden in de hoestkliniek zijn gevolgd. Deze deelnemers hebben een protocol ondergaan met een diagnostisch traject zoals aanbevolen door de richtlijnen van de European Respiratory Society voor de behandeling van hoest. Deelnemers zouden ofwel een identificeerbare oorzaak voor hun hoest hebben die therapieën die gericht zijn op de geïdentificeerde oorzaak hebben gefaald, of geclassificeerd zijn als chronische idiopathische hoest waarbij geen identificeerbare oorzaak is gevonden.

De niet-hoestende controlepersonen zullen worden geworven via advertenties in het ziekenhuis en lokale kranten.

Onderzoek Interventie en procedures Glasvezelbronchoscopie Bronchoscopie is een standaard diagnostische procedure en wordt uitgevoerd door een ervaren arts van het onderzoeksteam.

De glasvezelbronchoscoop wordt door de neusgangen of de orofarynx geleid voordat hij in de luchtpijp gaat. De neusgangen zijn de voorkeursroute, maar als dit niet via de neusgangen kan, wordt de orofarynx gebruikt. Bronchoalveolaire lavage (BAL) wordt uitgevoerd vanuit de rechter middenkwab met behulp van verwarmde 0,9% zoutoplossing met 4 opeenvolgende aliquots van 60 ml. De bronchoscopist zal dan monsters nemen van de cellen langs de luchtwegen met behulp van een borstel en een pincet, waarmee kleine stukjes weefsel kunnen worden verkregen.

Na de procedure wordt de deelnemer verplaatst van de procedurekamer naar de verkoeverkamer, waar hij/zij wordt gecontroleerd door verplegend personeel. In geval van bronchoconstrictie zal hij/zij worden behandeld met vernevelde salbutamol, en indien nodig zal corticosteroïdtherapie worden gegeven. Zodra hij/zij stabiel is, geen zuurstof meer nodig heeft en niet langer slaperig is, zal hij/zij worden ontslagen na beoordeling door de onderzoeksartsen. De arts kan echter bepalen dat u onder observatie moet worden gehouden totdat u fit genoeg bent om naar huis te gaan. Elke patiënt die tijdens de procedure midazolam krijgt, zal worden gevraagd om die dag door een verantwoordelijke volwassene naar huis te worden begeleid.

Voorafgaand aan de procedure wordt plaatselijke verdoving gebruikt en deelnemers kunnen een gevoelloze mond of keel ervaren. Bij sommige patiënten zal, indien dit veilig is, een anxiolyticum (midazolam) in kleine doses via de canule worden toegediend. Dit wordt meestal probleemloos getolereerd.

Na de procedure kunnen deelnemers keelpijn, schorre stem of hoesten ervaren door irritatie van de luchtwegen, maar dit gaat meestal binnen een paar uur over. Andere symptomen kunnen de verhoogde productie van sputum zijn, soms met bloedstrepen van het slijm en voorbijgaande koorts die enkele uren na de procedure kan optreden. Dit gaat meestal binnen een paar uur over en kan verholpen worden door paracetamol in te nemen. Er mogen geen langdurige gevolgen zijn.

Ernstige risico's zijn zeldzaam, maar omvatten een pneumothorax (1 op de 2000 gevallen) en significante bloedingen. Deelnemers zullen nauwlettend worden gevolgd na de procedure en als zich een ernstige complicatie voordoet, krijgen ze de juiste behandeling in het ziekenhuis.

Verzameling van uitgeademd condensaat (EBC). EBC wordt verzameld door de proefpersoon te vragen normaal te ademen op een handapparaat voor het verzamelen van adem van Respire Diagnostics, Imperial College, dat de uitgeademde adem zal koelen om condensatie van de uitgeademde lucht mogelijk te maken. De proefpersoon ademt gedurende 2 perioden van elk 5 minuten, gescheiden door een rustperiode van 3-4 minuten om het verzamelen van maximaal 500 microliter (uL) vloeistof mogelijk te maken. De vloeistof wordt bewaard voor latere analyse.

Bloedafname Veneus bloed (30 cc) wordt afgenomen uit een ader in de onderarm. Deze test veroorzaakt tijdelijk ongemak omdat een naald wordt gebruikt om het bloedmonster te verkrijgen. Het bloedmonster zal worden gebruikt voor het meten van verschillende eiwitten en voor het verkrijgen van witte bloedcellen om bepaalde soorten stamcellen te verkrijgen.

Continu laryngoscopieonderzoek Continu laryngoscopieonderzoek wordt uitgevoerd op basis van eerdere methodologie. Continue laryngoscopietesten worden uitgevoerd door een vezeloptische nasendoscoop in de posterieure nasopharynx te plaatsen en vast te zetten met een speciale hoofdband. Een kleine hoeveelheid glijmiddel wordt gebruikt om de doorgang van de scoop te vergemakkelijken. Videobeelden van de larynxinlaat worden daarna continu opgenomen terwijl een proefpersoon verschillende manoeuvres uitvoert, waaronder ademhalingsbewegingen en hoesten. Deze bewegingen worden geobserveerd en geregistreerd voor en na de verschillende aspecten van het provocatieprotocol en stellen ons zo in staat afwijkingen in de laryngeale beweging en bijvoorbeeld de positie van de stemplooien te evalueren. De grootte en verandering in grootte van de glottisopening zal worden geëvalueerd.

Capsaïcine hoestprikkel Capsaïcineprikkeling wordt uitgevoerd zoals vastgesteld in ons laboratorium.

De Leicester-hoestvragenlijst. Dit zal worden gebruikt om de impact van chronische hoest op de levenskwaliteit van de patiënt te beoordelen.

Meting hoestfrequentie De hoestfrequentie wordt gedurende 48 uur objectief gemeten met een Hyfe hoestregistratiemonitor.

Alle ingeschreven studiedeelnemers krijgen een speciale Android-telefoon of -horloge waarop de Hyfe Research-applicatie is geladen om hun hoestgeluiden te monitoren en op te nemen.

De hoestregistratie omvat 5 gevraagde hoestbuien op het moment van inschrijving voor de studie voor kalibratie. Studiepersoneel zal de mogelijkheid hebben om op afstand de toename van hoesten voor elke deelnemer in realtime te volgen met het Hyfe Research Platform Dashboard - en zo indien nodig te verifiëren dat de telefoons aan staan ​​en naar behoren werken.

Na voltooiing van de studie haalt een getrainde onderzoeksmedewerker de telefoons op en zorgt ervoor dat de gegevens automatisch naar de Hyfe-server zijn geüpload.

Beoordeling van de larynxfunctie door middel van een vragenlijst We zullen de Laryngeal Hypersensitivity Questionnaire gebruiken om de larynxdisfunctie te beoordelen.

Inductie van sputum Sputum wordt geïnduceerd door inademing van een aërosol met steriele 3% zoutoplossing en vervolgens te verhogen tot 4% en 5% gedurende 3 perioden van elk 5 minuten. Sputummonsters worden verzameld in steriele potten.

Sputumproppen worden geselecteerd en één portie wordt gebruikt om differentiële celtellingen uit te voeren. Om differentiële celtellingen uit te voeren, wordt dithiothreitol toegevoegd aan de sputumprop en krachtig gemengd op een plaatschudder om het sputum op te lossen. Cytospins worden vervolgens bereid en differentiële celtellingen worden verkregen.

Bovendien zullen sommige cellen later in RNA worden geplaatst voor RNAseq-analyse. Het supernatant zal worden bewaard voor latere assay van neuroimmune biomarkers.

Spirometrische metingen Spirometrie (FEV1 en geforceerde vitale capaciteit, FVC) wordt gemeten met behulp van een droge wig spirometer (Vitalograph, Buckinghamshire, UK).

Fractionele uitgeademde stikstofmonoxide (FeNO) Het fractionele niveau van uitgeademde stikstofmonoxide (FeNO) wordt gemeten met een draagbare FeNO-monitor (NObreath; Bedfont Scientific Ltd, Rochester, VK) bij een constante expiratoire stroom van 0,05 l/s.

Specimens van bronchoscopie (i) Bronchiale poetsbeurten: (a) objectglaasjes met aangehechte cellen worden verkregen en bewaard voor latere immunohistochemische analyse (b) cellen worden later in RNA geplaatst voor latere extractie voor RNAseq-analyse (c) cellen worden in cultuur gebracht .

(ii) Bronchiale biopsieën: secties van vijf μm zullen worden gesneden en gekleurd met hematoxyline en eosine om de morfologie te beoordelen. Onderzoekers zullen de mate van ontsteking en hermodellering in deze biopsieën meten, zoals eerder beschreven. Bovendien zullen deze secties worden gebruikt voor een reeks immunohistochemische onderzoeken voor de lokalisatie van ATP en andere geassocieerde neuro-immune biomarkers die van belang zijn.

(iii) Bronchoalveolaire lavage: Bronchoalveolaire lavagecellen zullen in cytospin worden geplaatst voor het tellen van differentiële cellen. Sommige cellen worden later in RNA bewaard voor RNAseq. De bovenstaande BAL-vloeistof wordt bewaard voor latere assay van neuro-immuunmarkers, waaronder ATP.