만성 기침의 ATP 및 P2X3 수용체

이 연구의 목적은 다음과 같습니다.

1. 특발성 만성 기침 환자의 기도에서 ATP가 존재하는지 또는 방출되는지 확인
2. 외인성 ATP에 대한 기침 감도 및 후두 감도의 증가 여부를 확인합니다.
3. 상부 및 하부 기도의 염증 반응에 대한 외인성 ATP의 효과를 조사합니다.

결과 측정

다음은 이 연구의 모든 주요 결과 측정입니다.

1. 특발성 만성 기침 환자의 기도 내 ATP 존재 및 기도 내 P2X2/3 수용체의 국소화
2. 외인성 ATP에 대한 기침 감도 및 후두 감도
3. 외인성 ATP에 대한 상부 및 하부 기도의 염증 반응.

연구 설계 동의는 스크리닝 전에 얻을 것입니다. 선별: 참가자는 연구에 참여하기 전에 선별됩니다. 기침을 하지 않는 정상적인 환자는 기침 병력이 있고 8주 이상 만성 기침이 없어야 하는지 질문을 받게 됩니다. 만성 기침이 있는 참가자는 8주 이상 지속된 만성 기침의 정의를 충족해야 합니다. 이 참가자는 Royal Brompton Hospital 기침 클리닉에서 모집합니다. 자격 확인과 관련하여 아래에 명시된 포함 및 제외 기준을 사용합니다.

연구 1 및 2 참가자는 총 3개월 동안 이 연구 프로젝트에 참여하게 됩니다.

이 연구는 순서대로 연대순이 아닐 수 있는 두 부분으로 구성됩니다.

연구 1. 모집 후 피험자는 광섬유 기관지경 검사를 위해 참석할 것입니다.

연구 2: 피험자는 분무화된 ATP를 흡입하는 효과에 대한 연구에 참여할 것입니다. 피험자는 최소 5일 간격으로 2일 동안 공부합니다. 매일 폐 기능, FeNO 및 기침 설문지를 측정한 후 피험자는 분무기에서 식염수 또는 ATP 용액을 흡입한 후 후두 과민증, 캡사이신 기침 챌린지 및 객담 유도를 수행합니다. ATP 또는 식염수 챌린지의 순서는 무작위로 지정되며 둘 중 하나의 투여는 챌린지에 대한 반응을 측정하는 환자 및 조사자에게 눈이 멀게 됩니다.

피험자 모집단:

이것은 단일 사이트 연구가 될 것입니다. 조사관은 Royal Brompton 병원의 기침 클리닉에 참석하는 만성 기침 환자 12명과 건강한 피험자 8명(연령 및 성별 일치)을 모집할 것입니다.

특발성 만성 기침이 있는 성별의 참가자가 연구되고 최소 8주 동안 지속되는 만성 기침이 있어야 하며 기침 클리닉에서 최소 6개월 동안 추적 관찰되어야 합니다. 이 참가자들은 기침 관리를 위한 유럽 호흡기 학회 지침에서 권장하는 진단 경로가 포함된 프로토콜을 거쳤을 것입니다. 참가자는 식별 가능한 원인을 대상으로 한 치료에 실패한 기침의 식별 가능한 원인이 있거나 식별 가능한 원인이 발견되지 않은 만성 특발성 기침으로 분류됩니다.

대조군 비기침 피험자는 병원 내 광고 및 지역 신문 서비스를 통해 모집됩니다.

연구 개입 및 절차 Fiberoptic bronchoscopy Bronchoscopy는 표준 진단 절차이며 경험이 풍부한 연구팀의 의사가 수행합니다.

광섬유 기관지경은 기관으로 들어가기 전에 비강이나 구인두를 통과합니다. 비강이 우선 경로가 되지만, 비강을 통해 할 수 없는 경우 구인두가 사용됩니다. 기관지 폐포 세척(BAL)은 60ml의 4회 연속 분취량과 함께 따뜻한 0.9% 식염수를 사용하여 우측 중엽에서 수행됩니다. 그런 다음 기관지경 검사의는 브러시와 집게를 사용하여 기도를 감싸고 있는 세포 샘플을 채취하고 집게를 사용하여 작은 조직 조각을 얻을 수 있습니다.

시술 후 참가자는 시술실에서 회복실로 이동하여 간호 직원의 모니터링을 받게 됩니다. 기관지 수축이 있는 경우 분무식 살부타몰을 투여하고 필요한 경우 코르티코스테로이드 요법을 시행합니다. 안정되고 더 이상 산소가 필요하지 않고 더 이상 졸리지 않으면 연구 의사의 검토 후 퇴원합니다. 그러나 의사는 퇴원하기에 적합할 때까지 환자를 관찰해야 한다고 결정할 수 있습니다. 절차 중에 미다졸람을 투여한 모든 환자는 그날 집에 동행할 책임 있는 성인이 있어야 합니다.

절차 전에 국소 마취제가 사용되며 참가자는 입이나 목이 마비될 수 있습니다. 일부 환자의 경우 안전하다면 캐뉼라를 통해 항불안제(미다졸람)를 소량 투여합니다. 이것은 일반적으로 문제 없이 허용됩니다.

절차 후 참가자는 기도 자극으로 인해 인후통, 쉰 목소리 또는 기침을 경험할 수 있지만 일반적으로 몇 시간 내에 해결됩니다. 다른 증상으로는 가래 생성 증가, 때때로 점액의 혈액 줄무늬, 시술 후 몇 시간 후에 발생할 수 있는 일시적인 열이 포함될 수 있습니다. 이것은 보통 몇 시간 내에 해결되며 파라세타몰을 복용하면 도움이 될 수 있습니다. 오래 지속되는 후유증이 없어야 합니다.

심각한 위험은 드물지만 기흉(2000건 중 1건)과 상당한 출혈이 있습니다. 참가자는 시술 후 면밀히 모니터링되며 심각한 합병증이 발생하면 병원에서 적절한 치료를 받게 됩니다.

날숨 응축수(EBC) 수집. EBC는 내쉬는 공기의 응결을 허용하기 위해 내쉬는 숨을 식힐 임페리얼 칼리지의 Respire Diagnostics의 휴대용 호흡 수집 장치에서 정상적으로 호흡하도록 피험자에게 요청하여 수집됩니다. 대상자는 최대 500마이크로리터(uL)의 액체를 수집할 수 있도록 각각 3-4분의 휴식으로 분리된 5분씩 2주기 동안 호흡합니다. 액체는 추후 분석을 위해 저장됩니다.

혈액 샘플 수집 정맥혈(30cc)은 팔뚝의 정맥에서 채취합니다. 이 검사는 바늘을 사용하여 혈액 샘플을 채취하기 때문에 일시적인 불편함을 유발합니다. 혈액 샘플은 다양한 단백질을 측정하고 일부 유형의 줄기 세포를 얻기 위해 백혈구를 얻는 데 사용됩니다.

지속적인 후두경 검사 지속적인 후두경 검사는 이전 방법론에 따라 수행됩니다. 연속 후두경 검사는 광섬유 비강경을 비인두 후방에 배치하고 전문 헤드기어를 사용하여 고정함으로써 수행됩니다. 소량의 윤활 젤리를 사용하여 스코프 통과를 용이하게 합니다. 후두 입구의 비디오 이미지는 그 후 피험자가 호흡 운동 및 기침을 포함한 다양한 기동을 수행하는 동안 지속적으로 기록됩니다. 이러한 움직임은 챌린지 프로토콜의 다양한 측면 전후에 관찰되고 기록되며, 따라서 후두 운동 이상 및 예를 들어 성대의 위치를 ​​평가할 수 있습니다. 성문 구멍의 크기와 크기 변화를 평가합니다.

캡사이신 기침 챌린지 캡사이신 챌린지는 우리 실험실에서 확립된 대로 수행됩니다.

레스터 기침 설문지. 이것은 만성 기침이 환자의 삶의 질에 미치는 영향을 평가하는 데 사용될 것입니다.

기침 빈도 측정 기침 빈도는 48시간 동안 Hyfe 기침 기록 모니터로 객관적으로 측정됩니다.

등록된 모든 연구 참가자에게는 기침 소리를 모니터링하고 녹음할 수 있는 Hyfe Research 애플리케이션이 로드된 전용 Android 휴대폰 또는 시계가 제공됩니다.

기침 기록에는 보정을 위해 연구 등록 시 5개의 요청된 기침이 포함됩니다. 연구 담당자는 Hyfe 연구 플랫폼 대시보드를 사용하여 실시간으로 각 참가자의 기침 발생을 원격으로 모니터링할 수 있으므로 필요에 따라 전화가 켜져 있고 적절하게 작동하는지 확인할 수 있습니다.

연구가 완료되면 숙련된 연구 직원이 전화를 회수하고 데이터가 Hyfe 서버에 자동으로 업로드되었는지 확인합니다.

설문지에 의한 후두 기능의 평가 우리는 후두 기능 장애를 평가하기 위해 후두 과민성 설문지를 사용할 것입니다.

가래 유도 가래는 멸균된 3% 식염수 에어로졸을 흡입하여 유발한 다음 각각 5분씩 3시간 동안 4% 및 5%로 증가합니다. 객담 샘플은 멸균 포트에 수집됩니다.

가래 마개를 선택하고 한 부분을 사용하여 감별 세포 수를 계산합니다. 감별 세포 계수를 수행하기 위해 디티오트레이톨을 가래 마개에 추가하고 플레이트 셰이커에서 격렬하게 혼합하여 가래를 용해시킵니다. 그런 다음 Cytospins를 준비하고 차등 세포 수를 얻습니다.

또한 일부 세포는 나중에 RNAseq 분석을 위해 RNA에 배치됩니다. 상청액은 신경면역 바이오마커의 차후 분석을 위해 보관됩니다.

폐활량계 측정 폐활량계(FEV1 및 강제 폐활량, FVC)는 건식 웨지 폐활량계(Vitalograph, Buckinghamshire, UK)를 사용하여 측정됩니다.

부분 호기 산화질소(FeNO) 부분 호기 산화질소(FeNO) 수준은 0.05 L/s의 일정한 호기 유량에서 휴대용 FeNO 모니터(NObreath; Bedfont Scientific Ltd, Rochester, UK)를 사용하여 측정됩니다.

기관지경 검사의 표본 (i) 기관지 칫솔질: (a) 부착된 세포가 있는 슬라이드를 획득하고 이후의 면역조직화학적 분석을 위해 보존합니다. (b) 세포는 나중에 RNAseq 분석을 위해 추출하기 위해 RNA에 배치됩니다. (c) 세포는 배양에 배치됩니다. .

(ii) 기관지 생검: 형태를 평가하기 위해 5μm 절편을 절단하고 헤마톡실린과 에오신으로 염색합니다. 조사관은 이전에 설명한 대로 이러한 생검에서 염증 및 리모델링의 정도를 측정합니다. 또한, 이 섹션은 ATP 및 관심 있는 기타 관련 신경 면역 바이오마커의 국소화를 위한 일련의 면역 조직 화학 조사에 사용됩니다.

(iii) 기관지폐포 세척: 기관지폐포 세척 세포는 감별 세포 계수를 위해 사이토스핀에 배치됩니다. 일부 세포는 RNAseq용 RNAlater에 보관됩니다. 상청액 BAL 유체는 ATP를 포함한 신경 면역 마커의 차후 분석을 위해 보관됩니다.