ATP- og P2X3-receptor ved kronisk hoste

Disse er formålene med denne undersøgelse:

1. Bestem, om ATP er til stede eller frigivet i luftvejene hos patienter med idiopatisk kronisk hoste
2. Bestem, om der er en stigning i hostefølsomhed og larynxfølsomhed over for eksogen ATP
3. Undersøg virkningerne af eksogen ATP på det inflammatoriske respons i de øvre og nedre luftveje.

Resultatmål

Disse er alle primære resultatmål for denne undersøgelse:

1. Tilstedeværelse af ATP i luftvejene hos patienter med idiopatisk kronisk hoste og lokalisering af P2X2/3-receptorer i luftvejene
2. Hostefølsomhed og larynxfølsomhed over for eksogen ATP
3. Inflammatorisk respons i de øvre og nedre luftveje på eksogen ATP.

Samtykke til undersøgelsesdesign vil blive indhentet før screening. Screening: Deltagerne vil blive screenet forud for engagement i undersøgelser. Normale ikke-hostende patienter vil blive spurgt, om de har en historie med hoste, og de skulle ikke have haft kronisk hoste i 8 uger eller mere. De deltagere med kronisk hoste skal opfylde definitionen på, at en kronisk hoste har varet i mere end 8 uger. Disse deltagere vil blive rekrutteret fra Royal Brompton Hospitals hosteklinik. Vi vil bruge inklusions- og eksklusionskriterierne, der er angivet nedenfor, med hensyn til berettigelsesbekræftelse.

Studie 1 og 2 Deltagerne vil være i dette forskningsprojekt i i alt 3 måneder.

Denne undersøgelse vil være i to dele, som muligvis ikke er kronologisk i rækkefølge:

Studie 1. Efter rekruttering vil forsøgspersoner deltage i en fiberoptisk bronkoskopi.

Undersøgelse 2: Forsøgspersonerne vil deltage i en undersøgelse af effekten af ​​at inhalere forstøvet ATP. Emner vil blive undersøgt på 2 dage adskilt af mindst 5 dage. På hver dag, efter målinger af lungefunktion, FeNO og hostespørgeskemaer, vil forsøgspersonen inhalere enten saltvand eller ATP-opløsning fra en forstøver, hvorefter larynxoverfølsomhed, capsaicin-hosteudfordring og sputuminduktion vil blive udført. Rækkefølgen af ​​ATP- eller saltvandsudfordringen vil blive randomiseret, og administrationen af ​​begge vil blive blindet for patienterne og efterforskerne, der måler responsen på udfordringen.

Emnepopulation:

Dette vil være et enkelt stedstudie. Efterforskerne vil rekruttere 12 patienter med kronisk hoste, der går på vores hosteklinik på Royal Brompton Hospital og 8 raske kontrolpersoner (alder og køn matchet).

Deltagerne af begge køn med idiopatisk kronisk hoste vil blive undersøgt og skulle have haft en kronisk hoste af mindst 8 ugers varighed og skulle have været fulgt i Hosteklinikken i mindst 6 måneder. Disse deltagere vil have gennemgået en protokol med en diagnostisk vej som anbefalet af European Respiratory Societys retningslinjer for behandling af hoste. Deltagerne vil enten have en identificerbar årsag til deres hoste, som har mislykket behandlinger rettet mod den identificerede årsag eller klassificeret som kronisk idiopatisk hoste, hvor der ikke er fundet nogen identificerbar årsag.

De kontrolpersoner, der ikke hoster, vil blive rekrutteret gennem annoncering på hospitalet og lokale aviser.

Forskningsintervention og procedurer Fiberoptisk bronkoskopi Bronkoskopi er en standard diagnostisk procedure og vil blive udført af en erfaren læge fra forskerholdet.

Det fiberoptiske bronkoskop vil blive ført gennem enten næsepassagerne eller oropharynx, før det passerer ind i luftrøret. Næsepassagerne vil være den foretrukne vej, men i tilfælde af at dette ikke kan gøres gennem næsepassagerne, vil oropharynx blive brugt. Bronchoalveolær udskylning (BAL) vil blive udført fra højre midterlap ved hjælp af opvarmet 0,9 % saltvand med 4 på hinanden følgende alikvoter på 60 ml. Bronkoskopisten vil derefter tage prøver af cellerne i luftvejene ved hjælp af en børste og pincet, hvor sidstnævnte gør det muligt at få små stykker væv.

Efter proceduren vil deltageren blive flyttet fra procedurerummet til opvågningsområdet, hvor han/hun vil blive overvåget af plejepersonale. I tilfælde af en bronkokonstriktion vil han/hun blive behandlet med forstøvet salbutamol, og om nødvendigt vil der blive givet kortikosteroidbehandling. Når han/hun er stabil og ikke længere kræver ilt og ikke længere er døsig, vil han/hun blive udskrevet efter gennemgang af forskningslægerne. Lægen kan dog bestemme, at du skal holdes under observation, indtil du er i stand til at blive udskrevet til hjemmet. Enhver patient, der får midazolam under proceduren, vil blive bedt om at have en ansvarlig voksen til at ledsage dem hjem den dag.

Lokalbedøvelse anvendes forud for proceduren, og deltagerne kan opleve følelsesløs mund eller hals. Hos nogle patienter, hvis det er sikkert at gøre det, vil et anxiolytisk lægemiddel (midazolam) blive givet i små doser gennem kanylen. Dette tolereres normalt uden problemer.

Efter indgrebet kan deltagerne opleve ondt i halsen, hæs stemme eller hoste på grund af irritation af luftvejene, men dette lægger sig normalt inden for et par timer. Andre symptomer kan omfatte øget produktion af sputum, nogle gange med blodstriber af slim og en forbigående feber, som kan opstå efter et par timer efter indgrebet. Dette sætter sig normalt inden for et par timer og kan afhjælpes ved at tage paracetamol. Der bør ikke være langvarige følgesygdomme.

Alvorlige risici er sjældne, men omfatter en pneumothorax (1 ud af 2000 tilfælde) og betydelig blødning. Deltagerne vil blive nøje overvåget efter proceduren, og skulle der opstå alvorlige komplikationer, vil de få den passende behandling på hospitalet.

Udåndet ånde kondensat (EBC) opsamling. EBC vil blive indsamlet ved at bede forsøgspersonen om at trække vejret normalt på et håndholdt åndedrætsopsamlingsapparat fra Respire Diagnostics, Imperial College, som vil afkøle det udåndede ånde for at tillade kondensering af udåndingsluften. Forsøgspersonen vil trække vejret i 2 perioder á 5 minutter hver adskilt af en 3-4 minutters pause for at tillade opsamling af op til 500 mikroliter (uL) væske. Væsken vil blive opbevaret til senere analyse.

Blodprøvetagning Venøst ​​blod (30 cc) vil blive taget fra en vene i underarmen. Denne test forårsager et forbigående ubehag, da en nål bruges til at tage blodprøven. Blodprøven vil blive brugt til at måle forskellige proteiner og til at få hvide blodlegemer til at få nogle typer stamceller.

Kontinuerlig laryngoskopisk undersøgelse Kontinuerlig laryngoskopi-testning udføres baseret på tidligere metodik. Kontinuerlig laryngoskopi-testning udføres ved at placere et fiberoptisk nasendoskop i den bageste nasopharynx og fastgøre det ved hjælp af specialhovedbeklædning. En lille mængde smøregelé bruges til at lette passagen af ​​kikkerten. Videobilleder af larynxindløbet optages derefter kontinuerligt, mens en person udfører forskellige manøvrer, herunder åndedrætsbevægelser og hoste. Disse bevægelser vil blive observeret og registreret før og efter de forskellige aspekter af udfordringsprotokollen og giver os således mulighed for at evaluere larynxbevægelsesabnormiteter og for eksempel stemmelæbernes position. Størrelsen og ændringen i størrelsen af ​​den glottiske blænde vil blive evalueret.

Capsaicin hosteudfordring Capsaicin udfordring udføres som etableret i vores laboratorium.

Leicester-hostespørgeskemaet. Dette vil blive brugt til at vurdere indvirkningen af ​​kronisk hoste på patienternes livskvalitet.

Måling af hostefrekvens Hostefrekvens vil blive målt objektivt med en Hyfe hostemonitor i 48 timer.

Alle tilmeldte undersøgelsesdeltagere vil blive udstyret med en dedikeret Android-telefon eller et ur fyldt med Hyfe Research-applikationen til at overvåge og optage deres hostelyde.

Hosteregistrering vil omfatte 5 opfordrede hoste på tidspunktet for studietilmelding til kalibrering. Undersøgelsespersonale vil have mulighed for at fjernovervåge ophobningen af ​​hoste for hver deltager i realtid med Hyfe Research Platform Dashboard - og dermed efter behov verificere, at telefonerne er tændt og fungerer korrekt.

Når studiet er afsluttet, vil en uddannet studiemedarbejder hente telefonerne og sikre, at data automatisk er blevet uploadet til Hyfe-serveren.

Vurdering af larynxfunktion ved spørgeskema Vi vil bruge Laryngeal Hypersensitivity Questionnaire til vurdering af larynxdysfunktion.

Induktion af sputum Sputum induceres ved inhalation af en aerosol af steril 3 % saltvandsopløsning og øges efterfølgende til 4 % og 5 % i løbet af 3 perioder af 5 minutter hver. Sputumprøver opsamles i sterile potter.

Sputumpropper vælges, og en del bruges til at udføre differentielle celletællinger. For at udføre differentielle celletællinger tilsættes dithiothreitol til sputumproppen og blandes kraftigt på en pladeryster for at opløse sputumet. Cytospins fremstilles derefter, og differentielle celletællinger opnås.

Derudover vil nogle af cellerne blive placeret i RNA senere til RNAseq-analyse. Supernatanten vil blive opbevaret til senere analyse af neuroimmune biomarkører.

Spirometriske målinger Spirometri (FEV1 og forceret vital kapacitet, FVC) måles ved hjælp af et dry wedge spirometer (Vitalograph, Buckinghamshire, UK).

Fraktioneret udåndet nitrogenoxid (FeNO) Niveauet af fraktioneret udåndet nitrogenoxid (FeNO) måles ved hjælp af en bærbar FeNO-monitor (NObreath; Bedfont Scientific Ltd, Rochester, UK) ved en konstant udåndingsstrøm på 0,05 l/s.

Prøver fra bronkoskopi (i) Bronkialbørstning: (a) objektglas med fastgjorte celler vil blive opnået og bevaret til senere immunhistokemisk analyse (b) celler vil blive placeret i RNA senere til senere ekstraktion til RNAseq-analyse (c) celler vil blive placeret i kultur .

(ii) Bronchiale biopsier: Fem μm sektioner vil blive skåret og farvet med hæmatoxylin og eosin for at vurdere morfologi. Efterforskere vil måle omfanget af inflammation og ombygning i disse biopsier som tidligere beskrevet. Derudover vil disse sektioner blive brugt til en række immunhistokemiske undersøgelser til lokalisering af ATP og andre associerede neuroimmune biomarkører af interesse.

(iii) Bronchoalveolær skylning: Bronchoalveolære skylleceller vil blive placeret i cytospin til tælling af differentialceller. Nogle af cellerne vil blive holdt i RNAlater for RNAseq. Supernatanten BAL-væske vil blive opbevaret til senere analyse af neuroimmune markører inklusive ATP.