ATP e Receptor P2X3 na Tosse Crônica

Estes são os objetivos deste estudo:

1. Determinar se o ATP está presente ou liberado nas vias aéreas de pacientes com tosse crônica idiopática
2. Determinar se há um aumento na sensibilidade da tosse e sensibilidade laríngea ao ATP exógeno
3. Examine os efeitos do ATP exógeno na resposta inflamatória nas vias aéreas superiores e inferiores.

Medidas de resultado

Estas são todas as medidas de resultados primários deste estudo:

1. Presença de ATP nas vias aéreas de pacientes com tosse crônica idiopática e a localização de receptores P2X2/3 nas vias aéreas
2. Sensibilidade à tosse e sensibilidade laríngea ao ATP exógeno
3. Resposta inflamatória nas vias aéreas superiores e inferiores ao ATP exógeno.

O consentimento do desenho do estudo será obtido antes da triagem. Triagem: Os participantes serão selecionados antes do engajamento nos Estudos. Os pacientes normais sem tosse serão questionados se têm histórico de tosse e se não deveriam ter tosse crônica por 8 semanas ou mais. Os participantes com tosse crônica precisam satisfazer a definição de tosse crônica com duração superior a 8 semanas. Esses participantes serão recrutados na clínica de tosse do Royal Brompton Hospital. Usaremos os critérios de inclusão e exclusão descritos abaixo em relação à confirmação de elegibilidade.

Estudo 1 e 2 Os participantes estarão neste projeto de pesquisa por um total de 3 meses.

Este estudo será dividido em duas partes que podem não estar em ordem cronológica:

Estudo 1. Após o recrutamento, os indivíduos comparecerão para uma broncoscopia de fibra óptica.

Estudo 2: Os participantes participarão de um estudo sobre o efeito da inalação de ATP nebulizado. Os assuntos serão estudados em 2 dias separados por pelo menos 5 dias. Em cada dia, após medições da função pulmonar, FeNO e questionários de tosse, o sujeito irá inalar solução salina ou ATP de um nebulizador, após o que será realizada hipersensibilidade laríngea, provocação de tosse com capsaicina e indução de escarro. A ordem do desafio de ATP ou solução salina será randomizada e a administração de qualquer um será cega para os pacientes e investigadores que medem a resposta ao desafio.

População sujeita:

Este será um estudo de local único. Os investigadores recrutarão 12 pacientes com tosse crônica atendidos em nossa Clínica de Tosse no Royal Brompton Hospital e 8 indivíduos saudáveis ​​de controle (idade e sexo correspondentes).

Os participantes de ambos os sexos com tosse crônica idiopática serão estudados e deveriam ter tosse crônica de pelo menos 8 semanas de duração e deveriam ter sido acompanhados na Clínica da Tosse por pelo menos 6 meses. Esses participantes serão submetidos a um protocolo com uma via de diagnóstico conforme recomendado pelas diretrizes da European Respiratory Society para o manejo da tosse. Os participantes teriam uma causa identificável para a tosse que falhou nas terapias direcionadas para a causa identificada ou classificados como tendo tosse idiopática crônica onde nenhuma causa identificável foi encontrada.

Os indivíduos de controle sem tosse serão recrutados por meio de anúncios no hospital e nos serviços de jornais locais.

Intervenção e procedimentos de pesquisa Broncoscopia de fibra óptica A broncoscopia é um procedimento de diagnóstico padrão e será realizada por um médico experiente da equipe de pesquisa.

O broncoscópio de fibra óptica será passado pelas passagens nasais ou pela orofaringe antes de passar para a traquéia. As fossas nasais serão a via preferencial, mas caso não seja possível fazê-lo pelas fossas nasais, será utilizada a orofaringe. O lavado broncoalveolar (LBA) será realizado a partir do lobo médio direito utilizando soro fisiológico 0,9% aquecido com 4 alíquotas sucessivas de 60ml. O broncoscopista coletará amostras das células que revestem as vias aéreas usando uma escova e uma pinça, permitindo a obtenção de pequenos pedaços de tecido.

Após o procedimento, o participante será transferido da sala de procedimentos para a área de recuperação, onde será acompanhado pela equipe de enfermagem. Em caso de broncoconstrição, ele será tratado com salbutamol nebulizado e, se necessário, corticoterapia. Uma vez estável, não necessitando mais de oxigênio e não mais sonolento, ele/ela receberá alta após revisão pelos médicos da pesquisa. O médico pode, no entanto, determinar que você precisa ser mantido em observação até estar apto para receber alta. Qualquer paciente que receber midazolam durante o procedimento será solicitado a ter um adulto responsável para acompanhá-lo em casa naquele dia.

Anestésico local é usado antes do procedimento e os participantes podem sentir boca ou garganta dormentes. Em alguns pacientes, se for seguro, um ansiolítico (midazolam) será administrado em pequenas doses através da cânula. Isso geralmente é tolerado sem problemas.

Após o procedimento, os participantes podem sentir dor de garganta, voz rouca ou tosse devido à irritação das vias aéreas, mas isso geralmente desaparece em algumas horas. Outros sintomas podem incluir o aumento da produção de escarro, às vezes com manchas de sangue no muco e uma febre transitória que pode ocorrer algumas horas após o procedimento. Isso geralmente desaparece em algumas horas e pode ser aliviado tomando paracetamol. Não deve haver sequelas duradouras.

Riscos sérios são raros, mas incluem pneumotórax (1 em 2.000 casos) e sangramento significativo. Os participantes serão monitorados de perto após o procedimento e, caso surja alguma complicação grave, eles receberão o tratamento adequado no hospital.

Coleta de condensado de ar exalado (EBC). O EBC será coletado solicitando ao sujeito que respire normalmente em um aparelho portátil de coleta de respiração da Respire Diagnostics, Imperial College, que resfriará a respiração exalada para permitir a condensação do ar exalado. O sujeito respirará por 2 períodos de 5 minutos cada separados por um descanso de 3-4 minutos para permitir a coleta de até 500 microlitros (uL) de líquido. O líquido será armazenado para posterior análise.

Coleta de amostra de sangue O sangue venoso (30 cc) será coletado de uma veia do antebraço. Este teste causa um desconforto transitório quando uma agulha é usada para obter a amostra de sangue. A amostra de sangue será usada para medir várias proteínas e para obter glóbulos brancos para obter alguns tipos de células-tronco.

Exame laringoscópico contínuo O exame laringoscópico contínuo é realizado com base na metodologia anterior. O teste de laringoscopia contínua é realizado colocando um nasendoscópio de fibra óptica na nasofaringe posterior e fixando-o usando um arnês especializado. Uma pequena quantidade de gel lubrificante é usada para facilitar a passagem do endoscópio. As imagens de vídeo da entrada laríngea são, posteriormente, gravadas continuamente enquanto um sujeito realiza várias manobras, incluindo movimentos respiratórios e tosse. Esses movimentos serão observados e registrados antes e após os vários aspectos do protocolo de desafio e, assim, nos permitem avaliar anormalidades do movimento laríngeo e, por exemplo, posição das pregas vocais. O tamanho e a mudança no tamanho da abertura glótica serão avaliados.

Provocação de tosse com capsaicina A provocação com capsaicina é realizada conforme estabelecido em nosso laboratório.

Questionário de tosse de Leicester. Isso será usado para avaliar o impacto da tosse crônica na qualidade de vida dos pacientes.

Medição da frequência da tosse A frequência da tosse será medida objetivamente com um monitor de registro de tosse Hyfe por 48 horas.

Todos os participantes inscritos no estudo receberão um telefone ou relógio Android dedicado carregado com o aplicativo Hyfe Research para monitorar e registrar seus sons de tosse.

O registro da tosse incluirá 5 tosses solicitadas no momento da inscrição no estudo para calibração. A equipe do estudo terá a capacidade de monitorar remotamente o acúmulo de tosse para cada participante em tempo real com o Painel da Plataforma de Pesquisa Hyfe - verificando assim, conforme necessário, se os telefones estão ligados e funcionando adequadamente.

Após a conclusão do estudo, um membro treinado da equipe do estudo recuperará os telefones e garantirá que os dados tenham sido carregados automaticamente no servidor Hyfe.

Avaliação da função laríngea por questionário Utilizaremos o Laryngeal Hypersensitivity Questionnaire para avaliar a disfunção laríngea.

Indução do escarro O escarro é induzido por inalação de um aerossol de solução salina estéril a 3% e posteriormente aumentando para 4% e 5% durante 3 períodos de 5 minutos cada. As amostras de escarro são coletadas em potes estéreis.

Os tampões de escarro são selecionados e uma porção é usada para realizar contagens diferenciais de células. Para realizar contagens diferenciais de células, ditiotreitol é adicionado ao tampão de escarro e misturado vigorosamente em um agitador de placas para solubilizar o escarro. Os citopins são então preparados e as contagens diferenciais de células são obtidas.

Além disso, algumas das células serão colocadas em RNA posteriormente para análise de RNAseq. O sobrenadante será guardado para posterior dosagem de biomarcadores neuroimunes.

Medições espirométricas A espirometria (FEV1 e capacidade vital forçada, CVF) é medida usando um espirômetro de cunha seca (Vitalograph, Buckinghamshire, Reino Unido).

Óxido nítrico exalado fracionário (FeNO) O nível de óxido nítrico exalado fracionário (FeNO) é medido usando um monitor FeNO portátil (NObreath; Bedfont Scientific Ltd, Rochester, Reino Unido) a um fluxo expiratório constante de 0,05 L/s.

Espécimes de broncoscopia (i) Escovações brônquicas: (a) lâminas com células aderidas serão obtidas e preservadas para posterior análise imuno-histoquímica (b) células serão colocadas em RNA posteriormente para extração posterior para análise de RNAseq (c) células serão colocadas em cultura .

(ii) Biópsias brônquicas: Seções de cinco μm serão cortadas e coradas com hematoxilina e eosina para avaliar a morfologia. Os investigadores medirão a extensão da inflamação e remodelação nessas biópsias, conforme descrito anteriormente. Além disso, essas seções serão utilizadas para uma série de investigações imunohistoquímicas para localização de ATP e outros biomarcadores neuroimunes associados de interesse.

(iii) Lavado broncoalveolar: As células do lavado broncoalveolar serão colocadas em citospin para contagem de células diferenciais. Algumas das células serão mantidas em RNAlater para RNAseq. O fluido BAL sobrenadante será mantido para análise posterior de marcadores neuroimunes, incluindo ATP.