Receptor ATP i P2X3 w przewlekłym kaszlu

Oto cele tego badania:

1. Określić, czy ATP jest obecne lub uwalniane w drogach oddechowych pacjentów z idiopatycznym przewlekłym kaszlem
2. Ustal, czy występuje wzrost wrażliwości na kaszel i wrażliwości krtani na egzogenny ATP
3. Zbadaj wpływ egzogennego ATP na odpowiedź zapalną w górnych i dolnych drogach oddechowych.

Mierniki rezultatu

Oto wszystkie podstawowe wskaźniki wyników tego badania:

1. Obecność ATP w drogach oddechowych pacjentów z idiopatycznym przewlekłym kaszlem a lokalizacja receptorów P2X2/3 w drogach oddechowych
2. Wrażliwość na kaszel i wrażliwość krtani na egzogenny ATP
3. Odpowiedź zapalna w górnych i dolnych drogach oddechowych na egzogenny ATP.

Zgoda na projekt badania zostanie uzyskana przed badaniem przesiewowym. Badanie przesiewowe: Uczestnicy zostaną poddani badaniu przesiewowemu przed podjęciem studiów. Zwykli pacjenci, którzy nie kaszlą, zostaną zapytani, czy w przeszłości mieli kaszel i czy nie powinni mieć przewlekłego kaszlu przez co najmniej 8 tygodni. Uczestnicy z przewlekłym kaszlem muszą spełniać definicję przewlekłego kaszlu trwającego dłużej niż 8 tygodni. Uczestnicy ci będą rekrutowani z kliniki Royal Brompton Hospital Cough. Będziemy stosować kryteria włączenia i wykluczenia wymienione poniżej w odniesieniu do potwierdzenia kwalifikowalności.

Badanie 1 i 2 Uczestnicy będą uczestniczyć w tym projekcie badawczym łącznie przez 3 miesiące.

Niniejsze studium będzie składało się z dwóch części, które mogą nie być ułożone chronologicznie:

Studium 1. Po rekrutacji osoby wezmą udział w bronchoskopii światłowodowej.

Badanie 2: Uczestnicy wezmą udział w badaniu wpływu wdychania nebulizowanego ATP. Badani będą badani przez 2 dni oddzielone co najmniej 5 dniami. Każdego dnia, po pomiarach czynności płuc, FeNO i kwestionariuszach kaszlu, pacjent będzie wdychał sól fizjologiczną lub roztwór ATP z nebulizatora, po czym przeprowadzana będzie nadwrażliwość krtani, prowokacja kaszlu z kapsaicyną i indukcja plwociny. Kolejność prowokacji ATP lub solą fizjologiczną zostanie wybrana losowo, a podawanie którejkolwiek z nich będzie zaślepione dla pacjentów i badaczy mierzących odpowiedź na prowokację.

Populacja badana:

Będzie to badanie w jednym miejscu. Badacze zrekrutują 12 pacjentów z przewlekłym kaszlem uczęszczających do naszej kliniki kaszlu w Royal Brompton Hospital oraz 8 zdrowych osób kontrolnych (dopasowanych wiekowo i płciowo).

Uczestnicy obojga płci z idiopatycznym przewlekłym kaszlem będą badani i powinni mieć przewlekły kaszel trwający co najmniej 8 tygodni i powinni być obserwowani w Poradni Kaszelowej przez co najmniej 6 miesięcy. Uczestnicy ci przejdą protokół ze ścieżką diagnostyczną, zgodnie z zaleceniami Europejskiego Towarzystwa Chorób Płuc w zakresie leczenia kaszlu. Uczestnicy mieliby albo możliwą do zidentyfikowania przyczynę kaszlu, u której nie powiodły się terapie ukierunkowane na zidentyfikowaną przyczynę, albo zostaliby sklasyfikowani jako przewlekły kaszel idiopatyczny, w przypadku którego nie znaleziono żadnej możliwej do zidentyfikowania przyczyny.

Osoby kontrolne, które nie kaszlą, będą rekrutowane za pośrednictwem ogłoszeń w szpitalu i lokalnych gazetach.

Badanie Interwencja i procedury Bronchoskopia światłowodowa Bronchoskopia jest standardową procedurą diagnostyczną i zostanie przeprowadzona przez doświadczonego lekarza zespołu badawczego.

Bronchoskop światłowodowy przechodzi przez kanały nosowe lub część ustną gardła przed wejściem do tchawicy. Kanały nosowe będą preferowaną drogą, ale w przypadku, gdy nie można tego zrobić przez kanały nosowe, zostanie wykorzystana część ustna gardła. Płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe (BAL) zostanie przeprowadzone z prawego płata środkowego przy użyciu podgrzanej 0,9% soli fizjologicznej z 4 kolejnymi porcjami po 60 ml. Następnie bronchoskopista pobierze próbki komórek wyściełających drogi oddechowe za pomocą szczoteczki i kleszczyków, które umożliwiają pobranie małych fragmentów tkanki.

Po zabiegu uczestnik zostanie przeniesiony z sali zabiegowej na salę pooperacyjną, gdzie będzie pod opieką personelu pielęgniarskiego. W przypadku skurczu oskrzeli zostanie podany salbutamol w nebulizacji, aw razie potrzeby zostanie zastosowana terapia kortykosteroidami. Kiedy stanie się stabilny i nie będzie już wymagał tlenu i nie będzie już senny, zostanie wypisany po ocenie przeprowadzonej przez lekarzy prowadzących badania. Lekarz może jednak zdecydować, że musisz pozostać pod obserwacją do czasu wypisania do domu. Każdy pacjent, któremu podano midazolam podczas zabiegu, zostanie poproszony o obecność odpowiedzialnej osoby dorosłej, która tego dnia będzie towarzyszyć mu w domu.

Przed zabiegiem stosowane jest znieczulenie miejscowe, a uczestnicy mogą odczuwać drętwienie ust lub gardła. Niektórym pacjentom, jeśli jest to bezpieczne, podaje się lek przeciwlękowy (midazolam) w małych dawkach przez kaniulę. Zwykle jest to tolerowane bez problemu.

Po zabiegu uczestnicy mogą odczuwać ból gardła, chrypkę lub kaszel z powodu podrażnienia dróg oddechowych, ale zazwyczaj ustępują one w ciągu kilku godzin. Inne objawy to zwiększone wydzielanie plwociny, czasami z krwistymi smugami śluzu i przemijająca gorączka, która może wystąpić po kilku godzinach od zabiegu. Zwykle ustępuje w ciągu kilku godzin i można go złagodzić, przyjmując paracetamol. Nie powinno być długotrwałych następstw.

Poważne zagrożenia są rzadkie, ale obejmują odmę opłucnową (1 na 2000 przypadków) i znaczne krwawienie. Po zabiegu uczestnicy będą pod ścisłą obserwacją, aw przypadku wystąpienia poważnych komplikacji otrzymają odpowiednie leczenie w szpitalu.

Gromadzenie kondensatu wydychanego powietrza (EBC). EBC zostanie zebrane poprzez poproszenie pacjenta o normalne oddychanie na ręczny aparat do zbierania oddechów firmy Respire Diagnostics, Imperial College, który ochłodzi wydychany oddech, aby umożliwić kondensację wydychanego powietrza. Pacjent będzie oddychał przez 2 okresy po 5 minut, każdy oddzielony 3-4 minutami odpoczynku, aby umożliwić zebranie do 500 mikrolitrów (ul) płynu. Ciecz będzie przechowywana do późniejszej analizy.

Pobieranie krwi Krew żylna (30 ml) zostanie pobrana z żyły przedramienia. Ten test powoduje przejściowy dyskomfort, ponieważ do pobrania próbki krwi używana jest igła. Próbka krwi zostanie wykorzystana do pomiaru różnych białek oraz do pozyskiwania białych krwinek w celu uzyskania niektórych typów komórek macierzystych.

Ciągłe badanie laryngoskopowe Ciągłe badanie laryngoskopowe wykonuje się w oparciu o dotychczasową metodologię. Ciągłe badanie laryngoskopowe polega na umieszczeniu nasendoskopu światłowodowego w tylnej części nosogardzieli i zabezpieczeniu go specjalistycznym nakryciem głowy. Niewielka ilość żelu nawilżającego służy do ułatwienia przejścia przez lunetę. Obrazy wideo wlotu krtani są następnie rejestrowane w sposób ciągły, podczas gdy pacjent wykonuje różne manewry, w tym ruchy oddechowe i kaszel. Ruchy te będą obserwowane i rejestrowane przed i po różnych aspektach protokołu prowokacji, co pozwoli nam ocenić nieprawidłowości ruchowe krtani i na przykład położenie fałdów głosowych. Oceniony zostanie rozmiar i zmiana rozmiaru otworu głośni.

Prowokacja na kaszel z kapsaicyną Prowokacja na kaszel z kapsaicyną jest przeprowadzana zgodnie z ustaleniami w naszym laboratorium.

Kwestionariusz kaszlu Leicester. Posłuży to do oceny wpływu przewlekłego kaszlu na jakość życia pacjentów.

Pomiar częstotliwości kaszlu Częstotliwość kaszlu będzie mierzona obiektywnie za pomocą monitora rejestrującego kaszel Hyfe przez 48 godzin.

Wszyscy uczestnicy badania otrzymają dedykowany telefon z Androidem lub zegarek z zainstalowaną aplikacją Hyfe Research do monitorowania i rejestrowania odgłosów kaszlu.

Rejestracja kaszlu będzie obejmować 5 zamówionych kaszlnięć w momencie rejestracji do badania w celu kalibracji. Personel badawczy będzie miał możliwość zdalnego monitorowania narastania kaszlu u każdego uczestnika w czasie rzeczywistym za pomocą pulpitu nawigacyjnego platformy badawczej Hyfe – w ten sposób w razie potrzeby weryfikując, czy telefony są włączone i działają prawidłowo.

Po zakończeniu badania wyszkolony członek personelu badawczego odzyska telefony i upewni się, że dane zostały automatycznie przesłane na serwer Hyfe.

Ocena czynności krtani za pomocą kwestionariusza Do oceny dysfunkcji krtani wykorzystamy Kwestionariusz Nadwrażliwości Krtani.

Indukcja plwociny Plwocinę indukuje się przez inhalację aerozolu sterylnego 3% roztworu soli fizjologicznej, a następnie zwiększa się do 4% i 5% w 3 okresach po 5 minut każdy. Próbki plwociny zbiera się do sterylnych naczyń.

Wybiera się czopki plwociny i jedną porcję stosuje się do różnicowego zliczania komórek. W celu przeprowadzenia różnicowego zliczenia komórek, do czopu plwociny dodaje się ditiotreitol i energicznie miesza na wytrząsarce do płytek w celu rozpuszczenia plwociny. Następnie przygotowuje się cytospiny i uzyskuje zróżnicowaną liczbę komórek.

Ponadto niektóre komórki zostaną później umieszczone w RNA do analizy RNAseq. Supernatant będzie przechowywany do późniejszego oznaczenia biomarkerów neuroimmunologicznych.

Pomiary spirometryczne Spirometrię (FEV1 i natężoną pojemność życiową, FVC) mierzy się za pomocą spirometru z suchym klinem (Vitalograph, Buckinghamshire, Wielka Brytania).

Frakcyjny wydychany tlenek azotu (FeNO) Poziom ułamkowego tlenku azotu w wydychanym powietrzu (FeNO) jest mierzony za pomocą przenośnego monitora FeNO (NObreath; Bedfont Scientific Ltd, Rochester, Wielka Brytania) przy stałym przepływie wydechowym 0,05 l/s.

Próbki z bronchoskopii (i) Wymazy z oskrzeli: (a) preparaty z przyczepionymi komórkami zostaną pobrane i zachowane do późniejszej analizy immunohistochemicznej (b) komórki zostaną później umieszczone w RNA w celu późniejszej ekstrakcji do analizy RNAseq (c) komórki zostaną umieszczone w hodowli .

(ii) Biopsje oskrzeli: Skrawki o długości pięciu μm zostaną pocięte i wybarwione hematoksyliną i eozyną w celu oceny morfologii. Badacze zmierzą stopień zapalenia i przebudowy w tych biopsjach, jak opisano wcześniej. Ponadto sekcje te zostaną wykorzystane do serii badań immunohistochemicznych w celu zlokalizowania ATP i innych powiązanych biomarkerów neuroimmunologicznych będących przedmiotem zainteresowania.

(iii) Płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe: Komórki z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego zostaną umieszczone w cytospinie w celu zliczenia różnicujących komórek. Niektóre komórki będą przechowywane w RNAlater dla RNAseq. Supernatant płynu BAL będzie przechowywany do późniejszego oznaczenia markerów neuroimmunologicznych, w tym ATP.