慢性咳嗽中的 ATP 和 P2X3 受体

这些是本研究的目标：

1. 确定特发性慢性咳嗽患者气道中是否存在或释放 ATP
2. 确定咳嗽敏感性和喉部对外源性 ATP 的敏感性是否增加
3. 检查外源性 ATP 对上呼吸道和下呼吸道炎症反应的影响。

结果措施

这些都是本研究的主要结果指标：

1. 特发性慢性咳嗽患者气道中 ATP 的存在及 P2X2/3 受体在气道中的定位
2. 外源性 ATP 的咳嗽敏感性和喉部敏感性
3. 上呼吸道和下呼吸道对外源性 ATP 的炎症反应。

将在筛选前获得研究设计同意书。 筛选：参与者将在参与研究之前接受筛选。 正常不咳嗽的患者会被问及有无咳嗽史，应无慢性咳嗽8周以上。 那些患有慢性咳嗽的参与者需要满足持续超过 8 周的慢性咳嗽的定义。 这些参与者将从皇家布朗普顿医院咳嗽诊所招募。 我们将使用以下关于资格确认的纳入和排除标准。

研究 1 和 2 的参与者将在这个研究项目中进行总共 3 个月。

这项研究将分为两部分，可能不按时间顺序排列：

研究 1。 招募后，受试者将参加纤维支气管镜检查。

研究 2：受试者将参与吸入雾化 ATP 的影响研究。 受试者将在至少相隔 5 天的 2 天内进行研究。 每天，在测量肺功能、FeNO 和咳嗽问卷后，受试者将从雾化器中吸入生理盐水或 ATP 溶液，然后进行喉过敏、辣椒素咳嗽挑战和痰诱导。 ATP 或生理盐水挑战的顺序将是随机的，并且任何一种的管理都将对患者和研究者不知情，以测量对挑战的反应。

对象人群：

这将是一个单一的站点研究。 研究人员将招募 12 名在皇家布朗普顿医院咳嗽诊所就诊的慢性咳嗽患者和 8 名对照健康受试者（年龄和性别相匹配）。

将研究患有特发性慢性咳嗽的任何性别的参与者，他们应该至少有 8 周的慢性咳嗽，并且应该在咳嗽门诊接受至少 6 个月的随访。 这些参与者将接受欧洲呼吸学会咳嗽管理指南推荐的诊断途径方案。 参与者要么有可识别的咳嗽原因，但针对已识别原因的治疗失败，要么被归类为慢性特发性咳嗽，但未发现可识别的原因。

对照非咳嗽受试者将通过医院内的广告和当地报纸服务招募。

研究干预和程序 纤维支气管镜检查 支气管镜检查是标准诊断程序，将由研究团队中经验丰富的医生进行。

在进入气管之前，纤维支气管镜将通过鼻道或口咽。 鼻道将是首选途径，但如果无法通过鼻道完成，则将使用口咽。 支气管肺泡灌洗 (BAL) 将从右中叶使用加热的 0.9% 生理盐水和 4 个连续等分的 60ml 进行。 然后，支气管镜医师将使用刷子和镊子采集气道内壁的细胞样本，后者允许获取小块组织。

手术后，参与者将从手术室转移到恢复区，在那里他/她将受到护理人员的监督。 如果出现任何支气管收缩，他/她将接受雾化沙丁胺醇治疗，如果需要，将给予皮质类固醇治疗。 一旦稳定，不再需要氧气，不再昏昏欲睡，他/她将在研究医生检查后出院。 但是，医生可能会决定您需要接受观察，直到身体健康才能出院回家。 任何在手术过程中服用咪达唑仑的患者都将被要求在当天有一名负责任的成年人陪同他们回家。

在手术前使用局部麻醉剂，参与者可能会感到嘴巴或喉咙发麻。 在一些患者中，如果这样做是安全的，抗焦虑药（咪达唑仑）将通过插管以小剂量给药。 这通常是可以容忍的，没有问题。

手术后，由于刺激呼吸道，参与者可能会出现喉咙痛、声音嘶哑或咳嗽，但这通常会在几个小时内消失。 其他症状可能包括痰液增多，有时粘液带血丝，手术后数小时可能出现短暂发烧。 这通常会在几个小时内解决，可以通过服用扑热息痛来缓解。 应该不会有长期的后遗症。

严重风险很少见，但包括气胸（2000 例中有 1 例）和大量出血。 参与者将在手术后受到密切监测，如果出现任何严重的并发症，他们将在医院接受适当的治疗。

呼出气冷凝物 (EBC) 收集。 EBC 将通过要求受试者正常呼吸到来自帝国理工学院 Respire Diagnostics 的手持式呼吸收集装置上进行收集，该装置将冷却呼出的气体以允许呼出的空气冷凝。 受试者将呼吸 2 次，每次 5 分钟，每次休息 3-4 分钟，以收集多达 500 微升 (uL) 的液体。 液体将被储存以供以后分析。

血液样本采集 将从前臂的静脉中采集静脉血 (30 cc)。 该测试会导致短暂的不适，因为使用针头采集血液样本。 血液样本将用于测量各种蛋白质和获取白细胞以获得某些类型的干细胞。

连续喉镜检查 连续喉镜检查是根据以前的方法进行的。 连续喉镜检查是通过在鼻咽后部放置纤维鼻内窥镜并使用专业头盔将其固定来进行的。 少量润滑胶用于简化范围的通过。 此后，在受试者进行包括呼吸运动和咳嗽在内的各种动作时，连续记录喉入口的视频图像。 这些运动将在挑战协议的各个方面之前和之后被观察和记录，从而使我们能够评估喉部运动异常，例如声带的位置。 将评估声门孔的大小和大小变化。

辣椒素咳嗽挑战 辣椒素挑战是按照我们实验室的规定进行的。

莱斯特咳嗽问卷。 这将用于评估慢性咳嗽对患者生活质量的影响。

咳嗽频率的测量咳嗽频率将用Hyfe咳嗽记录监测器客观地测量48小时。

所有登记的研究参与者都将获得专用的 Android 手机或装有 Hyfe Research 应用程序的手表，以监测和记录他们的咳嗽声。

咳嗽记录将包括研究登记时的 5 次主动咳嗽以进行校准。 研究人员将能够使用 Hyfe 研究平台仪表板实时远程监控每个参与者的咳嗽累积情况——从而根据需要验证手机是否开机并正常运行。

研究完成后，训练有素的研究人员将取回手机并确保数据已自动上传到 Hyfe 服务器。

通过问卷评估喉功能我们将使用喉过敏问卷来评估喉功能障碍。

痰的诱导 吸入 3% 无菌盐水溶液的气雾剂，然后在 3 个阶段，每个阶段 5 分钟内增加到 4% 和 5%，从而诱导产生痰。 将痰液样本收集到无菌罐中。

选择痰栓，其中一份用于进行微分细胞计数。 为进行细胞分类计数，将二硫苏糖醇添加到痰栓中并在平板振荡器上剧烈混合以溶解痰液。 然后制备细胞离心涂片，并获得细胞分类计数。

此外，一些细胞稍后将被放入 RNA 中进行 RNAseq 分析。 将保留上清液用于以后的神经免疫生物标志物测定。

肺量计测量 肺量计（FEV1 和用力肺活量，FVC）是使用干式楔形肺活量计（Vitalograph，Buckinghamshire，UK）测量的。

呼出一氧化氮分数 (FeNO) 呼出一氧化氮分数 (FeNO) 水平使用便携式 FeNO 监测仪（NObreath；Bedfont Scientific Ltd，Rochester，UK）在 0.05 L/s 的恒定呼气流量下测量。

来自支气管镜检查的标本 (i) 支气管刷洗：(a) 将获得并保存附有细胞的载玻片用于以后的免疫组织化学分析 (b) 细胞将被放置在 RNA 中以便稍后提取用于 RNAseq 分析 (c) 细胞将被放置在培养物中.

(ii) 支气管活检：切下 5 μm 切片并用苏木精和曙红染色以评估形态。 如前所述，研究人员将测量这些活检的炎症和重塑程度。 此外，这些部分将用于 ATP 和其他感兴趣的相关神经免疫生物标志物定位的一系列免疫组织化学研究。

(iii) 支气管肺泡灌洗液：将支气管肺泡灌洗液细胞置于细胞离心涂片中，用于对分化细胞进行计数。 一些细胞将保存在 RNAlater 中用于 RNAseq。 将保留上清液 BAL 液用于以后测定包括 ATP 在内的神经免疫标记物。