インビボでのヒトメラノサイトにおけるUVおよび可視光誘導遺伝子の単一細胞トランスクリプトーム同定 (melatrans)

病状および病理は、皮膚の色素沈着を研究した。 研究の正当化/理論的根拠 紫外線は、皮膚色素沈着の生理学的刺激であり、メラノーマの主な病因でもあります。 最近では、可視（青色）光も皮膚の色素沈着を誘発することが報告されていますが、明らかな発がん性効果はありません. メラノサイトで紫外線によって誘発される遺伝子を特定し、光誘発性皮膚色素沈着の原因となるメカニズムを理解するための研究が行われました。 しかし、表皮内のこれらの細胞の希少性 (細胞の 3%) は、これまでのところ、この目標を達成するための克服できない障害となっています。 同じことが可視光にも当てはまり、データはさらに不安定です。 単一細胞または単一核レベルでのトランスクリプトーム解析技術の出現により、この障害を克服し、その場でのメラノサイトおよび他の皮膚細胞 (ケラチノサイト、線維芽細胞) における UV および青色光の転写効果を特定できるようになります。 メラノサイトやその他の細胞における紫外線と青色光によって調節される分子メカニズムを理解することで、皮膚の色素沈着における新しい重要なステップが明らかになります。 私たちの研究からのデータは、新しい光保護剤や色素性病変の新しい治療法を開発するために使用されます。 主な目的 in vivo でのヒトメラノサイトにおける太陽紫外線 (UV) 放射または青色光によって誘発される遺伝子発現の変動について説明します。 副次的な目的 紫外線 (UV) 放射、日光、または他の皮膚細胞の青色光によって誘発される遺伝子発現の変動について説明します。 評価基準 単一細胞トランスクリプトーム解析 皮膚切片の免疫標識 母集団と封入体の数 健康な男性志願者、フィッツパトリック スケールでフォトタイプ III、年齢 25 + 5 歳、肥満度が同程度 (ボディ マス インデックス 20 ～ 28)。 2 包含 研究期間 研究の合計期間: 12 か月 包含フェーズの期間: 1 か月 患者の参加期間: 11 日間 方法論 2 人の健康なボランティアが前腕領域で UV または可視光にさらされます。 吸引水ぶくれ、および皮膚生検が試験領域で行われ、トランスクリプトームのための吸引気泡、免疫組織化学のための生検が行われます。 異なる細胞タイプにおける遺伝子発現の研究​​は、10Xゲノミクスアプローチを使用して、単一細胞のRNA-Seqによって行われます。 最後に、結果の検証は、特定の抗体または RNA スコープによる免疫染色によって行われます。 調査のコース - 1 日目: 調査は、前腕の領域の各被験者の最小紅斑量 (MED) の決定から始まります。 この決定は、6 つの選択されたテスト領域 (各 1.3 cm²) で、25% の UVB + UVA 光線 (シミュレートされた太陽紫外線スペクトル) の増加段階で 6 つの異なる用量を投与することによって実行されます。 露出領域は、2 日目の露出の 24 + 2 時間後に評価され、紅斑は評価されます。可視光でcm2。 3 番目の非照射領域は、コントロールとして機能します。 3 日目: 3 つのテスト領域のそれぞれで、皮膚の水ぶくれと生検が行われます。 ブリスター液で収集された細胞は、免疫組織化学による検証のためのトランスクリプトームおよび生検に使用されます。 11日目: 被験者は、サンプリング日から8日後、すなわち11日目に、縫合糸の除去と治癒のモニタリングのために再び見られます。 同じ日に、各テスト領域で誘発された UV 色素沈着のレベルの評価が視覚的および比色分析によって行われます。