Encellig transkriptomidentifiering av UV- och synligt ljus-inducerade gener i humana melanocyter in vivo (melatrans)

Medicinskt tillstånd och patologi studerade hudpigmentering. Motivering / motivering för studien UV är både den fysiologiska stimulansen för hudpigmentering och den främsta etiologiska faktorn vid melanom. På senare tid har synligt (blått) ljus också beskrivits för att inducera hudpigmentering, utan någon uppenbar pro-cancerogen effekt. Studier har utförts för att identifiera gener inducerade av UV i melanocyter och för att förstå de mekanismer som är ansvariga för fotoinducerad hudpigmentering. Men sällsyntheten av dessa celler i epidermis (3 % av cellerna) har hittills varit ett oöverstigligt hinder för att uppnå detta mål. Detsamma gäller för synligt ljus, för vilket data är ännu mer ojämn. Tillkomsten av transkriptomanalystekniker på encells- eller singelkärnanivå kommer att göra det möjligt för oss att övervinna detta hinder och identifiera transkriptionseffekterna av UV och blått ljus i melanocyter in-situ, såväl som i andra hudceller (keratinocyter, fibroblaster). Att förstå de molekylära mekanismerna som regleras av UV och blått ljus i melanocyter och andra celler kommer att avslöja nya nyckelsteg i hudpigmentering. Data från vår studie kommer att användas för att utveckla nya fotoskyddande medel samt nya behandlingar för pigmentsjukdomar. Primärt mål Beskriv variationerna i genuttryck som induceras av ultraviolett (UV) solstrålning eller blått ljus i humana melanocyter in vivo. Sekundära mål Beskriv variationerna i genuttryck som induceras av ultraviolett (UV) strålning solljus eller blått ljus i andra hudceller. Utvärderingskriterier Encellig transkriptomanalys Immunmärkning på hudsnitt Population och antal inklusioner Friska manliga frivilliga, fototyp III på Fitzpatrick-skalan, ålder 25 + 5 år och med liknande korpulens (kroppsmassaindex mellan 20 och 28). 2 inklusioner Studiens varaktighet Total längd av studien: 12 månader Varaktighet av inklusionsfasen: 1 månad Varaktighet av deltagande för en patient: 11 dagar Metod Två friska frivilliga kommer att exponeras för UV eller synligt ljus i underarmsregionen. Sugblåsor och hudbiopsier kommer att utföras i testområdena, sugbubblor för transkriptom, biopsier för immunhistokemi. Studiet av genuttryck i de olika celltyperna kommer att göras av RNA-Seq på enstaka celler, med hjälp av 10X genomics-metoden. Slutligen kommer en validering av resultaten att utföras genom immunfärgning med specifika antikroppar eller RNA-Scope. Studiens gång - Dag 1: Studien börjar med bestämning av den minimala erytemiska dosen (MED) för varje försöksperson i underarmsområdet. Denna bestämning kommer att utföras med hjälp av administrering av sex olika doser i ökande stadier av 25 % av UVB + UVA-strålar (simulerat ultraviolett solspektrum) på sex utvalda testområden (vardera 1,3 cm²). Exponerade områden kommer att bedömas 24 + 2 timmar efter exponering dag 2, erytem kommer att bedömas Dag 2: Avläsning av DEM, och bestrålningar på två zoner i området för underarmarna med en dos på 2 DEM UV respektive 48J/ cm2 i synligt ljus. Ett tredje icke-bestrålat område kommer att fungera som kontroll. Dag 3: En hudblåsa och biopsi kommer att utföras på vart och ett av de tre testområdena. Celler som samlas in i blistervätskan kommer att användas för transkriptomet och biopsier för validering med immunhistokemi. Dag 11: Försökspersonerna kommer att ses igen åtta dagar efter provtagningsdagen, dvs på dag 11 för borttagning av suturer och övervakning av läkning. Samma dag kommer en utvärdering av nivån av UV-pigmentering inducerad på varje testområde att utföras visuellt och genom kolorimetri.