Identificação de transcriptoma de célula única de genes induzidos por luz UV e visível em melanócitos humanos in vivo (melatrans)

Condição médica e patologia estudaram a pigmentação da pele. Justificativa/justificativa do estudo Os UV são tanto o estímulo fisiológico para a pigmentação da pele quanto o principal fator etiológico do melanoma. Recentemente, a luz visível (azul) também foi descrita como indutora de pigmentação da pele, sem nenhum efeito pró-carcinogênico óbvio. Estudos têm sido realizados para identificar genes induzidos por UV em melanócitos e entender os mecanismos responsáveis ​​pela pigmentação cutânea fotoinduzida. No entanto, a raridade dessas células na epiderme (3% das células) tem sido até agora um obstáculo intransponível para atingir esse objetivo. O mesmo vale para a luz visível, para a qual os dados são ainda mais irregulares. O advento das técnicas de análise do transcriptoma ao nível de uma única célula ou de um único núcleo nos permitirá superar esse obstáculo e identificar os efeitos transcricionais do UV e da luz azul nos melanócitos in situ, bem como em outras células da pele (queratinócitos, fibroblastos). Compreender os mecanismos moleculares regulados pela luz UV e azul nos melanócitos e outras células revelará novos passos importantes na pigmentação da pele. Os dados do nosso estudo serão usados ​​para desenvolver novos agentes fotoprotetores, bem como novos tratamentos para patologias pigmentares. Objetivo primário Descrever as variações na expressão gênica induzidas pela radiação solar ultravioleta (UV) ou luz azul em melanócitos humanos in vivo. Objetivos secundários Descrever as variações na expressão gênica induzidas pela radiação ultravioleta (UV) da luz solar ou luz azul em outras células da pele. Critérios de avaliação Análise do transcriptoma unicelular Imunomarcação em secções de pele População e número de inclusões Voluntários saudáveis ​​do sexo masculino, fototipo III na escala de Fitzpatrick, idade 25 + 5 anos e corpulência semelhante (índice de massa corporal entre 20 e 28). 2 inclusões Duração do estudo Duração total do estudo: 12 meses Duração da fase de inclusão: 1 mês Duração da participação de um paciente: 11 dias Metodologia Dois voluntários saudáveis ​​serão expostos a UV ou luz visível na região do antebraço. Serão realizadas bolhas de sucção, e biópsias de pele nas áreas de teste, bolhas de sucção para transcriptoma, biópsias para imuno-histoquímica. O estudo da expressão gênica nos diferentes tipos celulares será feito por RNA-Seq em células únicas, utilizando a abordagem genômica 10X. Por fim, será realizada uma validação dos resultados por imunocoloração com anticorpos específicos ou RNA-Scope. Curso do estudo - Dia 1: O estudo começa com a determinação da Dose Eritemal Mínima (MED) para cada sujeito na região dos antebraços. Essa determinação será realizada por meio da administração de seis diferentes doses em estágios crescentes de 25% dos raios UVB + UVA (espectro ultravioleta solar simulado) em seis áreas de teste selecionadas (cada uma com 1,3 cm²). As áreas expostas serão avaliadas 24 + 2 horas após a exposição no Dia 2, o eritema será avaliado Dia 2: Leitura do DEM e irradiações em duas zonas na região dos antebraços com dose respectivamente de 2 DEM UV e 48J/ cm2 na luz visível. Uma terceira área não irradiada servirá como controle. Dia 3: Uma bolha de pele e uma biópsia serão realizadas em cada uma das três áreas de teste. As células coletadas no fluido da bolha serão utilizadas para o transcriptoma e biópsias para validação por imuno-histoquímica. Dia 11: Os indivíduos serão vistos novamente oito dias após o dia da amostragem, ou seja, no dia 11 para remoção de suturas e monitoramento da cicatrização. No mesmo dia, será realizada uma avaliação do nível de pigmentação UV induzida em cada área de teste visualmente e por colorimetria.