Enkeltcellet transkriptom identifikation af UV- og synligt lys-inducerede gener i humane melanocytter in vivo (melatrans)

Medicinsk tilstand og patologi studerede hudpigmentering. Begrundelse / begrundelse for undersøgelsen UV er både den fysiologiske stimulans for hudpigmentering og den vigtigste ætiologiske faktor i melanom. For nylig er synligt (blåt) lys også blevet beskrevet for at fremkalde hudpigmentering uden nogen åbenlys pro-kræftfremkaldende effekt. Undersøgelser er blevet udført for at identificere gener induceret af UV i melanocytter og for at forstå de mekanismer, der er ansvarlige for foto-induceret hudpigmentering. Sjældenheden af ​​disse celler i epidermis (3 % af cellerne) har dog hidtil været en uoverstigelig hindring for at nå dette mål. Det samme gælder for synligt lys, hvor dataene er endnu mere ujævne. Fremkomsten af ​​transkriptomanalyseteknikker på enkeltcelle- eller enkeltkerneniveau vil give os mulighed for at overvinde denne hindring og identificere de transkriptionelle virkninger af UV og blåt lys i melanocytter in-situ såvel som i andre hudceller (keratinocytter, fibroblaster). Forståelse af de molekylære mekanismer, der reguleres af UV og blåt lys i melanocytter og andre celler, vil afsløre nye nøgletrin i hudpigmentering. Dataene fra vores undersøgelse vil blive brugt til at udvikle nye fotobeskyttende midler samt nye behandlinger for pigmentpatologier. Primært mål Beskriv variationerne i genekspression induceret af solar ultraviolet (UV) stråling eller blåt lys i humane melanocytter in vivo. Sekundære mål Beskriv variationerne i genekspression induceret af ultraviolet (UV) stråling sollys eller blåt lys i andre hudceller. Evalueringskriterier Enkeltcellet transkriptomanalyse Immunmærkning på hudsnit Population og antal inklusioner Raske mandlige frivillige, fototype III på Fitzpatrick-skalaen, alder 25 + 5 år og med tilsvarende korpulens (body mass index mellem 20 og 28). 2 inklusioner Studiets varighed Samlet varighed af studiet: 12 måneder Varighed af inklusionsfasen: 1 måned Varighed af deltagelse for en patient: 11 dage Metode To raske frivillige vil blive udsat for UV eller synligt lys i underarmsregionen. Sugeblærer og hudbiopsier vil blive udført i testområderne, sugebobler til transkriptom, biopsier til immunhistokemi. Studiet af genekspression i de forskellige celletyper vil blive udført af RNA-Seq på enkeltceller, ved hjælp af 10X genomics tilgangen. Endelig vil en validering af resultaterne blive udført ved immunfarvning med specifikke antistoffer eller RNA-Scope. Undersøgelsens forløb - Dag 1: Undersøgelsen begynder med bestemmelsen af ​​den minimale erytemiske dosis (MED) for hvert individ i underarmens område. Denne bestemmelse vil blive udført ved hjælp af administration af seks forskellige doser i stigende stadier på 25 % af UVB + UVA stråler (simuleret solar ultraviolet spektrum) på seks udvalgte testområder (hver 1,3 cm²). Udsatte områder vil blive vurderet 24 + 2 timer efter eksponering på dag 2, erytem vil blive vurderet Dag 2: Aflæsning af DEM, og bestråling på to zoner i området af underarmene med henholdsvis en dosis på 2 DEM UV og 48J/ cm2 i synligt lys. Et tredje ikke-bestrålet område vil fungere som kontrol. Dag 3: En hudblister og biopsi vil blive udført på hvert af de tre testområder. Celler opsamlet i blistervæsken vil blive brugt til transkriptomet og biopsier til validering ved immunhistokemi. Dag 11: Forsøgspersonerne vil blive set igen otte dage efter prøvetagningsdagen, dvs. på dag 11 til fjernelse af suturer og overvågning af heling. Samme dag vil en evaluering af niveauet af UV-pigmentering induceret på hvert testområde blive udført visuelt og ved kolorimetri.