Identificación de transcriptomas unicelulares de genes inducidos por luz visible y UV en melanocitos humanos in vivo (melatrans)

Condición médica y patología estudiada pigmentación de la piel. Justificación/justificación del estudio Los rayos UV son tanto el estímulo fisiológico de la pigmentación de la piel como el principal factor etiológico del melanoma. Recientemente, también se ha descrito que la luz visible (azul) induce la pigmentación de la piel, sin ningún efecto pro-carcinogénico evidente. Se han llevado a cabo estudios para identificar genes inducidos por UV en melanocitos y comprender los mecanismos responsables de la pigmentación de la piel fotoinducida. Sin embargo, la rareza de estas células en la epidermis (3% de las células) ha sido hasta ahora un obstáculo insalvable para lograr este objetivo. Lo mismo ocurre con la luz visible, para la cual los datos son aún más irregulares. El advenimiento de las técnicas de análisis del transcriptoma a nivel de una sola célula o un solo núcleo nos permitirá superar este obstáculo e identificar los efectos transcripcionales de la luz ultravioleta y azul en los melanocitos in situ, así como en otras células de la piel (queratinocitos, fibroblastos). Comprender los mecanismos moleculares regulados por la luz ultravioleta y azul en los melanocitos y otras células revelará nuevos pasos clave en la pigmentación de la piel. Los datos de nuestro estudio se utilizarán para desarrollar nuevos agentes fotoprotectores, así como nuevos tratamientos para patologías pigmentarias. Objetivo principal Describir las variaciones en la expresión génica inducidas por la radiación solar ultravioleta (UV) o luz azul en melanocitos humanos in vivo. Objetivos secundarios Describir las variaciones en la expresión génica inducidas por la radiación ultravioleta (UV) del sol o la luz azul en otras células de la piel. Criterios de evaluación Análisis de transcriptomas unicelulares Inmunomarcaje en cortes de piel Población y número de inclusiones Voluntarios varones sanos, fototipo III en la escala de Fitzpatrick, edad 25 + 5 años y corpulencia similar (índice de masa corporal entre 20 y 28). 2 inclusiones Duración del estudio Duración total del estudio: 12 meses Duración de la fase de inclusión: 1 mes Duración de la participación de un paciente: 11 días Metodología Dos voluntarios sanos serán expuestos a luz UV o visible en la región del antebrazo. Se realizarán ampollas de succión, y biopsias de piel en las áreas de prueba, burbujas de succión para transcriptoma, biopsias para inmunohistoquímica. El estudio de la expresión génica en los diferentes tipos de células se realizará mediante RNA-Seq en células individuales, utilizando el enfoque de genómica 10X. Finalmente se realizará una validación de los resultados mediante inmunotinción con anticuerpos específicos o RNA-Scope. Curso del estudio - Día 1: El estudio comienza con la determinación de la Dosis Eritemal Mínima (MED) para cada sujeto en la región de los antebrazos. Esta determinación se realizará mediante la administración de seis dosis diferentes en etapas crecientes del 25% de rayos UVB + UVA (espectro ultravioleta solar simulado) en seis áreas de ensayo seleccionadas (cada una de 1,3 cm²). Las áreas expuestas se evaluarán 24 + 2 horas después de la exposición el día 2, el eritema se evaluará el día 2: Lectura del DEM e irradiaciones en dos zonas en la región de los antebrazos con una dosis de 2 DEM UV y 48J/ respectivamente. cm2 en luz visible. Una tercera área no irradiada servirá como control. Día 3: Se realizará una ampolla de piel y una biopsia en cada una de las tres áreas de prueba. Las células recogidas en el líquido de la ampolla se utilizarán para el transcriptoma y las biopsias para la validación mediante inmunohistoquímica. Día 11: Se volverá a ver a los sujetos ocho días después del día de la toma de muestras, es decir, el día 11 para retirar las suturas y controlar la cicatrización. El mismo día se realizará una evaluación del nivel de pigmentación UV inducida en cada zona de ensayo de forma visual y colorimétrica.